一株鱼腥藻来源的苯丙氨酸脱氨酶的突变体制造技术

本发明专利技术公开了一株鱼腥藻来源的苯丙氨酸脱氨酶的突变体，属于蛋白质工程。本发明专利技术得到的苯丙氨酸脱氨酶E75L，包括抗胰蛋白酶降解能力以及抵抗低pH的能力，都相比野生酶有了很大的提高。本发明专利技术提供的苯丙氨酸脱氨酶E75L，将在一定程度上促进苯丙氨酸脱氨酶在口服治疗苯丙酮尿症(PKU)中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株鱼腥藻来源的苯丙氨酸脱氨酶的突变体，属于蛋白质工程。
技术介绍
苯丙氨酸脱氨酶(PAL)可用于有效并长期式地治疗苯丙酮尿症(PKU)。因为其的方便有效，用该酶的口服方式越来越受关注。但是，由于肠道里的极端环境，使得该酶的应用受到一定的限制。一株鱼腥藻Anabaenavariabilis来源的PAL(Av-PAL)的突变体可以提高该酶在这方面的应用。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种耐酸性能与耐热性能都有改善的苯丙氨酸脱氨酶突变体，由SEQIDNO.1所示核苷酸序列编码。本专利技术还提供一种重组表达所述苯丙氨酸脱氨酶突变体的方法，是以大肠杆菌BL21为宿主，以pET28a为表达载体，将重组菌种子液接种于含卡那霉素的2YT表达培养基中，37℃、200r/min振荡培养至OD600至0.8-1.0时，加入诱导剂IPTG至0.1mM，20℃诱导16-18h苯丙氨酸脱氨酶突变体的表达；2YT表达培养基(蛋白胨16g/L、酵母提取物10g/L、NaCl5g/L)在本专利技术的一种实施方式中，还包括将重组菌体破碎后，收集上清，上清膜过滤后，用HisTrapHF柱分离得到苯丙氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苯丙氨酸脱氨酶突变体，其特征在于，由SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码。

【技术特征摘要】
1.一种苯丙氨酸脱氨酶突变体，其特征在于，由SEQIDNO.1所示核苷酸序列编码。2.编码权利要求1所述的苯丙氨酸脱氨酶突变体的基因。3.携带权利要求2所述基因的载体或细胞。4.一种重组表达权利要求1所述苯丙氨酸脱氨酶突变体的重组菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21为宿主，以pET28a为表达载体。5.一种重组表达权利要求1所述苯丙氨酸脱氨酶突变体的方法，其特征在于，是以大肠杆菌BL21为宿主，以pET28a为表达载体，将所得重组菌的种子液接种于含卡那霉素的2YT表达培养基中，37℃、200r/min振荡培养至OD600至0.8-...

【专利技术属性】
技术研发人员：周哲敏，张帆，周丽，崔文璟，刘中美，郭军玲，陆灿杰，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32