大豆胰蛋白酶抑制剂浓缩物的制造方法技术

本发明专利技术提出一种大豆胰蛋白酶抑制剂浓缩物和大豆β－淀粉酶浓缩物的制造方法，其中，将大豆乳清浓缩成固体成分浓度为１０重量％～３０重量％，对浓缩的大豆乳清进行加盐，添加量大于等于浓缩大豆乳清的３重量％，回收在酸性条件下析出的凝集沉淀物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及简单且廉价地制造大豆中含有的、具有生理活性的胰蛋白酶抑制剂等有用的浓缩物的方法。
技术介绍
胰蛋白酶抑制剂是大豆中含有的生理活性物质之一，已公知其有Kunitz型和BBI型，Kunitz型的分子量大约为20000，等电点为4.5，BBI型的分子量大约为8000，等电点为4.2，据报道有发挥生理作用的癌性胸-腹水潴留抑制剂(特公平6-23113号公报)、炎症性浮肿亢进抑制剂(特开平7-10772号公报)、含有含酶抑制剂的皮肤保养组合物的一次性吸收性产品(特表2002-505916号公报)等。作为大豆胰蛋白酶抑制剂的分离方法，通过组合实验室水平的等电点沉淀、盐析、离子交换色谱法、凝胶过滤等，提出了各种精制方法。作为工业方法，有特开平6-145198号公报，其组合了超滤膜和离子交换色谱法，还有特开平10-066572号公报等，其组合了胰蛋白酶抑制剂提取法和离子交换色谱法等。与胰蛋白酶抑制剂相同，β-淀粉酶也是大豆的有效成分，其分离方法有特公昭57-11636号公报和特开平7-107974号公报，其中利用了超滤膜，还有特公昭57-52386号公报等，其中利用合成硅酸铝作为吸附剂。这些大豆胰蛋白酶抑制剂、大豆β-淀粉酶是有用的物质，如果能确立实现工业化的简单的分离技术，则对社会的贡献很大。另一方面，虽然举出了现有技术中大豆胰蛋白酶抑制剂的分离法、大豆β-淀粉酶的分离法的例子，但这些是现实中不能进行工业化的特殊方法，或者缺乏有效利用多种成分的概念。
技术实现思路
大豆乳清中以胰蛋白酶抑制剂和β-淀粉酶为主，含有各种有效成分。另外，盐析是有效分离蛋白性有效成分的方法之一。但是，以浓度小的乳清作为原料进行盐析时，例如浓度为3重量％的乳清，需要向其中加入14重量％的盐，这是不现实的方法。本专利技术人等发现，将大豆分离蛋白的制造过程等所产生的副产物即大豆乳清浓缩后，将pH调节至特定的范围内，并且适当地加入盐，由此可以有效地以沉淀的形式回收大豆乳清中存在的胰蛋白酶抑制剂。即，本专利技术人等已经在先完成了如下专利技术将大豆乳清浓缩到特定浓度后，即使不添加盐也能以沉淀组分的形式得到胰蛋白酶抑制剂(特愿2002-223228号、特愿2003-094128号、特愿2003-284120号)，但在工业生产上，本专利技术能进一步降低生产成本。本专利技术者等专心研究，结果发现通过添加特定比例的盐并降低浓缩的程度，可降低生产成本，从而完成了本专利技术。即，本专利技术人等发现，将大豆分离蛋白的制造过程等所产生的副产物即大豆乳清浓缩到特定浓度后，加盐，并且将pH调节至特定范围，由此可以以沉淀组分的形式回收大豆乳清中存在的胰蛋白酶抑制剂。即，本专利技术涉及，其中，将大豆乳清浓缩成固体成分浓度为10重量％～30重量％，对浓缩大豆乳清进行加盐，加盐量大于等于所述浓缩大豆乳清的3重量％，回收在酸性条件下析出的凝集沉淀物。相对于浓缩液，所述加盐量优选大于等于按(39％—固体成分浓度％)/3式计算出的数值。另外，所用的盐含有选自由硝酸根离子、硫酸根离子以及氯离子组成的组中的一种或者一种以上的阴离子；和选自由钠、钾以及铵组成的组中的一种或一种以上的阳离子。进一步向凝集沉淀物加水，在pH2.0～4.8的范围进行部分再溶解，并将其固液分离，可以得到大豆胰蛋白酶抑制剂浓缩物，其中，固液分离得到的液体组分是BBI型胰蛋白酶抑制剂浓缩物，固体组分是Kunitz型胰蛋白酶抑制剂浓缩物。将大豆乳清浓缩到一定浓度之后向浓缩液加盐与仅通过自身浓缩进行盐析的方法相比，可以控制浓缩成本，并高效率地得到大豆胰蛋白酶抑制剂浓缩物，并可高效率地得到副产物大豆β-淀粉酶浓缩物。具体实施例方式本专利技术所用的大豆乳清可以使用含有大豆胰蛋白酶抑制剂的大豆乳清。