本发明专利技术涉及一种PGI快速定量检测试剂盒及其制作、检测方法。该检测试剂盒包括设置在试剂盒内的检测卡和样品缓冲液，所述检测卡内的试纸条包括依次搭接的样本垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述的结合物垫上喷涂有PGI单克隆抗体偶联的量子点，所述的硝酸纤维素膜上包被有另一株PGI单克隆抗体作为检测线，硝酸纤维素膜上还包被有羊抗鼠抗体或其他抗鼠抗体作为质控线。本发明专利技术将量子点和免疫层析技术相结合，具有检测时间短，效率高的特点，能够很好的检测出PGI的存量。本发明专利技术利用量子点免疫层析法，非创伤、低风险、安全、廉价、精确和快速的定量检测血清、血浆和全血中的PGI含量，可以为胃病的检查和病情监测提供辅助作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种PGI快速定量检测试剂盒及其制作、检测方法。
技术介绍
胃蛋白酶原(Pepsinogen，PG)是胃蛋白酶的前体，包括胃蛋白酶原I(PGI)和胃蛋白酶原Π (PGI)两类。PGI主要由胃体的主细胞和黏液细胞分泌，绝大部分分泌至胃腔体，少量可通过一些途径进入血液。PGI主要由胃窦部的幽门腺和十二指肠近段的Bruner腺粘膜的主细胞和颈细胞分泌产生，少量可通过一些途径进入血液。当胃部环境发生变化如胃黏膜发生病理变化，PG1、PGI的分泌量会受到影响，进而影响血液中PG1、PGI的含量，反过来说，血液中PG1、PGI的含量能够反映胃黏膜的分泌功能。大量研究表明胃部病变发展过程中:由幽门螺杆菌(Hp)感染，发展为慢性胃炎，再到萎缩性胃炎，最终发展到胃癌，均伴随着PG1、PGI的变化，随着胃病发展，血清中PGI的含量先升高后降低;PGI的含量升高之后维持在一个较高水平，因此PG1、PGI的含量，与PGI/PGI的比值的异常，能够提示不同程度的胃部疾病。简而言之，PG1、PGI的指标与胃炎、Hp感染、胃溃疡、胃出血、胃癌等有关，它们作为胃病的体外检测已越来越受到关注。我国是胃癌高发国家之一，一些胃癌高发区胃癌高发率为1%，各种胃病患病率达82%，胃癌是国家重点防治的四大肿瘤之一。对人群进行大规模的筛查，建立灵敏、便捷的PG1、PGI含量检测方法可利于胃病的辅助诊断和胃癌的早期辅助诊断。目前定量检测PG1、PGI的试剂盒有放免法(RIA)、酶联免疫分析法(EIA)、时间分辨荧光分析法(TRFIA)等。放免法有潜在放射性污染、需要特种仪器，专业的工作人员操作，不利于推广使用;酶联免疫分析法和时间分辨荧光法尽管使用比例相对较高，但操作耗时长，价格高，为液相的均相体系，试剂受限于保存条件和保质期，不利于基层医院的项目开展。免疫层析技术以多种膜材组合为固定相，作为液相的样品通过毛细流原理从加样一端泳流至标记物垫上，与固定在标记物垫上的抗原或抗体标记物(如胶体金、焚光稀土元素等)反应形成免疫复合物，该带有标记的免疫复合物继续通过涌流到达反应膜上固定的检测线，与检测线上的抗原或抗体发生免疫反应从而被截留富集显色，达到快速检测的目的。免疫层析技术最常见的标记物是胶体金，应用非常广泛，也非常成功。由于胶体金标记是通过静电吸附的原理，在流体中不稳定，标记的分子容易脱落，且只有胶体金颗粒富集到一定肉眼可见的量的时候才能判读，同时，胶体金免疫层析技术只可对被检物定性分析。目前，并无相关的量子点免疫层析技术来快速检测PGI。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种PGI快速定量检测试剂盒及其制作、检测方法，能够准确、快速、灵敏、定量的检测人血中PGI。本专利技术解决其技术问题，所采用的技术方案是提供一种PGI快速定量检测试剂盒及其制作、检测方法，具体的，包括一个检测试剂盒，所述检测试剂盒包括PGI检测卡，卡内装有PGI检测试纸条。检测卡可由荧光分析仪测出PGI浓度值。所述试纸条包括在粘性底板上依次搭接的样本垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸;所述的结合物垫上喷涂有PGI单克隆抗体偶联的量子点，所述的硝酸纤维素膜上包被有PGI单克隆抗体作为检测线，硝酸纤维素膜上还包被有羊抗鼠抗体作为质控线。检测卡是以双抗体夹心法模式检测PGI。