本发明专利技术公开了一种土鳖虫蛋白酶酶解物及其用途，具体步骤为A、净选土鳖虫，粉碎成细粉；B、将土鳖虫细粉置于人工胃液中，然后加入胃蛋白酶水解，得到胃蛋白酶酶解液，离心；C、取上清液，干燥，得到土鳖虫胃蛋白酶酶解物；D、取残渣转入人工肠液，加入胰蛋白酶水解，得到土鳖虫胰蛋白酶酶解物；步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。土鳖虫蛋白酶酶解物具有抗凝血或溶栓的作用。
【技术实现步骤摘要】
土鳖虫蛋白酶酶解物及其应用
本专利技术涉及一种中药制药领域，具体涉及土鳖虫酶解物及其应用。
技术介绍
土鳘虫为鳘爐科昆虫地鳘Eupolyphaga sinensis Walker 或冀地鳘Steleophaga plancyi (Boleny)的雌虫干燥体；主产于江苏、湖北、河南、河北等地；味咸，寒；有小毒；归 肝经。主要功能为破血逐瘀，续筋接骨。用于跌打损伤，筋骨骨折，血瘀经闭，产后瘀阻腹痛， 癥瘕痞块。 土鳖虫目前报道的主要成分为挥发油和氨基酸。但具体活性成分未有文献报道， 传统中药以土鳖虫全虫入药，存在着服用剂量大，易造成微生物污染等弊病。鉴于动物类蛋 白质、粘多糖等大分子物质只有到达胃肠道后受消化酶、酸、碱等作用，方可被酶解或者水 解成小分子的肽、低聚糖和其他小分子物质，吸收入血而发生药效，故生物酶仿生提取方法 模拟体内消化过程，提取的有效成分治疗效果更佳。
技术实现思路
本专利技术公开了一种土鳖虫蛋白酶酶解物及其应用，具有很好的抗凝血和溶栓作 用。 本专利技术所采用的技术方案： 土鳖虫蛋白酶酶解物，由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 将土鳖虫细粉置于人工胃液中，然后加入胃蛋白酶水解，得到胃蛋白酶酶解液，离 心； C、 取上清液，干燥，得到土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣转入人工肠液，加入胰蛋白酶水解，得到土鳖虫胰蛋白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。 土鳖虫蛋白酶酶解物，由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 将土鳖虫细粉置于人工胃液中，密闭，于37 °C恒温水浴30min，加入胃蛋白酶水解 2-3小时，得到胃蛋白酶酶解液，将胃蛋白酶解液置于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，离 心； C、 取上清液，干燥，得土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣加入人工肠液，密闭，于45°C恒温水浴30min后，加入胰蛋白酶水解2-4小时， 将酶解液于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，离心15min，取上清液，干燥，得土鳖虫胰蛋 白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。 土鳖虫蛋白酶酶解物，由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 向土鳖虫细粉中加入与土鳖虫细粉重量体积比为1 :20的人工胃液，密闭，于37°C恒 温水浴30min，加入2%胃蛋白酶水解2-3小时，得到胃蛋白酶酶解液，将胃蛋白酶酶解液，置 于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/min离心15min ; C、 取上清液，干燥，得土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣加入20倍量人工肠液，密闭，于45°C恒温水浴30min后，加入4%胰蛋白酶水 解2-4h，将酶解液于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/min离心15min，取上清 液，干燥，得土鳖虫胰蛋白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。 土鳖虫蛋白酶酶解物，由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 向土鳖虫细粉中加入与土鳖虫细粉重量体积比为1 :20的人工胃液，密闭，于37°C恒 温水浴30min，加入3%胃蛋白酶水解2-3小时，得到胃蛋白酶酶解液，用Imol/mlNaOH溶液 调节酶解液的pH=6. 8,将胃蛋白酶酶解液置于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/ min 离心 15min ; C、 取上清液，干燥，得土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣加入20倍量人工肠液，密闭，于45°C恒温水浴30min后，加入3%胰蛋白酶水 解2-4h，将酶解液于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/min离心15min，取上清 液，干燥，得土鳖虫胰蛋白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。 土鳖虫蛋白酶酶解物，由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 向土鳖虫细粉中加入与土鳖虫细粉重量体积比为1 :20的人工胃液，密闭，于37°C恒 温水浴30min，加入2%胃蛋白酶水解2-3小时，得到胃蛋白酶酶解液，用Imol/mlNaOH溶液 调节酶解液的pH=6. 8,将胃蛋白酶酶解液置于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/ min 离心 15min ; C、 取上清液，干燥，得土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣加入20倍量人工肠液，密闭，于45°C恒温水浴30min后，加入2%胰蛋白酶水 解2-4h，将酶解液于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/min离心15min，取上清 液，干燥，得土鳖虫胰蛋白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。 