抑制流感病毒相关基因的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了针对小窝蛋白2、表面活性蛋白D的siRNA及重组载体；含有转录因子A、对氧磷酸酶3转录盒重组载体的构建方法和相应的细胞模型和筛选药物的方法。本发明专利技术优点在于，所提供的siRNA使经其转染后的哺乳动物细胞的mRNA或蛋白表达下降60％以上；该siRNA和重组载体可用于基因治疗流感或针对流感病毒进行核酸免疫；本发明专利技术提供的细胞模型，可用于病毒研究，特别是猪流感病毒致病机理研究，也可用于建立筛选抗病毒药物模型，特别是抗流感药物细胞模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，特别涉及抑制小窝蛋白2和表面活性蛋白D基因表达的siRNA、siRNA的核苷酸序列、可编码该siRNA的重组载体以及可编码转录因子A和对氧磷酸酶3的重组载体，以及它们各自的基因在制备和筛选抗流感药物方面的用途。
技术介绍
病毒入侵宿主过程伴随着宿主基因表达变化，最终决定感染细胞和病毒各自的命运。病毒感染宿主后需要利用宿主细胞的代谢过程完成病毒自身的复制，在这一过程病毒必然会调控宿主细胞内基因组的表达，抑制抗病毒基因表达，增强对病毒复制有益的基因表达。因此，病毒感染宿主细胞后，宿主细胞内表达变化的这些基因往往和病毒复制有密切的关系。通过生物学手段调控宿主细胞内这些基因中一个或同时调控多个基因表达可能具有抑制流感病毒复制的作用，具有潜在预防和治疗流感病毒感染的应用价值。流感病毒为正粘病毒科流感病毒属分节段单股负链RNA病毒。病毒粒子刚分尚时呈多晶形，在体内传代后变成球形，直径80-120nm(PaleSe，et al.，2007)。病毒粒子由0.8-1 %的RNA、70-75%的蛋白质、20%的脂类和5_8%的糖类组成，此处比例均为质量比。流感病毒分为A、B本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种针对小窝蛋白2基因的siRNA，其特征在于，所述的siRNA对应的靶序列是小窝蛋白2基因的mRNA，所述的siRNA的长度为16?30bp，且可使经其转染后的哺乳动物细胞的mRNA或蛋白表达下降60％以上。

【技术特征摘要】
1.一种针对小窝蛋白2基因的siRNA，其特征在于，所述的SiRNA对应的靶序列是小窝蛋白2基因的mRNA，所述的siRNA的长度为16_30bp，且可使经其转染后的哺乳动物细胞的mRNA或蛋白表达下降60%以上。2.如权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述的siRNA含有SEQID NO:1所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述的siRNA如序列表中SEQID ΝΟ:1表/Jn ο4.一种针对表面活性蛋白D基因的siRNA，其特征在于，所述的siRNA对应的靶序列是表面活性蛋白D基因的mRNA，所述的siRNA的长度为16_30bp，且可使经其转染后的哺乳动物细胞的mRNA或蛋白表达量下降60%以上。5.如权利要求4所述的siRNA，其特征在于，所述的siRNA含有选自SEQID NO:2所示的核苷酸序列。6.如权利要求4所述的siRNA，其特征在于，所述的siRNA序列如序列表中SEQIDNO:2表示。7.如权利要求2或5所述的siRNA，其特征在于，所述的siRNA序列3’端还含有2个T或含有2个U的延伸结构。8.如权利要求1-7任一项所述的siRNA在制备或筛选抗流感药物中的用途，或者在抑制流感病毒复制中的用途。9.一种含有转录因子A的基因开放阅读框的重组载体，其特征在于，由包括以下步骤的方法制备， (1)在Genbank中登录号为ΝΜ_001130211.1的转录因子A基因序列中，选取序列中从起始密码子“ATG”到终止密码子“TGA”、“TAG”或“TAA”之间最长的序列741bp碱基； (2)分别在5'和3'端设计扩增全长PCR引物，上游引物5'端添加HindIII酶切位点，CGG作为保...

【专利技术属性】
技术研发人员：马志永，史子学，魏建超，邵东华，王少辉，李蓓蓓，晏文君，朱紫祥，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所，
类型：发明
国别省市：