新型杂合几丁质酶的创制制造技术

本发明专利技术涉及基因重组技术领域，具体为一种获得产量提高、活性增强的杂合几丁质酶的方法。根据几丁质酶基因的全长序列设计引物，定向克隆到pET-30a载体获得pETChiA，然后在几丁质酶羧基端插入几丁质结合域或者催化域，重组成表达载体；将表达载体转化至大肠杆菌，诱导表达，用Tris缓冲液重悬得到的菌体，超声破碎，离心收集上清液；通过HIS镍柱收集获得含有重组几丁质酶的溶液，产品纯度高，产量高，活性高，成本低，生产工艺简单，产品质量稳定。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
新型杂合几丁质酶的创制，其特征是包括以下步骤：(1)根据几丁质酶基因Chi的全长序列设计引物，在引物5’端增加酶切位点，将几丁质酶基因序列定向克隆进入pET30a载体；然后在几丁质酶的羧基端插入几丁质结合域。这样即重组成表达载体pET‑30a‑Chi‑ChBD，相应表达产物为Chi‑ChBD。(2)将步骤(1)中构建好的表达载体pET‑30a‑Chi‑ChBD转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，用IPTG诱导重组基因的表达，离心收集菌体。(3)用Tris缓冲液重悬达到的菌体，超声破碎，离心收集上清液，得到含有重组几丁质酶的溶液。(4)将含有重组几丁质酶的溶液上HIS镍离子亲和柱，用Tris缓冲...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钟万芳，郭慧芳，刘宝生，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32