一种紫茎泽兰来源的倍半萜合酶、基因、载体、工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种紫茎泽兰来源的倍半萜合酶、基因、载体、工程菌及其应用，所述酶氨基酸序列为SEQ.ID NO.2所示。本发明专利技术中的催化剂源自高产β‑榄香烯的药用植物紫茎泽兰，体外活性证实，其可以催化底物FPP生成β‑榄香烯，最终榄香烯的产量达到7.499μg/mL。

【技术实现步骤摘要】
(一)
本专利技术涉及一种β-榄香烯的制备，特别涉及一种紫茎泽兰来源的倍半萜合酶、基因、载体、工程菌及其制备β-榄香烯的应用。(二)
技术介绍
榄香烯(Elemene)是从姜科植物温郁金中提取出来的具有抗癌作用的有效成分，是我国自主研发的一类新型倍半萜药物。该药在临床运用时，高效、副作用少；能够改善微循环，有助于化疗、放疗药物进入癌组织发挥作用；具有选择性抑制肿瘤细胞增殖和提高免疫功能的双重效应；还可直接作用于细胞膜，使肿瘤细胞破裂死亡。目前榄香烯正被广泛应用于肺癌、胃癌、大肠癌等恶性肿瘤的治疗。虽然榄香烯系列抗肿瘤植物药的开发和临床应用正如火如荼，市场份额也在不断扩大，但是从天然植物温郁金中提取分离榄香烯仍存在许多技术难点：第一，天然植株仅块根中含有榄香烯，且含量极低，约占千分之一到千分之二；同时榄香烯的含量易受品种，根茎质量，种植环境等诸多因素影响。第二，挥发油中成分复杂，榄香烯与许多结构相似的倍半萜类化合物混杂在一起，必须通过精密分馏、分子蒸馏或超临界二氧化碳法进行初分，再通过薄层色谱和柱层析，经过多次分离才能得到纯品，因此榄香烯的提取工艺要求高难度大。另外，化学合成榄香烯的工本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种紫茎泽兰来源的倍半萜合酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQ.ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种紫茎泽兰来源的倍半萜合酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQ.IDNO.2所示。2.一种权利要求1所述紫茎泽兰来源的倍半萜合酶编码基因，其特征在于所述编码基因的核苷酸序列为SEQ.IDNO.1所示。3.一种由权利要求2所述紫茎泽兰来源的倍半萜合酶编码基因构建的重组载体。4.一种由权利要求3所述重组载体转化制备的重组基因工程菌。5.一种权利要求2所述紫茎泽兰来源的倍半萜合酶编码基因在制备紫茎泽兰来源的倍半萜合酶中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的应用为：将含有紫茎泽兰倍半萜合酶编码基因的重组载体转化至大肠杆菌中，获得的重组基因工程菌在含50mg/mL卡那霉素的LB液体培养基上37℃培养12h至OD600＝0.6，加入终浓度为1mM的IPTG，25℃诱导表达15h，将诱导培养液分离纯化，获得含有重组倍半萜合酶的菌体细胞，采用镍柱进行亲和层析分离获得倍半萜合酶。7.一种权利要求1所述紫茎泽兰来源的倍半萜合酶在制备β-榄香烯中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述的应用为：以含紫茎泽兰来源的倍半萜合酶编码基因工程菌诱导培养获得的湿菌体超...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢恬，殷晓浦，谌容，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33