一种培育富含花青苷烟草的方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种培育富含花青苷烟草的方法。以杨梅果实中已确认的可调控花青苷合成的两个基因MrMYB1和MrbHLH1重组，构建成表达质粒，采用烟草叶片瞬时表达技术筛选可调控花青苷合成的基因，将确认功能的基因转化到烟草，培育出富含花青苷的烟草。本发明专利技术提供了一种培育富含花青苷烟草的方法，使得减轻吸烟带来的健康危害成为可能。本方法同样适用于杨梅以外的MYB和bHLH基因。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物分子生物技术和基因工程领域，涉及一种培育富含花青苷烟草的方法及其应用。
技术介绍
吸烟严重影响人体健康。吸烟不仅可诱导心血管病、慢性肺病和癌症，而且会增加传染病的发生概率，直接导致严重流行性感冒、侵入性肺炎和结核病的发病几率上升；引起众多的生殖并发病，包括不育、自发性流产、婴儿体重过轻和夭折等综合症状；使人体产生胰岛素抗性，是糖尿病发病的重要因素，而且会加速吸烟者患血管病的进程；还会影响手术后身体的恢复，包括延缓伤口愈合和增加伤口感染的几率等。随着人们健康观念的不断提升，发达国家中烟民的数量有所减少，然而在较多发展中国家中，仍有超过40%人口的烟民。多数烟民都有严重的烟瘾，从而无法通过戒烟来避免吸烟引起的疾病。对于这部分烟民来说，选择含较少有害物质的烟草可能是一个可行的策略。花青苷属于黄酮类化合物，广泛存在于绝大部分陆生植物的液泡中，是红色、蓝色和紫色色泽的主要构成物。花青苷具有多种重要功能。除作为天然色素外，花青苷还具有很强的抗氧化、清除氧自由基的能力，是具有保健功能的天然活性物质，被誉为继水、蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质之后的第七大必需营养。长期以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培育富含花青苷烟草的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）表达载体构建：根据序列为SEQ：NO.?1的MrMYB1的序列全长设计含限制性内切酶酶切位点的序列为SEQ：NO.?2和SEQ：NO.?3的引物对，根据序列为SEQ：NO.?4的MrbHLH1的序列全长设计含限制性内切酶酶切位点序列为SEQ：NO.?5和SEQ：NO.?6，PCR的引物对，扩增两个基因的开放性阅读框，然后采用相应的内切酶处理扩增产物和表达质粒pGreenII?SK，最后通过连接相对应的PCR产物和质粒，分别进行MrMYB1和MrbHLH1过量表达载体的构建；（2）双价表达载体构建：根据表达质粒pGreenII?S...

【技术特征摘要】
1.一种培育富含花青苷烟草的方法，其特征在于，通过以下步骤实现 (1)表达载体构建根据序列为SEQN0.1饱MrMYBl的序列全长设计含限制性内切酶酶切位点的序列为SEQ N0. 2和SEQ N0. 3的引物对，根据序列为SEQ N0. 4饱MrbHLHl的序列全长设计含限制性内切酶酶切位点序列为SEQ N0. 5和SEQ N0. 6,PCR的引物对，扩增两个基因的开放性阅读框，然后采用相应的内切酶处理扩增产物和表达质粒PGreenIISK，最后通过连接相对应的PCR产物和质粒，分别进行#r#7S7取MrbHLHl过量表达载体的构建； (2)双价表达载体构建根据表达质粒pGreenllSK序列为SEQ N0. 7，设计序列为SEQ N0. 8和SEQ N0. 9的引物对，扩增CaMV加尾信号序列，引物对SEQ N0. 10和SEQ NO. 11扩增35S启动子序列，根据融合PCR技术原理设计引物对SEQ NO. 12和SEQ NO.13扩增MrMm的开放性阅读框片段，引物对SEQ NO. 14和SEQ NO. 15貧箄MrbHLHl的开放性阅读框片段，应用融合PCR技术进行含份双价载体的构建，第一轮PCR分别扩增出CaMV加尾信号、35S启动子、MrMYBl和MrbHLHl序列，第二轮PCR扩增出中间产物模板，第三轮PCR扩增出最终融合目的片段； (3)基因的功能预测应用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达技术，将含有各表达载体的农杆菌渗透液，输入烟草叶片表皮细胞内，植株置于温室培养8天后观察叶片中花青苷合成情况，若输入孔周围有花青苷积累，说明输入叶片的基因具有诱导花青苷积累的功能； (4)烟草转基因技术将采用瞬时表达技术筛选的含...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙崇德，徐昌杰，殷学仁，刘晓芬，李鲜，张波，陈昆松，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：