角质形成细胞生长因子-2制造技术

本发明专利技术涉及多种新鉴定的多核苷酸，由这类多核苷酸编码的多肽，这类多核苷酸和多肽的用途，以及这类多核苷酸和多肽的生产。更具体地，本发明专利技术的多肽是角质形成细胞生长因子，下文中有时也称之为“ＫＧＦ－２”，以前也称之为成纤维细胞生长因子１２（ＦＧＦ－１２）。本发明专利技术另外还涉及ＫＧＦ－２促进或加快创伤愈合的治疗用途。本发明专利技术也涉及ＫＧＦ－２的新的突变体形式，所述突变体形式显示出活性增强，稳定性增强，产量较高或溶解性较好。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新鉴定的多核苷酸，由这种多核苷酸编码的多肽，这种多核苷酸和多肽的用途，以及这种多核苷酸和多肽的生产。更具体地，本专利技术的多肽是一种角质形成细胞生长因子，下文中有时也称之为“KGF-2”，以前也称之为成纤维细胞生长因子12(FGF-12)。本专利技术也涉及抑制这种多肽的作用。本专利技术另外还涉及KGF-2促进或加快创伤愈合的治疗用途。本专利技术也涉及KGF-2的新的突变体形式，所述突变体形式显示出活性增强，稳定性增加，产量更高或溶解性更好。另外，本专利技术涉及纯化KGF-2多肽的方法。
技术介绍
成纤维细胞生长因子家族为涉及软组织生长和再生的生长因子大家族。目前，它包括几个在蛋白质水平上同源性程度不同的成员，除其中的一个外，似乎都具有类似的宽的促细胞分裂谱，即它们能够促进多种来自中胚层和神经外胚层之细胞的增殖和/或促进血管生成。从发育一些阶段极端受限的表达，到与之相反的多个组织和器官中的遍在表达，该家族不同成员的表达模式非常不同。所有的成员似乎都与肝素和硫酸肝素蛋白聚糖和糖胺聚糖结合，并高度集中于胞外基质内。起初，通过序列同源性或因子纯化和克隆，将KGF鉴定为FGF家族的成员。角质形成细胞生长因子(KGF)作为经培养的鼠角质形成细胞系的促分裂原被分离(Rubin，J.S.等，美国国家科学院院报，86802-806(1989))。与FGF家族的其它成员不同的是它对间充质衍生的细胞没什么活性，但可刺激上皮细胞的生长。角质形成细胞生长因子基因编码一种具194个氨基酸的多肽(Finch，P.W.等，科学，245752-755(1989))。N-末端的64个氨基酸是独特的，但该蛋白质的其余部分与bFGF约有30％的同源性。KGF是FGF家族中最与众不同的成员。该分子具有疏水性的信号序列并能有效地分泌。翻译后修饰包括信号序列的切割和在一个位点的N-连接的糖基化，产生了一种28KDa的蛋白质。角质形成细胞生长因子由来源于皮肤和胎儿肺的成纤维细胞产生(Rubin等，(1989))。已发现角质形成细胞生长因子的mRNA可在成人肾脏，结肠和髂骨中表达，但不能在脑或肺中表达(Finch，P.W.等，科学，245752-755(1989))。KGF在FGF蛋白质家族内呈现出保守区域，KGF以高亲和力与FGF-2受体结合。创伤愈合受损是重要的发病源，可导致如裂开，吻合崩溃和创伤久治不愈的并发症。在正常的个体中，不难达到愈合创伤的目的。与之形成对照的是，愈合受损与如糖尿病，感染，免疫抑制，肥胖和营养不良的几种疾病有关(Cruse，P.J.和Foord，R.，外科文献(Arch.Surg)，107206(1973)；Schrock，T.R等，外科纪事(Ann.Surg)，177513(1973)；Poole，G.U.，Jr.，外科学，97631(1985)；Irvin，G.L等，美国外科学，51418(1985))。创伤修复是复杂的相互作用和生物学过程的结果。已描述了正常创伤愈合的3个阶段急性炎症期，胞外基质与胶原的合成，和重建(Peacock，E.E.，Jr.，创伤修复，第2版，WB Saunders，Philadelphia(1984))。所述过程涉及角质形成细胞，成纤维细胞和炎性细胞在受伤位点的相互作用。组织再生似乎受特异性肽因子的控制，所述肽因子调节与修复过程有关的细胞的迁移和增殖(Barrett，T.B等，美国国家科学院院报，816772-6774(1985)；Collins，T.等，自然，316748-750(1985))，因此，生长因子在治疗创伤，烧伤和其它皮肤病中是有希望的治疗剂(Rifkin，D.B.和Moscatelli，细胞生物学杂志，1091-6(1989)；Sporn，M.B.等，细胞生物学杂志，1051039-1045(1987)；Pierce，G.F.等，细胞生物化学杂志，45319-326(1991))。