所述土鳖虫胃蛋白酶酶解物或胰蛋白酶酶解物在制备抗凝血或溶栓的药物中的 应用。 所述的药物的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。 本专利技术的有益效果：由于目前动物药多以全粉入药，存在着剂量大、易造成微生物 污染、用药剂量不当而引起敏反应、急性肝肾功能损害、溶血反应、中枢抑制和致畸等毒副 作用。本专利技术提供了土鳖虫进行抗凝、抗血栓活性成分的分离纯化方法，可以有效的解决以 上问题。 鉴于动物类蛋白质、粘多糖等大分子物质只有到达胃肠道后受消化酶、酸、碱等作 用，方可被酶解或水解成小分子的肽、低聚糖和其他小分子物质，吸收入血而发挥药效，故 本实验模拟胃和小肠的环境及消化过程，用胃蛋白酶和胰蛋白酶仿生提取土鳖虫，使药材 中的大分子蛋白水解为小分子肽类以利于人体吸收。APTT法、纤维蛋白原平板法为较常用 的体外抗凝，溶纤试验方法，本实验以其为考察指标，证明酶解工艺的可行性。具体为以水 解度为指标，单因素考察了仿生酶解法提取土鳖虫的工艺条件；以APTT法、纤维蛋白原平 板法为考察指标，对仿生酶解法提取土鳖虫的工艺进行验证。结果证实，仿生酶解法凝血时 间长，抗血栓效果明显。 具体方法和结果通过以下实验证实： 1材料 1.1药材土鳖虫（由石家庄以岭药业股份有限公司提供） 1.2试剂牛血清白蛋白（Sigma A7906,购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司）； 牛纤维蛋白原（Sigma F8630,购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司）；胰蛋白酶1 :250 (Amresco0458,购自北京华美转导科技有限公司）；胃蛋白酶1:10000 (Sigma P7000,购自 北京环亚泰克生物医学技术有限公司）；医用注射性尿激酶(购自北京市望京医院）；凝血酶 (Sigma T4648,购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司）;APTT试剂10*1.5ml (购自上海 太阳生物试剂公司）;Protein Assay Dye Rgnt (Bio-red 5000006,北京泽平科技有限责任 公司）;三氯乙酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；乙醇(分析纯）;屈臣氏纯净水(广州 屈臣氏食品饮料有限公司）。 生理盐水(称取氯化钠9g，加蒸馏水定容至1000ml，摇匀，即得）；人工胃液本文档来自技高网...
【技术保护点】
土鳖虫蛋白酶酶解物，其特征在于由以下方法制备：A、净选土鳖虫，粉碎成细粉；B、将土鳖虫细粉置于人工胃液中，然后加入胃蛋白酶水解，得到胃蛋白酶酶解液，离心；C、取上清液，干燥，得到土鳖虫胃蛋白酶酶解物；D、取残渣转入人工肠液，加入胰蛋白酶水解，得到土鳖虫胰蛋白酶酶解物；步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。
【技术特征摘要】
1. 土鳖虫蛋白酶酶解物，其特征在于由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 将土鳖虫细粉置于人工胃液中，然后加入胃蛋白酶水解，得到胃蛋白酶酶解液，离 心； C、 取上清液，干燥，得到土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣转入人工肠液，加入胰蛋白酶水解，得到土鳖虫胰蛋白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。2. 根据权利要求1所述的土鳖虫蛋白酶酶解物，其特征在于由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 将土鳖虫细粉置于人工胃液中，密闭，于37°C恒温水浴30min，加入胃蛋白酶水解 2-3小时，得到胃蛋白酶酶解液，将胃蛋白酶解液置于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，离 心； C、 取上清液，干燥，得土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣加入人工肠液，密闭，于45°C恒温水浴30min后，加入胰蛋白酶水解2-4小时， 将酶解液于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，离心15min，取上清液，干燥，得土鳖虫胰蛋 白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。3. 根据权利要求1所述的土鳖虫蛋白酶酶解物，其特征在于由以下方法制备： A、 净选土鳖虫，粉碎成细粉； B、 向土鳖虫细粉中加入与土鳖虫细粉重量体积比为1 :20的人工胃液，密闭，于37°C恒 温水浴30min，加入2%胃蛋白酶水解2-3小时，得到胃蛋白酶酶解液，将胃蛋白酶酶解液，置 于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/min离心15min ; C、 取上清液，干燥，得土鳖虫胃蛋白酶酶解物； D、 取残渣加入20倍量人工肠液，密闭，于45°C恒温水浴30min后，加入4%胰蛋白酶水 解2-4h，将酶解液于85°C恒温水浴15min，冷却至室温，以4200r/min离心15min，取上清 液，干燥，得土鳖虫胰蛋白酶酶解物； 步骤C所得胃蛋白酶酶解物与步骤D所得胰蛋白酶酶解物即为土鳖虫蛋白酶酶解物。4. 根据权利要求1所述的土鳖虫蛋白酶酶解物，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晓燕，赵韶华，王鑫国，王玉蓉，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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