本发明专利技术化学合成的ＨＳＶ１病毒ｇＤ糖蛋白胞外区基因片段及其表达、应用涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。本发明专利技术通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的ＨＳＶ１病毒ｇＤ糖蛋白胞外区片段，第１个氨基酸至第２８４个氨基酸，共２８４个氨基酸，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成抗原表位的全新基因序列，利用基因工程技术表达该基因片段、制备ＨＳＶ１病毒ｇＤ糖蛋白的强抗原表位片段及ＨＳＶ１病毒ｇＤ糖蛋白的抗血清。表达的ＨＳＶ１病毒ｇＤ糖蛋白可用于疫苗、ＨＳＶ１病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗ＨＳＶ１病毒单抗和多抗等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是化学合成的HSVl病毒gD糖蛋白胞外区的全新基因片段，利用基因工程技术，制备重组HSVl病毒gD糖蛋白。通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的HSVl病毒的gD糖蛋白胞外区片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达，表达的蛋白可用于疫苗及HSV1病毒抗体或抗原的检测等，本专利技术涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。
技术介绍
单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus, HSV)是最早发现的人类疱疹病毒，容易导致复发性感染和潜伏感染，对人体危害严重，分为HSV-l及HSV-2两个血清型。l型单纯疱疹病毒主要引起口面部感染、眼部感染和疱疹性脑炎等；而2型主要引起生殖器感染，并且和女性宫颈癌的发生密切相关。近年HSV1的感染显著增多，约占该病的10% 40%。目前药物治疗HSV感染时常出现相应耐药性，所以研制疫苗是切实可行的有效方法，它能使机体在抗HSV感染免疫中，发挥体液免疫和细胞免疫功能来消除HSV感染。至今已研制了多种HSV疫苗，已有两种HSV糖蛋白疫苗进入III期临床试验，即Chiron公司研制的重组gD2/gB2糖蛋白与MF59佐剂配伍而成的疫苗以及Glaxo Smith Kline(GSK)公司开发的重组gD2糖蛋白与另一佐剂(3-de-0-酰化单磷酸类脂A和明矾)配伍而成的疫苗，这两种疫苗均有一定的保护作用，但临床效果有限。国内目前对HSV疫苗的研究，主要集中在DNA核酸疫苗的探索研究方面。目前认为HSV基因组有34个基因，编码70多种蛋白质，其中胞膜糖蛋白正式命名的有12种，它们以独特或复合体的形式在HSV复制循环及病毒的感染致病中发挥不同的作用。其中gD由HSV的US6基因编码，是病毒胞膜的主要成分，对于病毒与细胞稳定结合具有重要意义，促进病毒胞膜和细胞间的溶解，介导病毒的胞间扩散、释放。同时gD蛋白在病毒的复制和刺激中和抗体的产生中起重要作用，也是宿主细胞免疫和体液免疫反应的主要靶标之一，因此HSVlgD糖蛋白是构建HSV基因疫苗理想的目的基因。HSVl病毒gD糖蛋白基因全长1185bp，编码312个氨基酸序列的胞外区、54个氨基酸序列的跨膜区、28氨基酸序列的胞内区。研究表明，为增强编码抗原蛋白的免疫原性，可去除其部分功能性编码序列，特别在完整抗原蛋白对宿主具有毒性或免疫抑制作用的情况下，对抗原蛋白进行截短表达就尤其重要。而截短后的gD基因构建的疫苗，与用完整gD基因构建的疫苗对HSV1病毒攻击具有相同的保护作用。故本研究通过计算机分析，我们筛选出含强抗原表位的HSVl病毒的gD糖蛋白胞外区片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达，表达产物具有较好的抗原性和免疫原性，表达的蛋白可用于疫苗及HSV1病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗HSV1病毒单抗和多抗等。
技术实现思路
