用于腺病毒包装的pTYAd系列载体制造技术

本发明专利技术公开了用于腺病毒包装的pTYAd系列载体，属于分子生物学中的基因工程和分子生物学技术领域，通过以下步骤获得：对抽提好的腺病毒质粒pAD‑U6‑shRNA‑PGK‑PuroR以XbaI和SalI进行线性化，然后进行跑胶并进行胶回收，得到线性化载体pTYAd‑linear，之后在线性化载体pTYAd‑linear上引入多克隆位点序列MCS1，得到腺病毒载体pTYAd‑MCS1，之后引入MCS2序列，得到腺病毒载体pTYAd‑MCS1+MCS2，本发明专利技术通过基因序列合成，重组载体构建等步骤制得一系列腺病毒载体，可以应用于各种类型的腺病毒载体改造，对于提高腺病毒载体改造的效率具有十分重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学中的基因工程和分子生物学，具体为用于腺病毒包装的ptyad系列载体。

技术介绍

1、腺病毒是一种没有包膜的直径为70-90nm的颗粒，由252个壳粒呈20面体排列构成。衣壳里是线状双链dna分子，约含30-47kb，两端各有长约100bp的反向重复序列。

2、重组腺病毒(adv)是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(ad5)，其基因组是36kb长的线性双链dna。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。

3、重组腺病毒具有以下优点：

4、1：感染范围广，几乎可以感染所有的分裂和不分裂细胞系、原代细胞和部分组织。

5、2：感染效率高，全面超越其余病毒载体工具和脂质体转染等。

6、3：对外源基因容载能力大且不整合基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于腺病毒包装的pTYAd系列载体，其特征在于，包括腺病毒载体pTYAd-MCS1和腺病毒载体pTYAd-MCS1+MCS2，具体通过以下步骤获得：

2.根据权利要求1所述的用于腺病毒包装的pTYAd系列载体，其特征在于，步骤一中线性化处理过程采用Takara的限制性内切酶。

3.根据权利要求1所述的用于腺病毒包装的pTYAd系列载体，其特征在于，步骤二中引物为MCS1-FP和MCS1-RP。

4.根据权利要求3所述的用于腺病毒包装的pTYAd系列载体，其特征在于，MCS1-FP的序列为TATAGTCAGCTCTAGttcaaaattttatcgT...

【技术特征摘要】

1.用于腺病毒包装的ptyad系列载体，其特征在于，包括腺病毒载体ptyad-mcs1和腺病毒载体ptyad-mcs1+mcs2，具体通过以下步骤获得：

2.根据权利要求1所述的用于腺病毒包装的ptyad系列载体，其特征在于，步骤一中线性化处理过程采用takara的限制性内切酶。

3.根据权利要求1所述的用于腺病毒包装的ptyad系列载体，其特征在于，步骤二中引物为mcs1-fp和mcs1-rp。

4.根据权利要求3所述的用于腺病毒包装的ptyad系列载体，其特征在于，mcs1-fp的序列为tatagtcagctctagttcaaaattttatcgttcgaa...

【专利技术属性】
技术研发人员：施荣辉，刘登辉，周金山，
申请(专利权)人：通用生物安徽股份有限公司，
类型：发明
国别省市：