即，优选在大豆乳清的生产过程中没有经历使大豆胰蛋白酶抑制剂失活程度的受热过程，大豆乳清的生产过程在小于等于100℃，优选小于等于80℃的温度进行。大豆乳清是用大豆制造大豆分离蛋白或大豆浓缩蛋白的过程等中的副产物。受热过程少的大豆乳清能够以溶液的形式得到，例如用水在中性附近提取低变性脱脂大豆后，除去豆渣成分得到脱脂豆乳，将其中的大豆蛋白在等电点附近(例如pH4.5附近)凝集沉淀，除去大豆蛋白而得到溶液。工业上制造大豆分离蛋白的过程中的副产物大豆乳清可作为大量质量稳定的原料利用，所以方便，通常这些乳清中典型的是固体成分大约为3％左右，其固体成分组成(以下称“干重％”)为粗蛋白质20％、灰份20％、含糖物质60％左右，即使改变从脱脂大豆的水提倍率，大豆乳清的固体成分组成也呈几乎不变的趋势。所以，如果固体成分是3％左右，从活性上看，含有5单位/毫升左右的大豆胰蛋白酶抑制剂，其可以适用于本专利技术。在本说明书中，大豆胰蛋白酶抑制剂活性的测定法采用基于A.O.A.C.的公定法的BAPA(N-α-苯甲酰基-DL-精氨酸-对硝基酰苯胺盐酸盐)法进行定量。在本专利技术中，大豆乳清的浓缩与添加的盐的量存在负相关。首先，将乳清浓缩至固体成分为10重量％～30重量％、优选15重量％～25重量％的范围是合适的。固体成分浓度小于10重量％时，不加入大量盐就不发生盐析，而浓缩到大于30重量％时，难以降低蒸馏浓缩的成本。浓缩方式可采用公知的方式，但减压下浓缩能防止温度上升，可高效率地进行浓缩。此时，pH优选酸性条件，更优选pH3.5～8.5，进一步优选pH4.5～7.0。对此时溶液的温度(品温)也没有特别限制，在能取得高活性的各种乳清有效成分的范围，优选溶液温度低，如20℃～80℃，更优选在20℃～65℃进行，接着对浓缩液进行加盐，添加量大于等于3重量％，更优选3重量％～10重量％。加盐时所使用的盐含有选自由硝酸根离子、硫酸根离子以及氯离子组成的组中的一种或者一种以上的阴离子；和选自由钠、钾以及铵组成的组中的一种或一种以上的阳离子。如果考虑价格和获得方法，优选钠盐，特别是氯化钠。这些盐的最适添加量因盐的种类不同而不同，但应为3重量％～10重量％，并且，相对于100份浓缩液，加入大于等于按(31％-固体成分浓度％)/3式算出的数字的量的盐，优选加入大于等于按(39％-固体成分浓度％)/3式算出的数字的量的盐。也就是说，例如，对于固体成分浓度为19重量％的浓缩液，必须添加大于等于4重量％、优选大于等于6.7重量％的盐。但是，加入的盐的浓度小于3重量％时效果小，如果大于10重量％则溶液的比重变大，则对析出的沉淀进行分离变得困难。对于如上述那样浓缩的大豆乳清，酸性条件下，优选调整到pH1.7～5.2的范围，更优选调整到2.7～4.8的范围，分离析出的凝集沉淀物和上清液。大豆胰蛋白酶抑制剂被浓缩在该凝集沉淀物中。另一方面，β-淀粉酶被浓缩在上清液组分中。希望在不使β-淀粉酶失活的情况下进行分离时，进行在酸性条件下、小于等于20℃的温度进行等的处理即可。此外，胰蛋白酶抑制剂的Kunitz型的等电点是pH4.5，BBI型的等电点是pH4.2，β-淀粉酶的等电点是pH5.5，但是，即使直接将大豆乳清的pH调整至各个等电点，企图等电点沉淀，也不会产生目标物质的凝集沉淀，或者产生的量极少。这样得到的凝集沉淀物是大豆胰蛋白酶抑制剂浓缩物，加水并在pH2.0～4.8、优选在pH3.0～pH4.4范围进行部分溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
大豆胰蛋白酶抑制剂浓缩物的制造方法，其中，将大豆乳清浓缩成固体成分浓度为１０重量％～３０重量％，对浓缩大豆乳清进行加盐，加盐量为所述浓缩大豆乳清的３重量％～１０重量％，回收在ｐＨ１．７～５．２范围的酸性条件下析出的凝集沉淀物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：吉田隆治，福田洋一，
申请(专利权)人：不二制油株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]