一种构建大肠杆菌高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法技术

本发明专利技术公开了一种构建大肠杆菌高效分泌表达转肽酶SortaseA的方法，属于基因工程领域。本发明专利技术成功实现了SortaseA在大肠杆菌中的高效分泌表达，解决了目前已有报道中该酶无法分泌表达且胞内表达水平较低的问题。在摇瓶水平，所得SortaseA产量可达90.2mg/L，胞外酶活水平可达34.2U/mL；为后续SortaseA的工业化生产奠定了基础。

A method of construction of Escherichia coli to efficiently secrete expression of Sortase A

The invention discloses a method for the construction of Escherichia coli to efficiently secrete and express the expression of a peptide SortaseA, which belongs to the field of genetic engineering. The invention successfully realizes the efficient secretory expression of SortaseA in Escherichia coli, and solves the problem that the enzyme is unable to secrete and express low level in the current reports. In the shake flask, the yield of SortaseA can reach 90.2mg/L, extracellular enzyme activity levels up to 34.2U/mL; lay a foundation for subsequent industrialization SortaseA.

【技术实现步骤摘要】
一种构建大肠杆菌高效分泌表达转肽酶SortaseA的方法
本专利技术涉及一种构建大肠杆菌高效分泌表达转肽酶SortaseA的方法，属于基因工程领域。
技术介绍
SortaseA是一类介导革兰氏阳性菌细胞壁锚定蛋白与细胞壁共价结合的转肽酶，近些年其在生物
的应用吸引了越来越多的关注。自从2004年首次报道应用SortaseA作为一种蛋白质或多肽的连接工具以来，SortaseA参与的连接反应迅速成为一个研究热点，已被广泛应用于生物化学、蛋白质组学、生物医药以及生物工程技术等领域。但到目前为止，关于SortaseA高效表达和工业化生产的研究却很少，酶的表达方式仍主要局限于大肠杆菌的胞内表达。SortaseA的胞内表达存在以下几个主要的缺陷：(1)产率较低：在已有的报道中，最高产率仅为76.9mg/L；(2)胞内表达的SortaseA易在菌体内形成包涵体，且纯化前还需要经过耗时且成本较高的细胞破碎步骤。因此，构建SortaseA的大肠杆菌高效分泌表达菌株能解决该酶胞内表达时存在的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题首先是提供一种高效分泌表达SortaseA(转肽酶)的重组大肠杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效分泌表达SortaseA的重组大肠杆菌，其特征在于，以pET22a为表达载体，并利用载体上自带的PelB信号肽构建携带编码Sortase A的基因的重组表达载体，将重组表达载体与分子伴侣pG‑Tf2质粒共同转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。

【技术特征摘要】
1.一种高效分泌表达SortaseA的重组大肠杆菌，其特征在于，以pET22a为表达载体，并利用载体上自带的PelB信号肽构建携带编码SortaseA的基因的重组表达载体，将重组表达载体与分子伴侣pG-Tf2质粒共同转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)。2.根据权利要求1所述的一种高效分泌表达SortaseA的重组大肠杆菌，其特征在于，所述编码SortaseA的基因来源于金黄色葡萄球菌。3.根据权利要求1所述的一种高效分泌表达SortaseA的重组大肠杆菌，其特征在于，所述编码SortaseA的基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。4.一种构建权利要求1-3任一所述的重组大肠杆菌的方法，其特征在于，以pET22a为表达载体，并利用载体上自带的PelB信号肽构建携带编码SortaseA的基因的重组表达载体，将重组表达载体与分子伴侣pG-Tf2质...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴志猛，赵鑫锐，洪皓飞，邓涛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32