本发明专利技术公开了一种确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白影响的方法，包括以下步骤：（1）配制溶液；(2)大豆蛋白进行水浴处理10min；(3)测定热功率时间曲线。本发明专利技术通过对蛋白酶水解大豆分离蛋白的热动力学过程进行研究，确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响，具有灵敏度高，操作简单、实验结果精准等优点，可以很好地对大豆深加工企业大豆肽生产中的蛋白酶水解工艺控制提供理论指导。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及的是大豆深加工技术，尤其是一种确确定金属离子对蛋白酶水解大豆 分离蛋白影响的研究方法。
技术介绍
大豆蛋白，是一种高品质蛋白，具有良好营养功能，但是由于结构复杂，导致大豆 蛋白的使用范围和使用量都受到限制。随着大豆蛋白的需求量不断增加和应用范围的扩 大，其原有功能特性已不能满足加工要求，运就需要对大豆蛋白进行改性，W适应不同用 途。植物蛋白的改性和功能性研究是当今发达国家研究的热点。通过改性等可W使大豆蛋 白原有的许多功能性质，如溶解性、乳化性、持油性等均有较大程度的提高，运些功能性质 的提高对大豆蛋白在食品工业中的应用具有重要价值，不同方式的改性可产生不同的功能 特性，从而拓宽大豆蛋白的应用领域。 大豆蛋白经蛋白酶水解形成小分子大豆寡肤，是一种具有极强活性和多样性的小 分子活性肤，它不需消化，直接吸收并直接进入细胞，发挥生理活性作用，它被人体吸收后， 在人体中起载体作用，可将进入人体的其他营养物质输送到人体需要的位置。进入人体后， 起信使作用，给神经传递信息。具有降血压、降血脂、调节免疫功能、抗氧化作用、低敏性、镇 静安神等功效。金属离子在蛋白酶水解大豆分离蛋白的过程中起到重要作用，有些金属离 子起到抑制作用，降低大豆寡肤得率，有些金属离子起到促进作用，提升大豆寡肤得率 国内外学者对金属离子的影响研究是通过测定产物的性质来确定，试验方法较复杂， 随意性较大，不能准确定量确定金属离子的影响效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供， 本方法通过对蛋白酶水解大豆分离蛋白的热动力学过程进行研究，确定确定金属离子对 蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响，具有灵敏度高，操作简单、实验结果精准等优点。 本专利技术的技术方案是：一种确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白影响的方 法，包括W下步骤：（1)配制溶液： 溶液:称取大豆蛋白样品，用不同pH值的憐酸盐缓冲溶液配制浓度为10g-L1的大 豆蛋白溶液；溶液:配制浓度为0. 5g-L1渡萝蛋白酶溶液；溶液:配制含不同浓度化2+， 1护，Li+，化+金属离子的，pH=6.99的大豆蛋白溶液。 大豆蛋白进行水浴处理lOmin; (3)测定热功率时间曲线：取溶液或;透2ml放入不诱钢安飯中，把滴定微量量热仪的 连杆上绕细塑料管，塑料管中盛溶液送）〇. 5ml，先预热，当溫度恒定后，将揽拌条件下，转速 为12化pm，用蠕动累把蛋白酶溶液注入安飯中，然后进行热功率一时间曲线的测定； 本专利技术利用微量量热仪测出竞争性竞争时不同金属离子影响蛋白酶水解解大豆分离 蛋白的热功率一时间曲线，分别计算出酶解反应的米凯利斯常数和最大反应速率 本专利技术的有益效果是：本专利技术通过对蛋白酶水解大豆分离蛋白的热动力学过程进行研 究，确定确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响，具有灵敏度高，操作简单、实验 结果精准等优点，可W很好地对大豆深加工企业大豆肤生产中的蛋白酶水解工艺控制提 供理论指导。【附图说明】 图1是渡萝蛋白酶水解大豆分离蛋白催化反应的热动力学研究图。 图2是在T=314. 63K，pH=6. 99时酶催化反应的米凯利斯常数（足"=50. 31g.L1)和 最大速率（2428g?L1 ?S1)图。 图3是在T=314. 63K，pH=6. 99时测定了渡萝蛋白酶对大豆蛋白催化作用在有不 同离子存在和无金属离子存在时的热功率一时间曲线图。 图4是不同浓度的不同金属离子化1 \化+)的义^日 图5是不同浓度的不同金属离子（化2\1邑2+)的义郝【具体实施方式】： 本专利技术用微量量热仪测定了在T=314. 