一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的RNA干扰载体制备方法技术

本发明专利技术公开了一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的RNA干扰载体制备及应用方法，通过BLAST搜索，从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出13条几丁质酶基因，从中挑选Unigene7021进行真实性检测，然后在NCBI上搜索比对保守序列，合成对应的dsRNA，将正、反向几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi载体“PFGC-7021P1F1/7021P2F2”，将构建的载体转入农杆菌感受态中，进而将农杆菌侵染植株获得转基因柑橘材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于RNA干扰载体制备
，尤其涉及一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的RNA干扰载体制备及应用。
技术介绍
柑橘全爪螨是一种世界性害螨，对柑橘产量和品质影响较大，目前化学防治仍是控制柑橘全爪螨的重要措施。化学农药施用不当，不仅影响果品安全，同时还会导致严重的抗性药。基于RNA干扰技术获得抗昆虫的转基因材料已在水稻、蔬菜和棉花等作物上取得成功。昆虫几丁质酶参与昆虫(螨类)蜕皮、围食膜降解和防御等重要生命活动。通过柑橘全爪螨几丁质酶基因构建RNA干扰载体，进而获得转基因柑橘材料对柑橘全爪螨进行控制具有广阔的应用前景。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的RNA干扰载体制备方法，旨在解决利用RNA干扰技术进行育种的问题。本专利技术实施例是这样实现的，一种柑橘全爪螨几丁质基因的应用方法，通过BLAST搜索，从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出13条几丁质酶基因，从中挑选Unigene7021进行真实性检测，然后在NCBI上搜索比对保守序列，合成对应的dsRNA，将正、反向几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi载体“本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的RNA干扰载体制备方法，其特征在于，通过BLAST搜索，从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出13条几丁质酶基因，从中挑选Unigene7021进行真实性检测，然后在NCBI上搜索比对保守序列，合成对应的dsRNA，将正、反向几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi载体“PFGC?7021P1F1/7021P2F2”，将构建的载体转入农杆菌感受态中，进而将农杆菌侵染植株获得转基因柑橘材料。

【技术特征摘要】
1.一种一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的RNA干扰载体制备方法，其特征在于，通过BLAST搜索，从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出13条几丁质酶基因，从中挑选Unigene7021进行真实性检测，然后在NCBI上搜索比对保守序列，合成对应的dsRNA，将正、反向几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi载体“PFGC-7021P1F1/7021P2F2”，将构建的载体转入农杆菌感受态中，进而将农杆菌侵染植株获得转基因相橘材料。2.如权利要求1所述的RNA干扰载体制备方法，其特征在于，通过柑橘全爪螨转录组搜索，获得几丁质酶基因Unigene7021，对该基因序列进行真实性检测后，在NCBI上比对找出保守序列设计构建dsRNA。3.如权利要求1所述的RNA干扰载体制备方法，其特征在于，将正向目标基因7021P1F1质粒双酶切，同时将载体PFGC5941质粒用相同两...

【专利技术属性】
技术研发人员：冉春，张云飞，刘浩强，陈飞，李鸿筠，李俊丽，李晓姣，岳建书，
申请(专利权)人：冉春，
类型：发明
国别省市：