一种用于抑制簇集蛋白基因表达的成套siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于抑制簇集蛋白基因表达的成套siRNA及其应用。本发明专利技术提供的siRNA，由正义链和与其反向互补的反义链组成；所述正义链由19‑27个核苷酸组成，且所述正义链从5’末端起5‑9个连续核苷酸和从3’末端起5‑9个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰。本发明专利技术的实验证明，上述siRNA分子混合物提高了寡核酸抑制基因表达的概率；整体上提升了抑制效率；同时降低了脱靶效应；且其在应用过程中，省去了前期对单一RNAi分子的复杂设计、筛选、验证与优化的过程，操作简单、节省成本，是一种通用、有效、快速的RNAi工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种用于抑制簇集蛋白基因表达的成套siRNA及其应用。
技术介绍
RNAi广泛存在于自然界的物种中，自AndrewFire和CraigMello等人1998年在线虫(Caenorhabditiselegans)中首次发现RNAi现象，Tuschl和PhilSharp等人2001年证实在哺乳动物中也存在RNAi之后，关于RNAi的机制原理、基因功能和临床应用等研究取得了一系列的进展；RNAi不仅在防御病毒感染，防转座子跳跃等多种机体保护机制中发挥关键作用(Huntvagneretal,2001；Tuschl,2001；Waterhouseetal,2001；Zamore2001)，其相关产品也是十分有前景的候选药物。簇集蛋白(Clusterin，CLU)是异二聚体硫酸糖蛋白(sulfatealglycoprotein，SGP-2)，最早于1983年在睾丸液中分离出来，其后发现CLU广泛存在于人类及动物的许多组织中，如：睾丸、附睾、肾脏、心脏、肺脏、子宫、卵巢、乳腺及前列腺，也几乎存在于包括血浆、乳汁、尿液、脑脊液和精液等所有体液中。其中，其在睾丸、附睾、肝、肾等脏器表达较高。簇集蛋白是一种多功能蛋白，参与多种生理生化过程，如介导细胞聚集、参与脂质交换和运输、稳定细胞膜、促进生殖功能等；最近发现，其在细胞周期调节、细胞凋亡、DNA损伤，细胞黏附，组织重塑中也起到重要作用。由于选择性剪接的结果，Clusterin有两种主要的亚型：分泌型Clusterin(sCLU)和核型Clusterin(nCLU)。sCLU是Clusterin的主要形式，其具有细胞保护作用，是一种相对分子量为76-80ku的糖基化蛋白。研究发现簇集蛋白的分泌型蛋白质(sCLU))在EMT(上皮至间充质转变)期间受到刺激，并且本身可以促进EMT过程(Lenferink,A.E.,C.Canti等人(2009).“TranscriptomeProfilingofaTGF-beta-inducedepithelial-to-mesenchymaltransitionrevealsextracellularclusterinasatargetfortherapeuticantibodies.”Oncogene29:831)，而EMT会导致肿瘤侵袭和化疗抗性。用能与sCLU中特定区域相互作用的寡核酸阻断EMT，可导致肿瘤生长抑制和针对细胞毒药物的反应增加。Clusterin在肿瘤的发生和发展中可能起着重要的作用(Oncogene.，2004，23，2298-304)，对其抑制剂的开发有利于对Clusterin相关疾病(如肿瘤)的机制研究与药物研制。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种抑制或降低靶基因CLU表达的siRNA。本专利技术提供的siRNA，由正义链和与其完全反向互补的反义链组成；所述正义链由19-27个核苷酸组成，且所述正义链从5’末端起5-9个连续核苷酸和从3’末端起5-9个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰；所述反义链与所述靶基因CLU上的区段反向互补。抑制率至少为65％，70％，75％，80％，85％，90％。siRNA通过其反义链与靶基因CLU上的靶序列反向互补结合；上述siRNA中，所述正义链由24、25或26个核苷酸组成；或，所述正义链从5’末端起6或7或8个连续核苷酸和从3’末端起6或7或8个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰。上述siRNA中，所述2＇－核糖核糖修饰为2＇-O-甲基修饰、2＇-O－氟代修饰、2＇-脱氧修饰或2＇-MOE修饰。所述siRNA为如下任一种：1)所示的siRNA由序列1所示的正义链和序列2所示的反义链组成，且序列1自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；2)所示的siRNA由序列3所示的正义链和序列4所示的反义链组成，且序列3自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；3)所示的siRNA由序列5所示的正义链和序列6所示的反义链组成，且序列5自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；4)所示的siRNA由序列7所示的正义链和序列8所示的反义链组成，且序列7自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；5)所示的siRNA由序列9所示的正义链和序列10所示的反义链组成，且序列9自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；6)所示的siRNA由序列11所示的正义链和序列12所示的反义链组成，且序列11自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；7)所示的siRNA由序列13所示的正义链和序列14所示的反义链组成，且序列13自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；8)所示的siRNA由序列15所示的正义链和序列16所示的反义链组成，且序列15自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；9)所示的siRNA由序列17所示的正义链和序列18所示的反义链组成，且序列17自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；10)所示的siRNA由序列19所示的正义链和序列20所示的反义链组成，且序列19自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰。