【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析，尤其涉及一种联苯乙酸有关物质的检测方法。
技术介绍
1、苯胺洛芬（化学名：4-联苯乙酸-三羟甲基氨基甲烷）注射液是我国自主研发的创新药，化学结构式见式ⅰ，从化学结构上划分属于非甾体类抗炎镇痛药（non-steroidalanti-infl ammatory drugs，nsaids）中的芳基烷酸类，临床拟用于术后、各种癌痛、外伤、腰痛症(急性期、慢性恶化期)、痛风发作、神经痛、肾及尿结石痛等。
2、
3、苯胺洛芬（fbt）是以联苯乙酸和氨丁三醇为起始物料经成盐反应得到的高度水溶性的三羟基甲胺盐类，水溶性(1.93mg·ml-1，25℃)优于联苯乙酸乙酯、联苯乙酸，是联苯乙酸的前药，可以在生物有机体内通过水解快速转换为联苯乙酸。
4、其中，联苯乙酸自身是一个原料药，由联苯乙腈在酸性、高温条件下水解成联苯乙酸粗品，经精制提纯后制得。联苯乙腈作为合成联苯乙酸的原料，如未反应完全，则可能会残留在联苯乙酸中；同时，由于联苯乙腈苯环上的取代基较为活泼，高温情况下乙腈基团很有可能被氢离子所取代得到联苯（反应机理如下式ⅱ），脱离的乙腈水解，再与联苯结合生成的副产物4-乙酰基联苯（反应机理如下式ⅲ）。
5、
6、
7、可见，联苯乙酸潜在杂质除了残留溶剂（乙酸、异丙醇）外，还有可能包括有关物质联苯乙腈、联苯、4-乙酰基联苯。为严格控制苯胺洛芬产品的质量，需要将联苯乙腈、联苯、4-乙酰基联苯作为指定杂质列入联苯乙酸的质量标准中。因此，进一步地开发一种能同时检测
技术实现思路
1、针对现有联苯乙酸中潜在的有关物质杂质联苯乙腈、联苯、4-乙酰基联苯可能影响苯胺洛芬产品的质量的技术问题，本专利技术提供一种联苯乙酸有关物质的检测方法。
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：
3、一种联苯乙酸有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；所述色谱柱的规格为250×4.6mm，填料直径为5.0μm；检测波长为254nm；流动相a为0.05%磷酸水溶液，流动相b为乙腈，梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
4、0-20min，90％→10％流动相a，10％→90％流动相b；
5、20-25min，10％流动相a，90％流动相b；
6、25-25.1min，10％→90％流动相a，90％→10％流动相b；
7、25.1-35min，90％流动相a，10％流动相b，
8、所述联苯乙酸有关物质包括联苯乙腈、联苯或4-乙酰基联苯中的一种或多种。
9、相对于现有技术，本专利技术提供的检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶柱作为检测色谱柱，以0.05%磷酸水溶液-乙腈作为流动相，并采用特定的梯度洗脱程序，通过对高效液相色谱条件的控制，实现了联苯乙酸有关物质的同时定量检测，极大地提高了检测效率，且联苯乙酸有关物质与其相邻峰的分离度均大于1.5。本专利技术提供的检测方法专属性、灵敏度、准确度、精密度较好，可以实现更加全面有效地对联苯乙酸的质量进行控制，进而保证以联苯乙酸为原料的苯胺洛芬产品的质量。
10、进一步地，所述联苯乙酸及其有关物质出峰顺序依次为联苯乙酸、联苯乙腈、4-乙酰基联苯和联苯，两相邻峰的分离度大于1.5。
11、进一步地，所述0.05%磷酸水溶液的配制为精密移取85%磷酸1.0ml置于2000ml纯化水中，搅拌溶解，磷酸水溶液与乙腈采用梯度洗脱顺序，改善峰形，提高各组分峰之间的分离度和检测的灵敏度。
12、进一步地，柱温为28~32℃，流速为0.8~1.2ml/min。
13、进一步地，柱温为30℃，流速为1.0ml/min。
14、进一步地，进样温度为室温，进样体积为5μl，配合上述柱温和流速，有利于提高各组分之间的分离度，使检测结果的准确度及精密度更高。
15、进一步地，所述色谱柱为agilent zorbax sb-c18。采用特定的色谱柱配合上述的流动相，更好地进行梯度洗脱，保证更好的分离度和灵敏度。
16、进一步地，所述的检测方法包括以下步骤：
17、将体积比1:1的0.1%磷酸水溶液-乙腈混合液作为稀释剂1；将乙腈作为稀释剂2，
18、空白溶液配制：取稀释剂1作为空白溶液；
19、供试品溶液配制：取联苯乙酸供试品，精密称定，置于容量瓶中，加稀释剂2超声溶解后，用稀释剂1稀释至刻度，摇匀。
20、具体地，取联苯乙酸供试品25mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，加10ml稀释剂2超声溶解后，用稀释剂1稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液（联苯乙酸供试品浓度：0.5mg/ml）。
