一种快速多点定标定量检测血液多种分析物的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速多点定标定量检测血液多种分析物的方法。所述方法包括以下步骤：(1)提供一待测样品和一测试片；(2)将所述待测样品滴加于所述测试片的样品垫上，使得所述待测样品向所述吸收垫方向流动，并流经所述的结合区、第一质控区、检测区和第二质控区；(3)分别读取第一质控区中的第一质控线的光学强度A1和第二质控区中所述第二质控线的光学强度A2；以及读取所述检测区中各检测线的光学强度Pi；以及(4)将所述光学强度Pi与所述光学强度A1和A2进行比较，从而分别得出n种分析物中各种分析物的存在与否和/或定量检测结果。

Method for quantitative detection of multiple analytes in blood by rapid multipoint calibration

The invention provides a method for quantitative detection of a variety of blood analytes by rapid multipoint calibration. The method comprises the following steps: (1) provide a sample and a test piece; (2) the sample droplet on the test piece of the sample pad, so the sample to be measured to the absorption pad flow direction, and through the combination of the first, quality control the detection area and the second area, control area; (3) the optical intensity A2 of the second control lines are read first control line in the area of the first control optical intensity A1 and second in the control region; optical intensity of Pi each test line and read the detection zone; and (4) the optical the strength of Pi and the optical intensity of A1 and A2 were compared, which were obtained in n Analysis of various analytes existence and / or quantitative detection results.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测领域。具体地，本专利技术涉及一种非诊断性地多点定标定量检测血液多种分析物的方法。
技术介绍
免疫金标记技术是特异、快速、简便、准确率高的体外诊断方法，其广泛应用于医疗诊断领域，如国内厂家艾博的血筛项目、万孚的毒品、热带病项目、康华的优生优育不孕不育产品，艾德蓝十字大卫的早孕排卵项目、南京基蛋的心肌类项目、奥普的结核项目。但是各个厂家在精确定量的应用上却面临背景干扰大、检测指标少的缺陷。试纸的反射测光方法常应用于尿、血液样本的测定当中。目前这种试纸及测定仪器和日常的尿试纸等广泛使用于居民健康诊断及医院的筛查当中。应用上，一种吸收垫含有一种检查项目，例如糖、蛋白、胆红素、血红蛋白、尿胆素等常见项目。这种试纸的读取方式是通过固定仪器的光学测定部分依次移动试纸上的反应部分，利用反射测光来测取浓度。另外,一种做法则是固定试纸位置，通过移动光学测定部分来测取浓度。但是，目前技术只可以检测一种分析物，并且使用一点定标技术，实验结果误差较大，测定结果的可信度较低。因此，本领域迫切需要开发一种快速高效、多点定标定量地精确检测血液多种分析物的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种非诊断性地多点定标定量检测血液多种分析物的方法及装置。