用于经由RNA干扰调控基因表达的组合物和方法技术

本公开提供了用于经由RNA介导的沉默调控基因表达的组合物和方法。本公开还提供了优化将dsRNA分子加工成小RNA双链体的组合物和方法。本公开还提供了改善dsRNA分子在产生期望的小RNA和促进目标基因的沉默方面的效率的组合物和方法。

Compositions and methods for regulating gene expression via RNA interference

The present disclosure provides compositions and methods for regulating gene expression through RNA mediated silencing. The present disclosure also provides compositions and methods for optimizing the processing of dsRNA molecules into small RNA duplexes. The present disclosure also provides compositions and methods for improving the efficiency of dsRNA molecules in generating desired small RNA and facilitating silencing of target genes.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于经由RNA干扰调控基因表达的组合物和方法序列表的并入本申请含有经由EFS网络以电子方式与本说明书一起提交的序列表的电子等效纸件副本以及经由EFS网络以电子方式与本说明书一起提交的序列表的计算机可读形式，并且含有名为“P34087US01_SEQ.txt”的文件，并且据此全文以引用方式并入。
本公开提供了用于经由RNA介导的沉默调控基因表达的组合物和方法。本公开还提供了优化将dsRNA分子定向加工成小RNA(sRNA)双链体的组合物和方法。
技术介绍
非转基因产生的外源核酸分子，例如双链RNA(dsRNA)分子，已经表现为在将植物内源性基因局部施加于植物叶片之后或通过用含有所述核酸分子的溶液浸泡种子来触发植物内源性基因的沉默。参见美国专利公开No.2011/0296556和2013/0318657(两者全文以引用方式并入)。因此，可以通过向植物或种子中引入特异性调控负责植物性状的基因的表达的dsRNA分子来修饰那些性状。RNA介导的序列特异性基因调控，也称为RNA干扰(RNAi)，以包含与目标基因的序列互补的RNA链的dsRNA开始。然后用RNA酶III相关酶(Dicer)将dsR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双链RNA(dsRNA)分子，其包含：a.第一链，其包含与靶核苷酸序列的至少18个连续核苷酸基本上相同的核苷酸序列；和b.第二链，其在5'至3'方向上包含5'‑悬垂，与所述第一链基本上互补的核苷酸序列，以及2个核苷酸的3'‑悬垂，其中所述5'‑悬垂为至少5个核苷酸长。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.23 US 62/015,9501.一种双链RNA(dsRNA)分子，其包含：a.第一链，其包含与靶核苷酸序列的至少18个连续核苷酸基本上相同的核苷酸序列；和b.第二链，其在5'至3'方向上包含5'-悬垂，与所述第一链基本上互补的核苷酸序列，以及2个核苷酸的3'-悬垂，其中所述5'-悬垂为至少5个核苷酸长。2.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述5'-悬垂具有高GC含量。3.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述5'-悬垂为5个核苷酸长。4.根据权利要求3所述的dsRNA分子，其中所述5个核苷酸的5'-悬垂具有序列GCGCG。5.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述2个核苷酸的3'-悬垂具有序列UA。6.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述第一链还包含位于与所述靶核苷酸序列的至少18个连续核苷酸基本上相同的所述核苷酸序列的3'的核苷酸GCCAC。7.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述靶核苷酸序列是mRNA的编码区、5'非翻译区、3'非翻译区、内含子、启动子、增强子、终止子、rRNA、tRNA、小核RNA(snRNA)、小核仁RNA(snoRNA)、参与RNA干扰的非编码RNA以及其任何组合。8.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述2个核苷酸的3'-悬垂包含改善所述dsRNA分子的稳定性的至少一种修饰。9.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述2个核苷酸的3'-悬垂包含选自由以下项组成的组中的至少一种修饰：甲基化、硫代磷酸酯添加、锁核酸(LNA)以及其任何组合。10.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述第一链还包含5'G。11.根据权利要求10所述的dsRNA分子，其中所述5'G与所述靶核苷酸序列不同。12.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述第一链还在所述5'至3'方向上包含：a.第一序列，其与第一靶核苷酸序列的至少18个连续核苷酸基本上相同；和b.第二序列，其与第二靶核苷酸序列的至少18个连续核苷酸基本上相同。13.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第一靶核苷酸序列和第二靶核苷酸序列来自不同的基因。14.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第一靶核苷酸序列和第二靶核苷酸序列来自相同的基因。15.根据权利要求14所述的dsRNA分子，其中所述第一靶核苷酸序列和第二靶核苷酸序列是不连续的。16.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第一链包含在所述第一和第二序列之间的一个或多个A。17.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第二序列包含5'G。18.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第二序列包含5'GUA。19.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第二序列包含5'GAA。20.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第二序列包含3'AA。21.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中所述第一链的3'端具有高GC含量。22.根据权利要求20所述的dsRNA分子，其中所述第一链的3'端与所述靶核苷酸序列不同。23.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第一序列和第二序列为21个核苷酸长。24.根据权利要求1所述的dsRNA分子，其中加工所述dsRNA分子以产生21个、22个、23个和/或24个核苷酸的siRNA。25.根据权利要求12所述的dsRNA分子，其中所述第一链还包含与第三靶核苷酸序列的至少18个连续核苷酸基本上相同的第三序列。26.根据权利要求25所述的dsRNA分子，其中第一链还包含与第四靶核苷酸序列的至少18个连续核苷酸基本上相同的第四序列。27.一种双链RNA(dsRNA)分子，其包含：a.第一链，其在5'至3'方向上包含：i.第一核苷酸序列，其与第一靶-核苷酸序列的至少18个连续核苷酸相同；ii.第二核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·伊恩多利诺，J·P·桑切斯，
申请(专利权)人：孟山都技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US