CD59糖蛋白的应用制造技术

本发明专利技术通过筛选在肝细胞癌的癌组织和癌旁组织中存在差异表达的蛋白，找到了一种在肝细胞癌的癌组织中高表达的蛋白，免疫印迹实验进一步证实了ＣＤ５９糖蛋白的确在肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达。鉴于ＣＤ５９糖蛋白与肝细胞癌的这种相关性，该蛋白可以用作检测肝细胞癌的蛋白质分子标记。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种CD59糖蛋白用作检测肝癌的蛋白质分子标记的应用。
技术介绍
肝癌是一种严重危害人类的疾病。西方发达国家肝癌的发病率较低，国际上对肝癌的基础研究仍较为薄弱，而我国是肝癌高发国家，发病率和死亡率呈现上升趋势，且发病年龄构成年轻化，每年用于肝癌治疗的医疗支出大为增加，肝癌成了严重危害我国人民生命财产安全的头号敌人，并且是影响社会经济发展的一个重要因素，加大力度进行我国肝癌的基础研究具有战略意义，而分离和鉴定新的肝癌相关基因是目前肝癌基础研究中的前沿课题。到目前为止，已有不下20种的基因异常表达被确定与肝癌的发生发展有关，但已确定的肝癌相关基因在肝癌中的异常表达率并不高，肝癌的发病机制至今仍未阐明，肝癌的早期诊断率仍有待提高。此外，传统的肝癌手术加化疗以及近年来配合使用的多种基因治疗方法仍没有明显提高肝癌患者的生存率，因而寻找新的肝癌相关基因尤其是肝癌高表达基因对于探讨肝癌的发病机制具有重要意义。因此，为治疗和诊断目的研究和开发在肝癌中高表达的基因和/或蛋白具有重要意义。本领域迫切需要新的在肝癌中高表达的基因和/或蛋白。CD59糖蛋白(CD59 glycoprotein；Membrane attack complex inhibition factor；MACIF；MAC-inhibitory protein；MAC-IP；Protectin；MEM43 antigen；Membrane inhibitor of reactivelysis；MIRL；20kDa homologous restriction factor；HRF-20；HRF20；1F5 antigen；P18)的Genebank登录号为gi|10835165，NCBI的登录号为NP_000602，Swissprot登录号为P13987，IPI号为IPI00011302.1。CD59的cDNA已经克隆，并确定CD59的基因定位于人的第11号染色体短臂，其核苷酸序列与氨基酸序列相对应，并与小鼠的CD59有同源性。CD59是近年(1989)才发现的一种分子量只有18～20kDa的膜性调节蛋白。由Sugita等(1988年)首先描述，曾有不同的名称，如同种限制因子20(homologous restrictionfactor-20)，保护素(protectin)及膜反应性溶破抑制物(membrane inhibitor of reactive lysis，MIRL)等。CD59由103个氨基酸残基组成，含有单一的N端糖基化位点，其C端借GPI(2.3糖基磷脂酚肌醇)锚固定于细胞表面。CD59分布甚广泛，已证明皮肤、肝、肾、胰、肺、唾腺、神经系统、胎盘以及各种血细胞(红细胞、淋巴细胞、中性粒细胞及血小板)和精子上均有表达。C59的主要生理功能是，防止MAC(膜攻击复合物)对同种或自身细胞的溶解破坏，即同种限制作用(homologous species restriction，HSR)。作用机理为通过其与C7、C8或C9的结合而阻止MAC组装。当其与C5b～7复合物结合后，可阻止其再与C8结合；当其与C8结合后，则可阻碍结合至MAC上的第1个C9分子的铺展，从而阻止后继C9的结合；而当其与MAC中的C9结合后，又可阻止C9进一步分子的聚合。这样，在有CD59存在的情况下，在同种或自身细胞的表面便不能顺利地完成MAC的全部组装，或不能组装成C5b～(9)n复合物，从而限制了对同种或自身细胞的溶解作用。Rooney等的报道表明，CD59的这种同种限制作用的机理对保护子宫内的胎儿不被MAC的攻击也有作用(大众医药网www.windrug.com/pic/30/11/20/067.htm)。此外，CD59还促进T细胞粘附与激活，维持精子在女性生殖道内的稳定性与活性，以及参与PNH发病机理的作用。2000年有文献报导，在细胞因子的介导下，肝细胞能够高表达CD55和CD59，从而保护其免受补体的攻击(Clinical & Experimental Immunology.Volume 121 Issue 2 Page234-August 2000)。最近的一些文献也报导了癌细胞通过调节，高表达一些补体调节蛋白，如CD46、CD55、CD59等，来逃避免疫系统或补体系统的攻击(Eur.J.Immunol.2005 Jul；35(7)2175-83)。但是到目前为止，现有技术中未见有CD59糖蛋白与肝细胞癌的直接相关性及其作用机理的相关报导。
技术实现思路
通过筛选在肝细胞癌癌组织以及肝细胞癌癌旁组织中差异表达的蛋白质，本申请的专利技术人找到了一种在肝细胞癌的癌组织和癌旁组织中存在差异表达的蛋白质(在癌组织中上调表达)，经质谱鉴定为CD59糖蛋白。进一步的免疫印迹实验证实，CD59糖蛋白的确在肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达(在癌组织中上调表达)。基于CD59糖蛋白与肝细胞癌的这种相关性，以该蛋白可以作为一个蛋白质分子标记对其表达量进行检测可以用于检测肝癌。因此，本专利技术的首要目的即在于提供一种CD59糖蛋白用作检测肝癌的蛋白质分子标记的应用。本专利技术的另一个目的在于提供一种抗CD59糖蛋白的抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，用于制备检测肝癌的制剂的应用。本专利技术的再一个目的还在于提供一种抗CD59糖蛋白的抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，用于制备检测肝癌的试剂盒的应用。本专利技术的又一个目的在于提供一种体外检测肝细胞组织中CD59糖蛋白的表达是否异常的方法，该方法包括以下步骤A、用特异性抗CD59糖蛋白的抗体检测待测肝细胞中CD59糖蛋白的数量；B、将步骤A测得的CD59糖蛋白的数量与正常肝组织中的CD59糖蛋白的数量进行比较，如测得的蛋白数量高于正常值，则表示被检测肝组织中CD59糖蛋白的表达异常。本专利技术的CD59糖蛋白与肝细胞癌的相关性的这一发现将为肝细胞癌的诊断和/或治疗提供一条全新的途径。附图说明图1为CD59糖蛋白的免疫印迹分析结果示意图。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。本申请的专利技术人用非酶解样品制备法(nonenzymatic sample preparation，NESP)制备了肝细胞癌的癌组织与癌旁组织蛋白质样品，以同位素亲和标签与凝胶增强的液质联用技术(gel-enhanced liquid chromatography-mass spectrometry coupled with isotope-coded affinitytag，GeLC-MS-ICAT)对其中的蛋白进行鉴定并比较其表达量，结果发现CD59糖蛋白在肝细胞癌癌组织中高表达。免疫印迹实验进一步证实CD59糖蛋白的确在肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达。因此，以CD59糖蛋白作为一个蛋白质分子标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＣＤ５９糖蛋白的应用，其特征在于，用作检测肝癌的蛋白质分子标记。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾嵘，李辰，周晓，袁新雨，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]