本专利技术另一个目的是提供一种抑制或降低靶基因CLU表达的成套siRNA。抑制率至少为70％、75％、80％、85％、90％。本专利技术提供的成套siRNA，包括至少5个上述的siRNA。上述成套siRNA中，所述成套siRNA中任2个siRNA的物质的量比为1:1-1:5；或，所述成套siRNA中各siRNA为等物质的量比混合。上述成套siRNA中，所述成套siRNA由上述的siRNA中的1)所示的siRNA-7)所示的siRNA共7个siRNA组成；或，所述成套siRNA由上述的siRNA中的2)所示的siRNA-7)所示的siRNA共6个siRNA组成；或，所述成套siRNA由上述的siRNA中的1)所示的siRNA、2)所示的siRNA、4)所示的siRNA、5)所示的siRNA和7)所示的siRNA共5个siRNA组成；或，所述成套siRNA由上述的siRNA中的1)所示的siRNA-10)所示的siRNA共10个siRNA组成。本专利技术第三个目的是提供如下1)或2)的物质。本专利技术提供的如下1)或2)的物质：1)抑制或降低靶基因CLU表达的试剂，其为如下A或B：A包括上述的siRNA和转染试剂；B包括上述的成套siRNA和转染试剂；2)抑制或降低靶基因表达的试剂盒，其包括上述的siRNA或上述的成套siRNA或所述试剂。上述物质中，所述成套siRNA中所有siRNA分子在所述试剂中的总浓度为2-100nM。上述的siRNA或上述的成套siRNA或上述的物质在抑制或降低靶基因CLU表达中的应用也是本专利技术保护的范围；或上述的siRNA或上述的成套siRNA或上述的物质在抑制或降低本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制或降低靶基因CLU表达的siRNA，由正义链和与其反向互补的反义链组成；所述正义链由19‑27个核苷酸组成，且所述正义链从5’末端起5‑9个连续核苷酸和从3’末端起5‑9个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰；所述反义链与所述靶基因CLU上的区段反向互补。

【技术特征摘要】
1.一种抑制或降低靶基因CLU表达的siRNA，由正义链和与其反向互补的反义链组成；所述正义链由19-27个核苷酸组成，且所述正义链从5’末端起5-9个连续核苷酸和从3’末端起5-9个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰；所述反义链与所述靶基因CLU上的区段反向互补。2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：所述正义链由24、25或26个核苷酸组成；或，所述正义链从5’末端起6或7或8个连续核苷酸和从3’末端起6或7或8个连续核苷酸均进行2＇－核糖修饰。3.根据权利要求2所述的siRNA，其特征在于：所述2＇－核糖核糖修饰为2＇-O-甲基修饰、2＇-O－氟代修饰、2＇-脱氧修饰或2＇-MOE修饰。4.根据权利要求1-3中任一所述的siRNA，其特征在于：所述siRNA为如下任一种：1)所示的siRNA由序列1所示的正义链和序列2所示的反义链组成，且序列1自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；2)所示的siRNA由序列3所示的正义链和序列4所示的反义链组成，且序列3自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；3)所示的siRNA由序列5所示的正义链和序列6所示的反义链组成，且序列5自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；4)所示的siRNA由序列7所示的正义链和序列8所示的反义链组成，且序列7自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；5)所示的siRNA由序列9所示的正义链和序列10所示的反义链组成，且序列9自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；6)所示的siRNA由序列11所示的正义链和序列12所示的反义链组成，且序列11自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；7)所示的siRNA由序列13所示的正义链和序列14所示的反义链组成，且序列13自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；8)所示的siRNA由序列15所示的正义链和序列16所示的反义链组成，且序列15自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；9)所示的siRNA由序列17所示的正义链和序列18所示的反义链组成，且序列17自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰；10)所示的siRNA由序列19所示的正义链和序列20所示的反义链组成，且序列19自5’末端起7个连续核苷酸和从3’末端起7个连续核苷酸均进行2＇-O-Me修饰。5.一种抑制或降低靶基因CLU表达的成套siRNA，包括至少5个权利要求1-4中任一所述的siRNA。6.根据权利要求5所述的成套siRNA，其特征在于：所述成套siRNA中任2个siRNA的物质的量比为1:1-1:5；或，所述成套siRNA中各siRNA为等物质的量混合。7.根据权利要求5或6所述的成套siRNA，其特征在于：所述成套siRNA由权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张必良，杨秀群，丹米其·萨玛斯基，克雷格·梅洛，叶奕栋，
申请(专利权)人：广州市锐博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44