含蛋白酶的洗涤组合物制造技术

一种洗涤组合物，它含有： （ａ）有效量的一种蛋白酶，它是一种具有天然界未曾发现过的氨基酸序列的羰基水解酶的变种，是通过用不同的氨基酸置换前体羰基水解酶中的多种氨基酸残基而衍生出来的，在所说的前体羰基水解酶中被置换的位置等价于解淀粉芽孢杆菌枯草溶菌素中的＋７６位置，与选自等价于解淀粉芽孢杆菌枯草溶菌素中的下列位置的一种或多种氨基酸残基相结合：＋９９、＋１０１、＋１０３、＋１０４、＋１０７、＋１２３、＋２７、＋１０５、＋１０９、＋１２６、＋１２８、＋１３５、＋１５６、＋１６６、＋１９５、＋１９７、＋２０４、＋２０６、＋２１０、＋２１６、＋２１７、＋２１８、＋２２２、＋２６０、＋２６５和／或＋２７４；和 （ｂ）一种或多种可与蛋白酶配伍的洗涤组合物材料。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及含有新的蛋白酶的多种洗涤组合物，这些蛋白酶是羰基水解酶的变种。背景酶组成最大一类天然存在的蛋白质。每类酶一般催化(加速反应而没有被消耗)一种不同的化学反应。有一类被称为蛋白酶的酶，由于它们具有能够水解(及把一个化合物分解成两个或更多个较简单的化合物，并把水分子的H和OH部分分别吸收在碎裂的化学键的两边)其它蛋白质的能力而为人所知。这种水解蛋白质的能力已被利用来把天然界存在的蛋白酶和经过蛋白质工程加工过的蛋白酶，作为一种添加剂并入到洗衣用的洗涤剂制品之中。许多衣服上的污渍是蛋白质性的，因此广谱蛋白酶能使得除去这类污渍的能力得到重大的改进。不幸，这些蛋白质在它们的天然的细菌环境中的有效浓度，常常不能被转移到相对非自然的洗涤环境中。特别是，蛋白酶的特性诸如热稳定性、pH稳定性、氧化稳定性和底物专一性等，在酶的自然环境以外不能必然地被优化来加以利用。蛋白酶的氨基酸序列决定了蛋白酶的特性。蛋白酶氨基酸序列的变化可能在不同程度上改变酶的性质，甚至可能使酶失活，这取决于在氨基酸序列中变化的位置、性质和/或数值。已经采用了一些方法来改变酶的氨基酸序列，企图改进它们的性质，其目的在于增进蛋白酶在诸如洗衣环境中的洗涤用途时的效率。这些方法包括改变氨基酸序列来增进热稳定性以及在很不相同的条件下改进氧化稳定性。虽然在本领域中已经叙述过种种方法，但仍然继续需要新的有效的蛋白酶变种来应用于洗涤各种表面。因此本专利技术的一个目的是提供一种含有蛋白酶的洗涤组合物，这种蛋白酶是具有改进的解蛋白活度、底物专一性、稳定性和/或增进的品质特性的羰基水解酶变种。从以下的详尽描述中，这些目的以及其它目的将很快变得很明显。专利技术概要本专利技术涉及洗涤组合物，它含有(a)有效量的一种蛋白酶，它是一种具有天然界未曾发现过的氨基酸序列的羰基水解酶的变种，是通过用不同的氨基酸置换前体羰基水解酶中的多种氨基酸残基而衍生出来的，其中在前体酶中被置换的多个氨基酸残基位置相应于位置+76与一种或多种下列残基位置的结合+99、+101、+103、+104、+107、+123、+27、+105、+109、+126、+128、+135、+156、+166、+195、+197、+204、+206、+210、+216、+217、+218、+222、+260、+265和/或+274，这里数字标明的位置相应于天然存在的由解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)得到的枯草溶菌素中的位置，或相应于在其它羰基水解酶或枯草溶菌素(诸如迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)枯草溶菌素)中等价的氨基酸残基；和(b)一种或多种可与蛋白酶配伍的洗涤组合物材料。本专利技术也涉及洗涤需要洗涤的物品的方法，它是通过使所说的物品与这里描述的是一种羰基水解酶变种的蛋白酶进行接触而完成的。因此本专利技术包括一种洗涤织物的方法，它包括最好是在搅拌条件下，使所说的织物与含有所说的蛋白酶的水溶液进行接触。这方法可在低于大约60℃以下的温度下进行，但是在直到沸点的洗衣温度下当然也是很有效的。本专利技术还涉及洗涤碗碟的方法，即把需要洗涤的碗碟与这里描述的蛋白酶接触。本专利技术的方法也涉及人身洗涤的方法，所说的方法包括把人类或较低等动物身体需要洗涤的部分与这里描述的蛋白酶接触。