在急性炎症过程中，临时组织的沉积启动了愈合过程的顺序，紧接其后的是上皮重新形成，胶原合成并沉积，成纤维细胞增殖和新血管形成，它们最终确定了模型重建阶段(Clark，R.A.F，J.Am.Acad.Dermatol，13701(1985))。这些事件受生长因子和炎性细胞或位于创伤边缘的细胞所分泌的细胞因子影响(Assoian，R.K等，自然(Lond.)309804(1984)；Nemeth，G.G等，“生长因子及其对创伤和骨折愈合的作用”，生长因子和创伤愈合的其它方面在生物学和临床上的意义，纽约(1988)，p1-17)。已鉴定出几个与创伤愈合有关的多肽生长因子，包括角质形成细胞生长因子(KGF)(Antioniades，H等，美国国家科学院院报，88565(1991))，衍生于血小板的生长因子(PDGF)(Antioniades，H等，美国国家科学院院报，88565(1991)；Staiano-Coico，L等，实验医学杂志，178865-878(1993))，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)(Golden，M.A等，临床研究杂志，87406(1991))，酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)(Mellin，T.N等，临床皮肤病学杂志(J.Invest.Dermatol)，104850-855(1995))，表皮生长因子(EGF)(Whitby，D.J和Ferguson，W.J.，发育生物学，147207(1991))，转化生长因子-α(TGF-α)(Gartner，M.H等，Surg.Forum，42643(1991)；Todd，R等，美国病理学杂志，1381307(1991))，转化生长因子-β(TGF-β)(Wong，D.T.W等，临床研究杂志，143622(1987))，neu分化因子(rNDF)(Danilenko，D.M等，临床研究杂志，95842-851(1995))，胰岛素样生长因子I(IGF-I)和胰岛素样生长因子II(IGF-II)(Cromack，D.T等，外科研究杂志，42622(1987))。已报道说皮肤中的rKGF-1会刺激表皮角质形成细胞，毛囊和皮脂腺内的角质形成细胞(Pierce，G.F等，实验医学杂志，179831-840(1994))。专利技术概述本专利技术提供了分离的核酸分子，所述核酸分子含有编码角质形成细胞生长因子(KGF-2)的多核苷酸，该生长因子具有附图说明图1所示的氨基酸序列或由1994年12月16日保藏的保藏号为ATCC 75977的细菌宿主中保藏的cDNA克隆编码的氨基酸序列。通过测定经保藏的KGF-2克隆的序列确定的核苷酸序列示于图1，该序列含有编码208个氨基酸残基的多肽的一个开放阅读框，其中包括第1-3位的起始密码子，预测前导序列约为35或36个氨基酸残基，推定其分子量约为23.4 kDa。成熟的KGF-2氨基酸序列示于图1，为约36或37至208位的氨基酸残基。本专利技术的多肽被推测鉴定为FGF家族的成员，更具体地，由于其氨基酸序列与FGF家族其它成员的同源性，将所述多肽推测鉴定为KGF-2。根据本专利技术的一个方面，提供了新的成熟的多肽KGF-2，及其具有生物活性的、在诊断或治疗上有用的片段，类似物和衍生物。本专利技术的多肽来源于人。根据本专利技术的另本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有编码一种多肽的核酸序列之核苷酸序列，其中除了具有选自下述的一个或多个突变不同之外，所述多肽与序列号２的参照多肽相同：Ｒ６８Ｇ，Ｒ６８Ｓ，Ｒ６８Ａ，Ｒ７８Ａ，Ｒ８０Ａ，Ｋ８１Ａ，Ｋ８７Ａ，Ｋ９１Ａ，Ｋ１３６Ａ，Ｋ１３７Ａ，Ｋ１３９Ａ，Ｋ１４４Ａ，Ｋ１４８Ｅ，Ｋ１４９Ｅ，Ｋ１５１Ａ，Ｋ１５３Ａ，Ｋ１５５Ａ，Ｒ１７４Ａ，Ｋ１８３Ａ，Ｋ１８３Ｑ，Ｋ１８３Ｅ，Ｒ１８７Ａ，Ｒ１８８Ａ，Ｒ１８８Ｅ，Ｋ１９１Ｅ，在包含两个端点的Ｒ６８－Ｋ９１之间带正电的残基被丙氨酸替换，在包含两个端点的Ｒ６８－Ｋ９１之间带正电的残基被中性残基替换，在包含两个端点的Ｒ６８－Ｋ９１之间带正电的残基被带负电的残基替换。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：SM卢本，P金米尼兹，DR杜安，MA兰比，D门德里克，J张，J倪，PA摩尔，TA克里曼，JR格鲁伯，PJ迪伦，RL简茨，
申请(专利权)人：人类基因组科学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]