在本专利技术的第一方面，提供了一种非诊断性地用于检测样品中的多种分析物的方法，所述分析物为n种，n为≥2的正整数，所述方法包括以下步骤：(1)提供一待测样品和一测试片，其中所述测试片包括：样品垫、结合区、第一质控区、检测区、第二质控区、和吸收垫；其中，所述结合区包含用于检测所述多种分析物的检测抗体，所述检测抗体包括n种特异性抗体，每种特异性抗体分别针对所述多种分析物中每种分析物，并且所述的检测抗体标记有可检测的标记物；并且所述的检测区含有m条检测线，其中m为正整数且m≥n，各检测线分别用于捕获一种所述分析物与其特异性抗体结合所形成的复合物；所述的第一质控区含有至少一条第一质控线，所述第一质控线用于捕获所述第一质控物与其特异性抗体结合所形成的复合物；所述的第二质控区含有至少一条第二质控线，所述第二质控线用于捕获所述第二质控物与其特异性抗体结合所形成的复合物；(2)将所述待测样品滴加于所述测试片的样品垫上，使得所述待测样品向所述吸收垫方向流动，并流经所述的结合区、第一质控区、检测区和第二质控区；(3)分别读取第一质控区中的第一质控线的光学强度A1和第二质控区中所述第二质控线的光学强度A2；以及读取所述检测区中各检测线的光学强度Pi，其中i＝1到n；以及(4)将所述光学强度Pi与所述光学强度A1和A2进行比较，从而分别得出n种分析物中各种分析物的存在与否和/或定量检测结果。在另一优选例中，所述的光学强度包括：颜色信号强度。在另一优选例中，所述光学强度与所述检测线上形成的复合物浓度为二次函数关系。在另一优选例中，在所述步骤(4)中，按下式计算质控物的浓度：C1＝(A1-b)/aC2＝(A2-b)/a式中，a与b分别为一常数。在另一优选例中，a和b分别为“浓度－信号强度”标准曲线(拟合的直线)的斜率和截距。在另一优选例中，在所述步骤(4)中，按下式计算各分析物的浓度：Ci＝(C1+C2)(Pi-Pblank)/(A1+A2-2Pblank)，式中，Ci为第i个检测区检测物浓度，C1与C2为质控物浓度，Pi为检测区第i个检测区的信号强度，Pblank为光学背景的信号强度，A1与A2为质控区的信号强度。在另一优选例中，所述的信号强度包括光学强度。在另一优选例中，所述的第一质控物和第二质控物是相同的，或不同的。在另一优选例中，所述的第一质控物和第二质控物选自下组：抗兔多克隆抗体、抗羊多克隆抗体、抗驴多克隆抗体、或其组合。在另一优选例中，所述的可检测标记物包括金纳米颗粒。在另一优选例中，所述样品垫区域为测试片近端，所述吸收区为测试片远端，所述第一质控线位于近端，所述第二质控线位于远端，所述第一质控线与所述第一检测线的距离为1-10mm，较佳地为2-8mm，更佳地为3-6mm，所述第二质控线与所述第m条检测线之间的距离为1-10mm，较佳地为2-8mm，更佳地为3-6mm。在另一优选例中，所述m条检测线之间的距离为0.5-10mm，较佳地为1-8mm，更佳地为2-6mm。在另一优选例中，所述检测抗体数目为≥1的整数。在另一优选例中，所述质控线数目为≥1的整数，优选地为1-3。在另一优选例中，所述检测线数目为≥4的整数。在另一优选例中，所述分析物的数量为1-10，优选地为2-6。在另一优选例中，所述分析物选自下组：血降钙素原、C反应蛋白、肌钙蛋白、肌球素、肌红蛋白、肌酸激酶MB同工酶、B型尿钠肽、D-二聚体、N-端脑利钠肽前体、心型脂肪酸结合蛋白、微量白蛋白、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、β2-微球蛋白、淀粉样蛋白、胱抑素C。在本专利技术第二方面，提供一种检测试剂盒，所述试剂盒包括：(a)测试片，所述测试片包括样品垫、结合区、第一质控区、检测区、第二质控区、和吸收垫；(b)第一容器，以及位于所述第一容器中的、用于与待测样品进行混合的第一测试试剂。本专利技术第三方面，提供一种如本专利技术第一方面所述的测试片的用途，用于制备检测生物样本中分析物浓度的制剂盒。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了本专利技术检测试纸外壳。图2显示了本专利技术检测试纸，其上包被有各种单克隆抗体，从左至右依次为：1为样品垫，2为结合垫，3为层析反应膜，4为吸收垫，5为包被抗体，6为底部背衬。