一种检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的试剂盒，包括盒体，以及设在盒体内的应用试剂；所述应用试剂分别为：体积百分比为２０％盐酸，质量体积百分比为０．０２％１，２－萘醌－４－磺酸钠的水溶液，质量体积百分比为１％十六烷基三甲级溴化铵的水溶液，质量体积百分比为８％碳酸钠的水溶液，体积百分比为１０％三氯乙酸水溶液。本发明专利技术还公开了所述试剂盒在评价肝脏功能中的应用。本发明专利技术的试剂盒具有检测速度快，操作简便，成本低的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种试剂盒及其应用，尤其涉及一种检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的试剂盒及其在肝脏功能检测及评价中的应用。属医学检测

技术介绍
在我国，慢性肝病是常见病和多发病，仅乙型肝炎病毒携带者就高达一亿多人，占我国总人口的10％以上。每年有100万新生儿由于母婴垂直传播，可能会感染乙肝病毒。另外，代谢异常、药物、酗酒以及自身免疫性疾病也是引起肝损坏的常见原因。由于慢性肝损坏主要发生在青壮年，一旦转变成肝硬化，除诱发肝癌外，其自身也是一种不可逆转的病理过程，给社会和家庭在经济和精神上造成极大的负担和痛苦。因此，在肝功能检测中，做到肝病早诊断、早预防、早治疗很有必要。目前，临床上将谷丙转氨酶(SGPT)、谷草转氨酶(SGOT)、碱性磷酸酶-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、乳酸脱氢酶等测定统称为肝功能检查，这是不正确的。正如Limd JR等人(Postgrad Med 2003；79307～312)指出的那样，这些检查是肝细胞受到损害的指标，并不能反映肝脏的功能。肝脏功能是指肝脏的解毒功能、肝脏的生物转化功能、肝脏的排泄功能、肝脏的三大物质代谢功能和肝脏在胚胎期的造血功能。而目前与这些功能相关的常规检查主要有三个指标，即血浆白蛋白含量测定、血清胆红素含量测定和凝血酶原时间测定。但在临床工作中，经常遇到这样一些病人，早期只是乙肝病毒携带者，与肝脏相关的各项检查都正常，以后却发展成肝硬化或肝癌。有些脂肪肝、长期饮酒后慢性肝病的病人，肝脏的组织结构已明显破坏，但现有肝功能实验指标却都正常。一旦接受肝脏手术或介入治疗，常出现严重肝功能衰弱，甚至死亡。这说明现有的检测指标灵敏度低，特异性差，不能满足临床的需要。因而，正确评价肝脏功能是肝脏疾病早期诊断、早期预防和早期治疗的关键。正确评价肝脏功能是国内外临床和基础工作者长期关注的一个重点。近年来这一领域的研究取得重大进展，发现非那西丁肝外代谢极少，且不被经典肝药酶诱导剂苯巴比妥钠所诱导。说明非那西丁氧位去乙基酶是评价肝脏功能的理想靶点。非那西丁是肝脏乙氨醚氧位去乙基酶的特异性底物，该酶在肝脏呈组成型表达。口服或静脉注射后，在非那西丁氧位去乙基酶催化下，非那西丁被代谢成醋氨酚。测定血液中非那西丁与醋氨酚比值，能够准确反映肝脏的生物转化功能。非那西丁副作用少，不良反应小，人体最小中毒剂量大于5克，是临床实验的理想探针药物。血清中非那西丁和醋氨酚的含量现在多采用精密仪器分析法(HPLC)测定，该方法虽然准确，精密度高，但成本高，速度慢，实用性差，不易推广。因此，迫切需要能有一种既简便又准确、实用的检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的方法及试剂盒。
技术实现思路
针对现有技术中存在的不足，本专利技术要解决的问题是提供一种检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的试剂盒及其在肝脏功能检测及评价中的应用。本专利技术的试剂盒可以准确测定血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值，简便快捷，易操作，成本低，适合于各级医院的使用。本专利技术所述的检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的试剂盒，包括盒体，设在盒体内的应用试剂；其特征是所述应用试剂分别为体积百分比为20％盐酸，质量体积百分比为0.02％1，2-萘醌-4-磺酸钠的水溶液，质量体积百分比为1％十六烷基三甲级溴化铵的水溶液，质量体积百分比为8％碳酸钠的水溶液，体积百分比为10％三氯乙酸水溶液。上述的试剂盒在评价肝脏功能中的应用。上述试剂盒的使用方法如下(1)患者口服1克非那西丁，2小时后抽血，分离血清备用。(2)取血清1ml，加入10％三氯乙酸1.5ml，进行去蛋白操作，在3000转/分条件下离心15min，分离出上清液。