抑制STAT3 和AFP 基因表达的双靶标siRNA 真核表达质粒及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抑制STAT3和AFP基因表达的双靶标siRNA真核表达质粒及其用途。本发明专利技术以利用RNA干涉技术为主，针对肿瘤中异常高表达的AFP和STAT3基因的靶序列，构建了能在真核细胞中同时表达STAT3和AFP?siRNA的质粒pGenesil1.5-STAT3-AFP。本发明专利技术能高效、特异性地抑制肿瘤细胞的STAT3和AFP基因表达，可用于制备治疗表达STAT3的AFP阳性肿瘤的基因药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抑制STAT3和AFP基因表达的双靶标siRNA真核表达质粒及其用途， 属于生物医药

技术介绍
甲胎蛋白(alpha_fetoprotein,AFP)是胚胎期由肝脏、卵黄囊产生的一种糖蛋白， 出生后急剧降低。当发生肝脏肿瘤、某些胃肠道肿瘤和某些生殖系统肿瘤时，血清AFP水平又复升高。目前AFP作为一种公认的肿瘤标志物在肿瘤的诊断中具有重要作用。大约有 80%的肝癌患者血清AFP升高，是诊断原发性肝癌的常用检查项目之一。有约50%的生殖细胞肿瘤出现AFP阳性，在其它肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。其中AFP阳性胃癌发病率占胃癌的5. 1%_15%，这种肿瘤恶性程度高，具有细胞形态学像肝癌，易发生肝转移和早期淋巴道转移，侵袭性强，预后差的特点。近年来研究发现AFP在肿瘤的发生发展中具有重要作用(I)免疫调节活性AFP 能抑制NK细胞活性及T淋巴细胞依赖的抗原反应，诱导抑制性T细胞的产生，下调单核细胞表面的MHC-1I类分子，及抑制肿瘤坏死因子对肿瘤细胞的细胞毒性作用；AFP还能降低肝癌细胞死亡受体的表达，使之逃避淋巴细胞的攻击。(2本文档来自技高网...

【技术保护点】
抑制STAT3和AFP基因表达的双靶标siRNAs真核表达质粒，其特征是，以pGenesil1.5为载体，利用双靶标siRNA技术，在一个shRNA表达质粒上引入针对STAT3和AFP基因有效的shRNA序列，每个序列有各自的启动子及终止信号且各自独立表达，在高表达的STAT3基因的AFP阳性肿瘤中发挥干扰作用,是用于表达STAT3基因的AFP阳性肿瘤的治疗性物质；所述的shRNA序列的两个反向重复序列分别是STAT3或AFP基因的干涉靶序列及其反向互补序列；所述的STAT3、AFP基因的干涉靶序列分别为：①5“?GCAACAGATTGCCTGCATTGG?3“，起始于956位；②5“?CAG...

【技术特征摘要】
1.抑制STAT3和AFP基因表达的双靶标siRNAs真核表达质粒，其特征是，以pGenesill. 5为载体，利用双靶标siRNA技术，在ー个shRNA表达质粒上引入针对STAT3和AFP基因有效的shRNA序列，每个序列有各自的启动子及终止信号且各自独立表达，在高表达的STAT3基因的AFP阳性肿瘤中发挥干扰作用，是用于表达STAT3基因的AFP阳性肿瘤的治疗性物质； 所述的shRNA序列的两个反向重复序列分别是STAT3或AFP基因的干涉靶序列及其反向互补序列； 所述的STAT3、AFP基因的干涉靶序列分别为①5’ -GCAACAGATTGCCTGCATTGG-3’，起始于 956 位5’ -CAGGGAGACATTCATGAAC-3'，起始于 508 位； 所述的STAT3、AFP基因的干涉靶序列的反向互补序列分别为5’-CCAATGCAGGCAATCTGTTGC-3’ ，5’-GTTCATGAATGTCTCCCTG-3’ ； STAT3、AFP 基因 shRNA 表达框的 loop 序列分别为5’ -GGCCGGCGCGC-3’，5，-CGCGCGCGGGCC-3，； 由以下方法制得 (1)STAT3和AFP基因双启动子shRNA表达框的构建 a.第一轮PCR以包含Hl和U6启动子的质粒XM-2P为模板，设计PCR引物，在3’引入PCR模板质粒XM-2P的部分序列，用于扩增Hl和U6启动子序列，并在上下游引物中分别引入所述的STAT3和AFP基因的干涉靶序列的反向互补序列及loop序列；上游引物P1-FW:5’ -GGCCGGCGCGC CCAATGCAGGCAATCTGTTGC GGGAAAGAGTGATC-3’，下游引物P1_RV:5，-CGCGCGCGGGCC GTTCATGAATGTCTCCCTG GGTGITTCGTCCTTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：马效恩，郑燕，汪运山，石晓红，王婧男，胡瑞，孔毅，
申请(专利权)人：汪运山，
类型：发明
国别省市：