【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及活性肽，尤其涉及一种酸枣仁多肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、酸枣仁为鼠李科植物酸枣（semen ziziphi spinosae, ziziphus jujuba mill.var. spinosa (bunge) huex h. f.chou）的干燥成熟种子，采收成熟酸枣，除去果肉，碾碎果核，取出种子，晒干而成，为卫生部认定的药食同源的物品之一。酸枣仁营养成分丰富，含多种有效成分，主要为黄酮、生物碱、皂苷、挥发油、蛋白质等，其中，蛋白含量约占36%，约含有18种人体所需氨基酸，是一种良好的蛋白质营养强化剂和药食兼用的植物蛋白质。
2、目前，国内外对酸枣仁的研究主要集中于生物碱、皂苷和黄酮等化学成分及药理功能上，对酸枣仁蛋白的研究较少，还未见对其功能特性和生物活性相关的深入研究。因此，为有效开发利用酸枣仁蛋白资源，探索更多潜在药用价值，对酸枣仁蛋白进行系统的生物活性研究，有十分重要的意义。
3、然而，近年来食源性植物蛋白因其具有抗氧化、降血压、抗菌以及增强免疫功能等生物活性得到广泛关注，但由于蛋白质的分子量较大，空间结构复杂，人体摄入后不容易被消化吸收，营养价值得不到充分地发挥。
4、关于蛋白水解物的研究已有许多报道，研究证明水解物都具有较好的功能特性和生物活性，且不同的蛋白酶解产物可产生不同的理化性质、功能特性以及生物活性。相关研究表明，多肽具有大分子蛋白质和游离氨基酸所不具备的生物学活性，且更容易被人体吸收，逐渐成为近年来食品领域的研究热点。
5、酶法制备多
6、因此，研究开发高活性的酸枣仁多肽，对有效合理利用酸枣仁资源，提高产业价值，增加酸枣仁的综合利用具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有酸枣仁蛋白利用问题存在的上述技术问题，本专利技术提供一种酸枣仁多肽及其制备方法和应用。
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：
3、一种酸枣仁多肽的制备方法，包括如下步骤：
4、s1、取酸枣仁进行烘干、粉碎、过筛，得酸枣仁粉，采用石油醚对所得酸枣仁粉进行脱脂处理，得脱脂酸枣仁粉；
5、s2、将所得脱脂酸枣仁粉与纤维素酶加入到ph为6.0~6.5的缓冲液和水的混合溶液中，进行水解反应，灭酶，离心，取上清液浓缩干燥，得预处理酸枣仁粉；
6、s3、将所得纯化后酸枣仁粉用去离子水溶解，用盐酸调节ph至4.0~5.2，静置，离心，沉淀冷冻干燥，得酸枣仁蛋白冻干粉；
7、s4、取所得酸枣仁蛋白冻干粉用去离子水溶解，调节ph至5.4~6.0，加入风味蛋白酶进行酶解反应，灭酶，离心，得酸枣仁蛋白水解液，用有机膜过滤分离，冷冻干燥，得不同分子量的酸枣仁多肽。
8、相对于现有技术，本专利技术提供的酸枣仁多肽的制备方法，首先对酸枣仁粉进行脱脂处理，并添加纤维素酶水解法辅助促进脱脂酸枣仁粉中蛋白的提取，以乙醇溶液为提取剂对经过纤维素酶预处理后的酸枣仁粉进行纯化，去除或减少酸枣仁粉中的多酚类、多糖类物质，降低或避免对后期蛋白质或多肽产品抗氧化活性的影响；再采用酸性沉淀法进行酸枣仁蛋白的提取，提取率高达93.57%，所得酸枣仁蛋白的分子量主要在22.0~43.0kda之间；最后采用风味蛋白酶酶解法进行酸枣仁多肽的制备，水解度可达30%以上，并用有机膜过滤分离，得不同分子量的多肽（分子量分别为150d~5000d，5000d~10kd及10kd~200kd），所得多肽在分子量小于200kd的肽段中分布较为集中，且dpph自由基清除率相对较高，属于天然的抗氧化肽，具有很强的抗氧化活性，可以用于制备抗氧化药物、保健品、化妆品，具有很好的应用前景。本专利技术提供的制备方法蛋白提取率高，蛋白水解度也高，能够充分有效的利用酸枣仁资源，提高产业价值，制备得到了高活性酸枣仁多肽。
9、进一步地，步骤s1中，脱脂处理过程为：将酸枣仁粉与石油醚按料液比1:3（g/ml）混合，水浴回流2h，离心，弃上清，室外通风24h，得脱脂酸枣仁粉。
10、进一步地，步骤s2中，水解反应过程为：将脱脂酸枣仁粉、纤维素酶与ph为6.0~6.5的缓冲液和水的混合溶液按1:1:20g/g/ml的比例混合，40~50℃水解反应0.8~1.0h。
11、进一步地，步骤s2中，50℃水解反应1h后，灭酶5min，5000r/min离心10min。采用纤维素酶预处理脱脂酸枣仁粉后可提高蛋白的浸出率，同时有助于步骤s3中多酚类、多糖类物质的去除，并保证步骤s4中蛋白的提取率。
12、进一步地，步骤s3中，静置温度为3~5℃，时间为1.5~2h，静置后，5000r/min离心10min。蛋白提取的过程为：将预处理酸枣仁粉用去离子水溶解，盐酸调节溶液至ph 4.0-5.0，4℃静置1-2h，5000r/min离心10min，分取沉淀。通过与预处理和纯化处理配合，蛋白提取过程中既保证了蛋白提取率又保证了蛋白活性，以便于得到跟多的高活性多肽。
13、进一步地，步骤s4中，风味蛋白酶用量为1000~1200u/g，酶解反应时间为4.5~5.0h，酶解反应温度为45~50℃。多肽制备过程为，将蛋白用ph5-6的缓冲液溶解，按1:1200u（蛋白：酶））加入风味蛋白酶，酶解4.5~5.0h，酶解温度45~50℃，反应完成后，灭酶5min，5000r/min离心10 min，取上清液，即得多肽溶液。
14、通过控制调节ph，避免ph过高或者过低导致酶空间构象改变而使酶失活，并防止ph改变底物的解离状态，影响它与酶的结合，进而导致水解度相应变小。同时，通过调控酶用量、反应时间和温度，进一步地保证酶活力，更好的控制酶促反应速率，实现更好的水解效果，提高蛋白的水解度，可达到30.04%。
15、进一步地，步骤s4中，将所得多肽液进行有机滤膜过滤，分取不同分子量的滤液，得不同分子量的肽段，有机膜分子量分别为150d~5000d，5000d~10kd和10kd~200kd，去除分子量小于150d的膜分离后的组分（其蛋白含量和dpph自由基清除率数值很低），去除分子量较大，基本不属于多肽的组分，截留占比较多，且活性较高的多肽段。
16、本专利技术还提供了酸枣仁多肽，由上述的酸枣仁多肽的制备方法制得，所述多肽的分子量为150d~5000d，5000d~10kd或10kd~200kd，属于纯天然抗氧化肽。
17、进一步地，本专利技术还提供了上述酸枣仁多肽。
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1.一种酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤S1中，脱脂处理过程为：将酸枣仁粉与石油醚按料液比1:3（g/mL）混合，水浴回流2h，离心，弃上清，室外通风24h，得脱脂酸枣仁粉。
3.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤S2中，水解反应过程为：将脱脂酸枣仁粉、纤维素酶与pH为6.0~6.5的缓冲液和水的混合溶液按1:1:20g/g/ml的比例混合，40~50℃水解反应0.8~1.0h。
4.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3中，蛋白提取的过程为：将预处理酸枣仁粉用去离子水溶解， 盐酸调节溶液至pH 4.0-5.0，4℃静置1-2h，5000r/min离心10min，分取沉淀。
5.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤S4中，风味蛋白酶用量为1000~1200U/g，酶解反应时间为4.5~5.0h，酶解反应温度为45~50℃。
6.如权利要求5所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，多
7.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤S4中，有机膜分子量分别为150D~5000D，5000D~10KD和10KD~200KD。
8.一种酸枣仁多肽，其特征在于，由权利要求1至7任一项所述的酸枣仁多肽的制备方法制得。
9.如权利要求8所述的酸枣仁多肽，其特征在于，所述多肽的分子量为150D~5000D。
10.权利要求8或9所述的酸枣仁多肽在清除DPPH自由基、清除ABTS自由基、清除羟基自由基、清除超氧阴离子自由基、还原铁离子中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤s1中，脱脂处理过程为：将酸枣仁粉与石油醚按料液比1:3（g/ml）混合，水浴回流2h，离心，弃上清，室外通风24h，得脱脂酸枣仁粉。
3.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤s2中，水解反应过程为：将脱脂酸枣仁粉、纤维素酶与ph为6.0~6.5的缓冲液和水的混合溶液按1:1:20g/g/ml的比例混合，40~50℃水解反应0.8~1.0h。
4.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤s3中，蛋白提取的过程为：将预处理酸枣仁粉用去离子水溶解， 盐酸调节溶液至ph 4.0-5.0，4℃静置1-2h，5000r/min离心10min，分取沉淀。
5.如权利要求1所述的酸枣仁多肽的制备方法，其特征在于，步骤s4中，风味蛋白酶用量为1000~1200u/g，酶解...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾振华，李晓燕，刘晓龙，张璐，王鑫媛，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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