(3)取25ml容量瓶加入上述1ml上清液，0.25ml 20％盐酸，水浴回流45min。(4)冷却至室温后，加入7.5ml 8％碳酸钠，充分振荡，然后依次加入6ml 0.02％1，2-萘醌-4-磺酸钠，1ml 1％十六烷基三甲级溴化铵。(5)根据双波长分光光度法的原理，在491nm和539nm波长测定吸光度，根据公式ΔA1＝0.000205C(ΔA1为显色反应曲线中491nm和539nm的吸光度差值，C的单位为ug/ml)测定非那西丁的含量，测定扑热息痛的含量方程为ΔA2＝0.000243C(ΔA2为显色反应曲线中470nm和516nm的吸光度值差，C的单位为ug/ml)。(6)根据非那西丁和醋氨酚的浓度比作为评价肝脏功能的指标，其中健康人群中二者的比值小于或等于1，肝功能异常者的比值大于1。本专利技术提供的试剂盒优点是(1)检测速度快。除去样品前期处理时间，使用液相色谱测量单一成分的在机运行时间大于20分钟，在本实验测量两种成分在机运行时间大于40分钟，一天按8小时工作时间算，每天检测样品小于12例，而使用本试剂盒在机运行时间小于2分钟，可以满足临床大量检测样品的需要。(2)操作简便，成本低。液相色谱法需要液相色谱仪，仪器昂贵，对操作人员要求高，而本试剂盒所用试剂为普通化学试剂，所用仪器也是各级医疗机构都有的普通的分光光度计，使用成本低，便于推广应用。具体实施例方式实施例1单人份试剂盒制备10cm×15cm×10cm盒体，在盒体内设置五个成装应用试剂的槽孔，分别成装一号塑料瓶(容积5ml)，含10％三氯乙酸2ml；二号玻璃瓶(容积2ml)，含20％盐酸1ml；三号瓶塑料瓶(容积10ml)，含8％碳酸钠8ml；四号棕色玻璃瓶(容积10ml)，含0.02％1，2-萘醌-4-磺酸钠7ml；五号塑料瓶(容积5ml)，含1％十六烷基三甲级溴化铵2ml；即制成检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的单人份试剂盒。实施例2依据实施例1所述应用试剂的量及其试剂瓶容积量，可放大制备成检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的10人份试剂盒，检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的百人份试剂盒，检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的300人份试剂盒，检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的500人份试剂盒。实施例3应用实施例1所述检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的单人份试剂盒进行肝硬化病人的肝脏功能检测(1)患者口服1克非那西丁，2小时后抽血，分离血清备用。(2)取血清1ml，加入10％三氯乙酸1.5ml，进行去蛋白操作，在3000转/分条件下离心15min，分离出上清液。(3)取25ml容量瓶加入上述1ml上清液，0.25ml 20％盐酸，水浴回流45min。(4)冷却至室温后，加入7.5ml 8％碳酸钠，充分振荡，然后依次加入6ml 0.02％1，2-萘醌-4-磺酸钠，1ml 1％十六烷基三甲级溴化铵。(5)根据双波长分光光度法的原理，在491nm和539nm波长测定吸光度，根据公式ΔA1＝0.000205C(ΔA1为显色反应曲线中491nm和539nm的吸光度差值，C的单位为ug/ml)测定非那西丁的含量，测定扑热息痛的含量方程为ΔA2＝0.000243C(ΔA2为显色反应曲线中470nm和516nm的吸光度值差，C的单位为ug/ml)。(6)根据非那西丁和醋氨酚的浓度比作为评价肝脏功能的指标，肝功能异常者的比值大于1。检测得所述肝硬化病人非那西丁和醋氨酚的浓度比是4.6，可诊断为肝功能异常。实施例4同样方法，应用实施例1的试剂盒评价了20例正常人和12例肝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测血液中非那西丁与醋氨酚浓度比值的试剂盒，包括盒体，设在盒体内的应用试剂；其特征是：所述应用试剂分别为：体积百分比为２０％盐酸，质量体积百分比为０．０２％１，２－萘醌－４－磺酸钠的水溶液，质量体积百分比为１％十六烷基三甲级溴化铵的水溶液，质量体积百分比为８％碳酸钠的水溶液，体积百分比为１０％三氯乙酸水溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汪运山，盖中涛，王庆西，高胜春，刘涛，李栋，曹丽君，
申请(专利权)人：汪运山，曹丽君，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]