21、进一步地，所述的检测方法还包括以下步骤：
22、0.1%自身对照溶液配制：精密移取供试品溶液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加稀释剂1稀释至刻度，摇匀，再精密移取上述溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，加稀释剂1稀释至刻度，摇匀（联苯乙酸浓度：0.5μg/ml）。
23、对照品储备溶液配制：取4-乙酰基联苯、联苯乙腈和联苯对照品，精密称定，置于容量瓶中，加稀释剂2超声溶解后，再用稀释剂1稀释至刻度，摇匀。
24、具体地，取4-乙酰基联苯、联苯乙腈和联苯对照品各5mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加10ml稀释剂2超声溶解后，再用稀释剂1稀释至刻度，摇匀。
25、对照品溶液配制：精密移取1.0ml对照品储备溶液，置于100ml容量瓶中，用稀释剂1稀释至刻度，摇匀（联苯乙腈、4-乙酰基联苯和联苯浓度：各0.5μg/ml）。
26、进一步地，所述的检测方法还包括以下步骤：
27、系统适用性溶液配制：称取联苯乙酸对照品50mg，置于100ml容量瓶中，移取对照品储备溶液1.0ml，再加20ml稀释剂2超声溶解后，用稀释剂1稀释至刻度，摇匀（4-乙酰基联苯、联苯和联苯乙腈浓度：各相当于联苯乙酸0.1%）。
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1.一种联苯乙酸有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；所述色谱柱的规格为250×4.6mm，填料直径为5.0μm；检测波长为254nm；流动相A为0.05%磷酸水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述联苯乙酸及其有关物质出峰顺序依次为联苯乙酸、联苯乙腈、4-乙酰基联苯和联苯，两相邻峰的分离度大于1.5。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述0.05%磷酸水溶液的配制为精密移取85%磷酸1.0 ml置于2000 ml纯化水中，搅拌溶解。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，柱温为28~32℃，流速为0.8~1.2mL/min。
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，柱温为30℃，流速为1.0mL/min。
6.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，进样温度为室温，进样体积为5μL。
7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述
8.如权利要求1至7任一项所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，还包括以下步骤：
10.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，还包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种联苯乙酸有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；所述色谱柱的规格为250×4.6mm，填料直径为5.0μm；检测波长为254nm；流动相a为0.05%磷酸水溶液，流动相b为乙腈，梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述联苯乙酸及其有关物质出峰顺序依次为联苯乙酸、联苯乙腈、4-乙酰基联苯和联苯，两相邻峰的分离度大于1.5。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述0.05%磷酸水溶液的配制为精密移取85%磷酸1.0 ml置于2000 ml纯化水中，搅拌溶解。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：贾振华，杨青瑞，闫建辉，安堃，刘莎，夏瑾，秦静贤，吴盼盼，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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