63K，pH=6. 99无金属离子存在时酶催化反应的 热功率一时间曲线如图1 根据t时刻曲线下的面积和总面积之比可求出对比进度A按照（5)，（6)式，解 析出在T=314. 63K，pH=6. 99时酶催化反应的米凯利斯常数（足"=50. 31g?L1)和最大速率 化g产0. 2428g?L1 ?S1)。其结果见图2。 在T=314. 63K，pH=6. 99时测定了渡萝蛋白酶对大豆蛋白催化作用在有不同离子 存在和无金属离子存在时的热功率一时间曲线，见图3: 本专利技术用微量量热仪测定了有金属离子（Li\化+)作为竞争性抑制剂在渡萝蛋白酶最 适反应溫度（314. 63K)和最适反应酸度（pH=6. 99)时对大豆蛋白催化作用的热功率一时 间曲线，从热功率一时间曲线上的数据，可得到不同浓度的不同金属离子（Li\化+)的軒 和^^^,,其数据见图4。 从图3的数据，可W得到下列直线方程： 对于抑制剂 Li+ 户。4). 17c巧0.33 R=0. 9996 对于抑制剂 化"^,4). 14C+50. 24 R=0. 9986 从研究所得数据可知，金属离子^+，化+存在，^；,^是相同的，而1(111不同，且足/〉足，说 明了金属离子（Li+，化+)是属于竞争性抑制类型。抑制规律是：在相同浓度时Li+>化在 不同浓度时，随着金属金属离子浓度的增加而抑制增加。 本文用微量量热仪测定了金属离子（Ca2\Mg2+)作为竞争性激活剂在最适反应溫 度（314. 63K)和最适反应酸度（pH=6. 99)时渡萝蛋白酶对大豆蛋白催化作用下的热功 率一时间曲线。按照上述处理方法，可得到不同浓度的不同金属离子（Ca2\ 1护）的軒和 ^；<"，其数据见图5。 从图5的数据，可W得到下列直线方程： 对于激活剂 0曰2"户。二-0. 25C+50. 08 R=0. 9953 对于激活剂Mg2+ 户。二-0. 15c巧0.21 R=0. 9980。从研究所得数据可知，金属离子〔曰2+，1护存在，^；3^是相同的，而公不同，但足"〉 也U兑明了金属离子（Ca2+，Mg2+)是属于竞争性激活类型。激活规律是：在相同浓度时Ca2+ 〉Mg2+;在不同浓度时，随着金属离子浓度的增加而激活增加。【主权项】1. ，包括以下步骤：（1)配 制溶液： 溶液(D :称取大豆蛋白样品，用不同pH值的磷酸盐缓冲溶液配制浓度为10 g ?L1的 大豆蛋白溶液；溶液丨配制浓度为〇. 5g*L1菠萝蛋白酶溶液；溶液③：配制含不同浓 度Ca2+，Mg2+，Li+，Na+金属离子的，pH=6.99的大豆蛋白溶液。2. (2)大豆蛋白进行水浴处理lOmin; (3)测定热功率时间曲线：取溶液議|或鐘12ml放入不锈钢安瓿中，把滴定微量量热仪 的连杆上绕细塑料管，塑料管中盛溶液il〇. 5ml，先预热，当温度恒定后，将搅拌条件下，转 速为120rpm，用蠕动栗把蛋白酶溶液(g〕注入安瓿中，然后进行热功率一时间曲线的测定； 根据权利要求1所述的，其 特征在于：利用微量量热仪测出竞争性竞争时不同金属离子影响蛋白酶水解解大豆分离蛋 白的热功率一时间曲线，分别计算出酶解反应的米凯利斯常数和最大反应速率。【专利摘要】<b>本专利技术公开了，包括以下步骤：（1）配制溶液；(2)大豆蛋白进行水浴处理10min；(3)测定热功率时间曲线</b><b>。本专利技术通过对蛋白酶水解大豆分离蛋白的热动力学过程进行研究，确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响，具有灵敏度高，操作简单、实验结果精准等优点，可以很好本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种确定金属离子对蛋白酶水解大豆分离蛋白影响的方法，包括以下步骤：（1）配制溶液：溶液：称取大豆蛋白样品，用不同pH值的磷酸盐缓冲溶液配制浓度为10 g·L‑1的大豆蛋白溶液；溶液：配制浓度为0. 5 g· L‑1菠萝蛋白酶溶液；溶液：配制含不同浓度Ca2+, Mg2+ , Li+, Na+ 金属离子的，pH=6.99的大豆蛋白溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李向阳，董海洲，刘季善，张立国，燕效云，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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