附图简述附图说明图1A～C描绘的是解淀粉芽孢杆菌枯草溶菌素的DNA和氨基酸序列以及这一基因的部分限制基因图谱(Seq.ID No.6)。图2描绘的是在由解淀粉芽孢杆菌(BPN′)和迟缓芽孢杆菌(野生型)得来的枯草溶菌素中保存的氨基酸残基。图3A和3B描绘的是四种枯草溶菌素的氨基酸序列。最上一行代表由解淀粉芽孢杆菌枯草溶菌素(有时也称为枯草溶菌素BPN′)中析离的枯草溶菌素的氨基酸序列(Seq.ID No.7)。第二行描绘由枯草杆菌(Bacillus subtilis)析离的枯草溶菌素的氨基酸序列(Seq.ID No.8)。第三行描绘由地衣芽孢杆菌(B.Licheniformis)析离的氨基酸序列(Seq.ID No.9)。第四行描绘了由迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)析离的枯草溶菌素(在PCT WO89/06276中也被称为枯草溶菌素309)的氨基酸序列(Seq.IDNo.10)。符号*表明与枯草溶菌素BPN′比较不存在这一特定的氨基酸残基。图4描绘了质粒GGA274的构造。图5描绘了GGT274的构造，它是为可靠表达用于本申请的质粒的一个中间体。图6A和图6B描绘了由迟缓芽孢杆菌析离的枯草溶菌素的DNA和氨基酸序列(Seq.ID No.11)。成熟的枯草溶菌素蛋白质是在相应于Ala的密码子GCG(334～336)处开始通过密码子编码的。图7A和7B描绘了本专利技术经优选的实施方案中的DNA和氨基酸序列(N 76D/S103A/V104I)(Seq.ID No.12)。这图中的DNA已用在位置76的天冬氨酸、在位置103的丙氨酸和在位置104的异亮氨酸编码时所描述的方法进行修饰。成熟的枯草溶菌素变种蛋白质是在相应于Ala的密码子GCG(334～336)处开始通过密码子编码的。图8描绘了载体pBCDAICAT的构造。图9描绘了载体pUCCATFNA的构造。图10表明经优选的突变体酶在液体洗涤剂配方中比野生型的有更好的稳定性。专利技术详述(1)蛋白酶本专利技术包括蛋白酶，它是天然界不存在的羰基水解酶变种，它和它的氨基酸序列与由之衍生的前体羰基水解酶相比，具有不同的解蛋白活度、稳定性、底物特异性、pH性能和/或品质特性。前体羰基水解酶可以是一种天然界存在的羰基水解酶或重组体水解酶。具体地说，这类羰基水解酶变种具有在天然界未发现过的氨基酸序列，它是用不同的氨基酸来置换前体羰基水解酶中的多个氨基酸残基而衍生出来的。这多个前体酶中的氨基酸残基相应于位置+76以及一种或多种下列残基的位置+99、+101、+103、+104、+107、+123、+27、+105、+109、+126、+128、+135、+156、+166、+195、+197、+204、+206、+210、+216、+217、+218、+222、+260、+265和/或+274，这里数字标示的位置相应于天然界存在的由解淀粉芽孢杆菌析离的枯草溶菌素中的位置或其它羰基水解酶或枯草溶菌素，诸如迟缓芽孢杆菌枯草溶菌素中等价的氨基酸残基的位置。用于本专利技术组合物中的羰基水解酶变种是一种蛋白酶，它包括置换+76位置的氨基酸残基并结合一种或多种别的修饰。最好是用于本专利技术的变种蛋白酶包括置换、删除或插入下列组合的氨基酸残基76/99；76/101；76/103；76/104；76/107；76/123；76/99/101；76/99/103；76/99/104；76/101/103；76/101/104；76/103/104；76/104/107；76/104/123；76/107/123；76/99/101/103；76/99/101/104；76/99/103/104；76/101/103/104；76/103/104/123；76/104/107/123；76/99/101/103/104；76/99/103/104/123；76/99/101/103/10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：A贝埃克，CK格霍什，TP格雷卡，RR鲍特，LJ威尔逊，PF布洛德三世，BL巴尔奈特，DN卢宾赫，
申请(专利权)人：普罗格特甘布尔公司，
类型：发明
国别省市：