图3显示了同时测定心肌梗塞标志物肌钙蛋白T和肌球素的试纸条，其中7为样品垫，8为结合垫，9为层析反应膜，10为吸收垫，11为底部背衬，12为抗兔包被抗体，13为心肌梗塞标志物肌钙蛋白T包被抗体，14为肌球素包被抗体，15为抗兔包被抗体。图4显示了定标线检测原理。图5显示了测试线检测原理。图6显示了本专利技术的光学测试原理，其中，1为凸透镜，2为试剂条放置部位，3为CCD摄像机，5为LED光源。具体实施方式本专利技术人通过广泛而深入的研究，获得一种快速高效、多点定标定量检测血液多种分析物的方法，其中引入多条定标曲线并结合新型的数据处理方法，从而能够更准确地同时检测多个指标。本专利技术的多指标检测方案，不仅提高临床应用的范围，提供准确的检测结果，而且可以减少测定的时间或次数，降低患者的诊断成本。在此基础上完成了本专利技术。术语说明除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非诊断性地用于检测样品中的多种分析物的方法，所述分析物为n种，n为≥2的正整数，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)提供一待测样品和一测试片，其中所述测试片包括：样品垫、结合区、第一质控区、检测区、第二质控区、和吸收垫；其中，所述结合区包含用于检测所述多种分析物的检测抗体，所述检测抗体包括n种特异性抗体，每种特异性抗体分别针对所述多种分析物中每种分析物，并且所述的检测抗体标记有可检测的标记物；并且所述的检测区含有m条检测线，其中m为正整数且m≥n，各检测线分别用于捕获一种所述分析物与其特异性抗体结合所形成的复合物；所述的第一质控区含有至少一条第一质控线，所述第一质控线用于捕获所述第一质控物与其特异性抗体结合所形成的复合物；所述的第二质控区含有至少一条第二质控线，所述第二质控线用于捕获所述第二质控物与其特异性抗体结合所形成的复合物；(2)将所述待测样品滴加于所述测试片的样品垫上，使得所述待测样品向所述吸收垫方向流动，并流经所述的结合区、第一质控区、检测区和第二质控区；(3)分别读取第一质控区中的第一质控线的光学强度A1和第二质控区中所述第二质控线的光学强度A2；以及读取所述检测区中各检测线的光学强度Pi，其中i＝1到n；以及(4)将所述光学强度Pi与所述光学强度A1和A2进行比较，从而分别得出n种分析物中各种分析物的存在与否和/或定量检测结果。...

【技术特征摘要】
1.一种非诊断性地用于检测样品中的多种分析物的方法，所述分析物为n
种，n为≥2的正整数，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)提供一待测样品和一测试片，其中所述测试片包括：样品垫、结合区、
第一质控区、检测区、第二质控区、和吸收垫；
其中，所述结合区包含用于检测所述多种分析物的检测抗体，所述检测抗
体包括n种特异性抗体，每种特异性抗体分别针对所述多种分析物中每种分析
物，并且所述的检测抗体标记有可检测的标记物；
并且所述的检测区含有m条检测线，其中m为正整数且m≥n，各检测线分
别用于捕获一种所述分析物与其特异性抗体结合所形成的复合物；
所述的第一质控区含有至少一条第一质控线，所述第一质控线用于捕获所
述第一质控物与其特异性抗体结合所形成的复合物；
所述的第二质控区含有至少一条第二质控线，所述第二质控线用于捕获所
述第二质控物与其特异性抗体结合所形成的复合物；
(2)将所述待测样品滴加于所述测试片的样品垫上，使得所述待测样品向
所述吸收垫方向流动，并流经所述的结合区、第一质控区、检测区和第二质控
区；
(3)分别读取第一质控区中的第一质控线的光学强度A1和第二质控区中
所述第二质控线的光学强度A2；以及读取所述检测区中各检测线的光学强度
Pi，其中i＝1到n；以及
(4)将所述光学强度Pi与所述光学强度A1和A2进行比较，从而分别得
出n种分析物中各种分析物的存在与否和/或定量检测结果。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，按下式计
算质控物的浓度：
C1＝(A1-b)/a
C2＝(A2-b)/a

【专利技术属性】
技术研发人员：李欢，顾晓慧，葛志兵，
申请(专利权)人：上海艾瑞德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31