冬虫夏草中国被毛孢几丁质酶F、编码基因及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种来自“百令”生产菌冬虫夏草中国被毛孢的参与水解胶体状几丁质生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖的几丁质酶(Chitinase)F，编码这个酶基因及其应用。所述几丁质酶F的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因如SEQ ID No.2所示。本发明专利技术所提供的核苷酸序列的克隆DNA可以用来通过转导、转化、结合转移的方法转入工程菌中，通过调节几丁质水解以及N-乙酰-D-氨基葡萄糖合成基因的表达，赋予宿主几丁质酶F的高表达性，为扩大几丁质酶F的生物应用提供了有效途径，具有重大应用前景。

【技术实现步骤摘要】
冬虫夏草中国被毛孢几丁质酶F、编码基因及其应用(一)
本专利技术涉及一个来自“百令”生产菌冬虫夏草中国被毛孢几丁质酶(Chitinase)F，编码这个酶的基因及其应用。(二)
技术介绍
冬虫夏草(Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.)是冬虫夏草菌寄生在鳞翅目(Lepidoptera)蝙蝠蛾科昆虫(HepialusarmoricanusOberthur)幼虫上的子座及幼虫尸体上的复合体(包括子座和虫体)。冬虫夏草是一类珍惜的传统真菌药材资源，具有代谢产物和生物活性多样的特点，在生物医药领域展现出巨大的应用和发展前景。冬虫夏草以其多种药用功效广泛、明显而备受关注，在世界范围内备受推崇。中医认为，冬虫夏草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。现代药理学已证实，冬虫夏草具有免疫调节、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖血脂、性激素样作用等广泛的生物活性。冬虫夏草菌是一种子囊菌，在其生活史中具有分生孢子阶段(无性型)和子囊孢子阶段(有性型)。而在人工培养、液体发酵本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冬虫夏草中国被毛孢几丁质酶F，其特征在于所述几丁质酶F的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种冬虫夏草中国被毛孢几丁质酶F，其特征在于所述几丁质酶F的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.如权利要求1所述的几丁质酶F在生物催化胶体几丁质生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：将含几丁质酶F重组工程菌经诱导培养后的湿菌体用pH8.0磷酸盐缓冲液悬浮，超声破碎，离心，取上清液作为催化剂，以胶体几丁质溶液为底物，于pH值为4.6的醋酸缓冲液中，37℃下反应，反应结束后，将反应液离心，取上清液，获得含N-乙酰-D-氨基葡萄糖的混合液；所述胶体几丁质溶液按如下方法制备：将几丁质粉末加入丙酮中研磨至糊状，在10℃下边研磨边慢慢加入浓盐酸，用滤纸过滤，然后将滤液缓缓加入到剧烈搅拌的体积浓度50％乙醇水溶液中，析出沉淀，离心去上清液，收集胶体几丁质，用蒸馏水a冲洗数次至中性，混悬于蒸馏水b中即为胶体几丁质溶液；所述浓盐酸的体积用量以几丁质粉末质量计为40mL/g，所述蒸馏水b的体积用量以几丁质粉末质量计为100mL/g。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述底物的体积用量以几丁质粉质量计，终浓度为3.33mg/L；所述催化剂的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，郑裕国，林善，薛亚平，吴晖，李邦良，许静，许峰，王鸿艳，
申请(专利权)人：浙江工业大学，杭州中美华东制药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33