在家蚕细胞内表达人源化糖蛋白转基因转座载体及构建法制造技术

本发明专利技术公开了一种在家蚕细胞内表达人源化糖蛋白的转基因转座载体，该载体中包含一个GFP报告基因和/或一个Neomycin抗性筛选基因，还包含以下4个糖基转移酶基因中的至少一个：GnT2、β4GalT、ST3和ST6。本发明专利技术还公开了含人源化糖基转移酶基因的家蚕转基因细胞系，将上述载体与Helper质粒按照3：3：1的质量比转染家蚕细胞，通过G418筛选，形成细胞单克隆化的克隆岛，再经传代培养，构成转基因家蚕细胞系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及将PiggyBac转座载体应用于生产转基因家蚕细胞系。具体地讲,本专利技术涉及构建一个用于生产转基因家蚕细胞系的新型piggyBac转座载体。该载体可用于构建转基因家蚕细胞系，并通过Bac-to-Bac系统表达人源化糖蛋白。该载体包括一个GFP的报告基因和/或一个Neomycin的抗性筛选基因，以及1_4个糖基转移酶基因(GnT2，GalT,ST3, ST6)。
技术介绍
piggyBac (以前叫作IFP2)转座子，是一个来源于鳞翅目昆虫的DNA型转座子，在结构上与II型短的插入重复因子相关，在分类上属于第二类型，这一类型的因子包括hobo、hermers、mariner、P、Tcl 和 AC 因子。piggyBac 转座子最初是在杆状病毒(Baculovirus)侵染 Trichoplusia ni 昆虫 TN-368 细胞株系时，从 Galleria mellonella (GmMNPV)或Autographa californica (AcMNPV)核多角体病毒内首次分离得到的。piggyBac转座子是一个自主因子，长2476bp，含有一个RNA聚合酶II启动本文档来自技高网...

【技术保护点】
在家蚕细胞内表达人源化糖蛋白的转基因转座载体，其特征是：该载体中包含一个GFP报告基因和/或一个Neomycin抗性筛选基因，还包含以下4个糖基转移酶基因中的至少一个：?GnT2、β4GalT、ST3和ST6。

【技术特征摘要】
1.在家蚕细胞内表达人源化糖蛋白的转基因转座载体，其特征是该载体中包含一个GFP报告基因和/或一个Neomycin抗性筛选基因，还包含以下4个糖基转移酶基因中的至少一个GnT2、β 4GalT、ST3 和 ST6。2.根据权利要求1所述的在家蚕细胞内表达人源化糖蛋白的转基因转座载体，其特征是该载体中包含一个GFP报告基因以及以下4个糖基转移酶基因中的至少2个GnT2、β 4GalT,ST3 和 ST6。3.根据权利要求1所述的在家蚕细胞内表达人源化糖蛋白的转基因转座载体，其特征是该载体包含一个Neomycin筛选基因以及以下4个糖基转移酶基因中的至少2个GnT2、β 4GalT, ST3 和 ST6。4.如权利要求2所述的在家蚕细胞内表达人源...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪云根，胡嘉彪，杨华军，周芳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：