本专利技术是化学合成的HSV1病毒gD糖蛋白胞外区的全新基因片段，利用基因工程技术，制备重组HSVl病毒gD糖蛋白胞外区片段。通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的HSV1病毒gD糖蛋白胞外区片段，第1个氨基酸到第284个氨基酸，共284个氨基酸，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表达该基迈。表达的蛋白可用于疫苗、HSV1病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗HSV1病毒单抗和多抗等。化学合成的HSV1病毒gD糖蛋白胞外区基因片段及其表达、应用是采取以下步骤实施的1. HSV1病毒gD糖蛋白胞外区抗原表位的筛选及其基因片段的化学合成利用ANTHEWIN等软件，通过计算机分析HSV1病毒gD糖蛋白的氨基酸序列，发现gD糖蛋白的N端(第1氨基酸到第284氨基酸)含有较强的抗原决定簇。选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，并且在5'端增加了Hindin酶切位点(下画线部分)，转录调控序列(GCCGCCACC),起始密码子(ATG)，人IgG k轻链信号肽(波浪线部分)，8XHis标签及TEV蛋白酶酶切位点(gaaaacctgtacttccagggt)，在3'端增加了终止密码子(TAA)和BamH I酶切位点(下画线部分)，使该基因片段易于克隆至质粒pCEP4内的Hind III和BamH I酶切位点内，并且使gD蛋白更易于表达和纯化。筛选的HSV1病毒gD糖蛋白内的抗原表位氨基酸序列(第1个氨基酸到第284个氨基酸)Lys 丁yrAlaLeuAlaAspAlaSerLeuLysMetAlaAspProAsnArgPheArgGlyLys AspLeu ProValLeuAspProLeuThrAspProProGlyValArgArgValTyrHislieGin AlaGly LeuProAspProPheGinProProSerteuProlieThrValTyrTyrAlaValLeu GluArg AlaCysArgSerValLeuLeuAsnAlaProSerGluAlaProGinlieValArgGy AlaSer GluAspValArgLysGinProTyrAsnLeuThrlieAlaTrpPheArgMetGlyGly AsnCys AlalieProlieThrValMetGluTyrThrGluCysSerTyrAsnLysSerLeuGly AlaCys ProlieArgThrGinProArgTrpAsnTyrTyrAspSerPheSerAlaValSerGlu AspAsn LeuGlyPheLeuMetHisAlaProAlaPheGluThrAlaGlyThrTyrLeuArgLeu ValLys lieAsnAspTrpThrGlulieThrGinPhelieLeuGluHisArgAlaLysGySer CysLys TyrAlaLeuProLeuArglieProProSerAlaCysLeuSerProGinAlaTyrGin GinGly ValThrValAspSerlieGlyMetLeuProArgPhelieProGluAsnGinArgThr ValAla ValTyrSerLeuLyslieAlaGlyTrpHisGlyProLysAlaProTyrThrSerThr LeuLeu ProProGluLeuSerGluThrProAsnAlaThrGinProGluLeuAlaProGluAsp ProGlu Asp Ser Ala Leu Leu Glu Asp Pro Val Gly化学合成的含HSV1病毒gD糖蛋白胞外区抗原表位基因的DNA序列(981 bp):A虹TT GCC GCC ACC ATG GAA ACC CCA GCG CAG CTT CTC TTC CTC CTG CTA CTC TGG CTC CCAGAT ACC ACC GGA CAT CAT CAC CAT CAC CAT CAC CAT GAA AAC CTG TAC TTC CAG GGT AAG TAC^5T^^: GAT GCT AGC CTG AAG ATG GCT GAT CCT AAC CGC TT本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种化学合成的ＨＳＶ１病毒ｇＤ糖蛋白胞外区基因片段，该基因片段编码含强抗原表位的ＨＳＶ１病毒的ｇＤ糖蛋白胞外区片段，即第１个氨基酸至第２８４个氨基酸，共２８４个氨基酸，化学合成的基因序列全长８５２ｂｐ，序列如下： ＡＡＧ ＴＡＣ ＧＣＴ ＣＴＧ ＧＣＣ ＧＡＴ ＧＣＴ ＡＧＣ ＣＴＧ ＡＡＧ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＡＴ ＣＣＴ ＡＡＣ ＣＧＣ ＴＴＣ ＡＧＡ ＧＧＴ ＡＡＧ ＧＡＣ ＣＴＧ ＣＣＴ ＧＴＧ ＣＴＧ ＧＡＣ ＣＡＧ ＣＴＧ ＡＣＣ ＧＡＣ ＣＣＴ ＣＣＴ ＧＧＣ ＧＴＧ ＣＧＣ ＡＧＡ ＧＴＧ ＴＡＣ ＣＡＣ ＡＴＴ ＣＡＧ ＧＣＴ ＧＧＴ ＣＴＧ ＣＣＴ ＧＡＣ ＣＣＴ ＴＴＣ ＣＡＧ ＣＣＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＣＴＧ ＣＣＴ ＡＴＣ ＡＣＣ ＧＴＧ ＴＡＣ ＴＡＣ ＧＣＣ ＧＴＧ ＣＴＧ Ｇ ＡＧ ＡＧＡ ＧＣＣ ＴＧＴ ＣＧＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＣＴＧ ＡＡＣ ＧＣＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＧＡＧ ＧＣＴ ＣＣＴ ＣＡＧ ＡＴＣ ＧＴＧ ＡＧＡ ＧＧＴ ＧＣＴ ＡＧＣ ＧＡＡ ＧＡＣ ＧＴＧ ＡＧＧ ＡＡＧ ＣＡＧ ＣＣＴ ＴＡＣ ＡＡＣ ＣＴＧ ＡＣＣ ＡＴＣ ＧＣＣ ＴＧＧ ＴＴＣ ＡＧＧ ＡＴＧ ＧＧＴ ＧＧＴ ＡＡＣ ＴＧＴ ＧＣＴ ＡＴＣ ＣＣＴ ＡＴＣ ＡＣＣ ＧＴＧ ＡＴＧ ＧＡＧ ＴＡＣ ＡＣＣ ＧＡＧ ＴＧＴ ＴＣＴ ＴＡＣ ＡＡＣ ＡＡ Ｇ ＡＧＣ ＣＴＧ ＧＧＣ ＧＣＴ ＴＧＴ ＣＣＴ ＡＴＣ ＣＧＣ ＡＣＣ ＣＡＧ ＣＣＴ ＡＧＧ ＴＧＧ ＡＡＣ ＴＡＣ ＴＡＣ ＧＡＣ ＡＧＣ ＴＴＣ ＡＧＣ ＧＣＴ ＧＴＧ ＡＧＣ ＧＡＧ ＧＡＣ ＡＡＣ ＣＴＧ ＧＧＣ ＴＴＣ ＣＴＧ ＡＴＧ ＣＡＣ ＧＣＴ ＣＣＴ ＧＣＣ ＴＴＣ ＧＡＧ ＡＣＣ ＧＣＴ ＧＧＣ ＡＣＣ ＴＡＣ ＣＴＧ ＡＧＧ ＣＴＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＡＴＣ ＡＡＣ ＧＡＣ ＴＧＧ ＡＣＣ ＧＡＧ ＡＴＣ ＡＣＣ ＣＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＣＴ Ｇ ＧＡＧ ＣＡＣ ＡＧＡ ＧＣＣ ＡＡＧ ＧＧＴ ＡＧＣ ＴＧＴ ＡＡＧ ＴＡＣ ＧＣＴ ＣＴＧ ＣＣＴ ＣＴＧ ＡＧＡ ＡＴＣ ＣＣＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＧＣＴ ＴＧＴ ＣＴＧ ＡＧＣ ＣＣＴ ＣＡＧ ＧＣＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＡＡ Ｇ ＧＣ ＧＴＧ ＡＣＣ ＧＴＧ ＧＡＣ ＡＧＣ ＡＴＣ ＧＧＴ ＡＴＧ ＣＴＧ ＣＣＴ ＣＧＣ ＴＴＣ ＡＴＣ ＣＣＴ ＧＡＧ...
【技术特征摘要】
1.一种化学合成的HSV1病毒gD糖蛋白胞外区基因片段，该基因片段编码含强抗原表位的HSV1病毒的gD糖蛋白胞外区片段，即第1个氨基酸至第284个氨基酸，共284个氨基酸，化学合成的基因序列全长852bp，序列如下AAG TAC GCT CTG GCC GAT GCT AGC CTG AAG ATG GCT GAT CCT AAC CGC TTC AGAGGT AAG GAC CTG CCT GTG CTG GAC CAG CTG ACC GAC CCT CCT GGC GTG CGC AGAGTG TAC CAC ATT CAG GCT GGT CTG CCT GAC CCT TTC CAG CCT CCT AGC CTG CCTATC ACC GTG TAC TAC GCC GTG CTG GAG AGA GCC TGT CGC AGC GTG CTG CTG AACGCT CCT AGC GAG GCT CCT CAG ATC GTG AGA GGT GCT AGC GAA GAC GTG AGG AAGCAG CCT TAC AAC CTG ACC ATC GCC TGG TTC AGG ATG GGT GGT AAC TGT GCT ATCCCT ATC ACC GTG ATG GAG TAC ACC GAG TGT TCT TAC AAC AAG AGC CTG GGC GCTTGT CCT ATC CGC ACC CAG CCT AGG TGG AAC TAC TAC GAC AGC TTC AGC GCT GTGAGC GAG GAC AAC CTG GGC TTC CTG ATG CAC GCT CCT GCC TTC GAG ACC GCT GGCACC TAC CTG AGG CTG GTG AAG ATC AAC GAC TGG ACC GAG ATC ACC CAG TTC ATCCTG GAG CAC AGA GCC AAG GGT AGC TGT AAG TAC GCT CTG CCT CTG AGA ATC CCTCCT AGC GCT TGT CTG AGC CCT CAG GCC TAC CAG CAA GGC GTG ACC GTG GAC AGCATC GGT ATG CTG CCT CGC TTC ATC CCT GAG AAC CAG AGG ACC GTG GCT GTG TACAGC CTG AAG ATC GCT GGC TGG CAC GGT CCT AAG GCT CCT TAC ACC AGC ACT CTGCTG CCT CCT GAG CTG AGC GA...
【专利技术属性】
技术研发人员：李越希，王正茂，管文燕，李琳，李素芹，潘英，潘明洁，
申请(专利权)人：李越希，
类型：发明
国别省市：84[]
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