所述量子点为包括18、118、11^、1￥4、￥4、￥^族中的两种以上元素组成的单个晶核结构，如 CdS、CdSe、CdTe、ZnSe、InP、InAs、HgCdTe 等，或是核壳结构，如 CdSe/ZnS、ZnCdS/ZnS、MnSe/ZnSe/ZnS、CuInZnS/ZnS等。量子点由以上元素构成外，还具有表面修饰基团，如-C00H、-NH2、-SH、-CH0等基团，可以通过一些化学试剂如戊二醛、碳二亚胺等偶联生物大分子，如蛋白质、核酸及其他有机分子。所述量子点的粒径范围为5?500nm，激发光波长范围为200?600nm，发射光波长为400?800nm。一种PGI快速定量检测试剂盒的制作方法，其特征在于:包括以下步骤:a.用量子点偶联PGI单克隆抗体得到量子点-PGI单克隆抗体复合物，并将其喷涂在结合物垫上；b.将另一株PGI单克隆抗体包被到硝酸纤维素膜上作为检测线，将羊抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上作为质控线，检测线和质控线间的距离为3?1mm;c.在粘性底板上依次搭接样本垫、喷涂有量子点-PGI单克隆抗体复合物的结合物垫、设置有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸，并裁切成所需宽度即为PGI检测试纸条；d.将制作好的PGI检测试纸条装入PGI快速定量检测卡内，再将PGI快速定量检测卡及样品缓冲液装入试剂盒内。所述PGI单克隆抗体偶联量子点的方法:将PGI单克隆抗体加入到已活化的量子点溶液中或是将已活化的量子点加入到PGI单克隆抗体溶液中偶联得到量子点-PGI单克隆抗体复合物;量子点的活化方法可以是一步法，也可以是两步法。一步法为先混合量子点与待偶联的PGI单克隆抗体，后加入一定量的活化剂EDC，进行一步活化偶联;两步法为先将活化剂EDC(可同时加入NHS或sulfo-NHS)加入到量子点溶液中活化，再将PGI单克隆抗体加入到活化后的量子点溶液中进行偶联，得到量子点-PGI单克隆抗体复合物。结合物垫上喷涂量子点-PGI单克隆抗体复合物的条件是:将量子点-PGI单克隆抗体复合物稀释到稀释5-50倍，用喷膜仪按2-100yl/Cm的量喷涂到结合物垫上，在环境湿度小于30%，温度在35-37°C的环境下烘烤l_5h，干燥后封存。本专利技术还提供了一种PGI的检测方法，包括以下步骤:I)先用试剂盒上的标定芯片标定荧光分析仪，保存标定数据；2)将血清、血浆样品或全血样品加入检测卡加样孔内；3)将PGI快速定量检测卡插入荧光分析仪的检测孔，放置5分钟，荧光分析仪即可读出PGI的浓度值。有益效果:将量子点和免疫层析技术相结合，相对于传统的酶联免疫分析法和时间分辨荧光分析法，该检测方法还具有检测时间短，效率高的特点，也可以很好的检测出PGI的存量。量子点检测技术尚未在疾病诊断领域获得广泛应用，在国际上属于前沿技术，国内则处于研究阶段。本专利技术利用量子点免疫层析法，非创伤、低风险、安全、廉价、精确和快速的定量检测血清、血浆和全血中的PGI含量，可以为胃癌的初筛和病情监测提供辅助作用。【具体实施方式】一种检测试剂盒，所述检测试剂盒包括PGI检测卡，卡内装有PGI检测试纸条。所述试纸条包括在粘性底板上依次搭接的样本垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。所述的结合物垫上喷涂有PGI单克隆抗体偶联的量子点，所述的硝酸纤维素膜上包被有PGI单克隆抗体作为检测线，硝酸纤维素膜上还包被有羊抗鼠抗体作为质控线。检测卡是以双抗体夹心法模式检测PGI。所述量子点为包括18、118、11^、1￥4、￥4、￥^族中的两种以上元素组成的单个晶核结构，如 CdS、CdSe、CdTe、ZnSe、InP、InAs、HgCdTe 等，或是核壳结构，如 CdSe/ZnS、ZnCdS/ZnS、MnSe/ZnSe/ZnS、CuInZnS/ZnS等。量子点由以上元素构成外，还具有表面修饰基团，如-C00H、-NH2、-SH本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种PGI快速定量检测试剂盒，包括设置在试剂盒内的检测卡和样品缓冲液，所述检测卡包括上壳体和下壳体，其特征在于：所述上壳体与下壳体间放置有PGI检测试纸条，所述PGI检测试纸条包括在粘性底板上依次搭接的样本垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述的结合物垫上喷涂有PGI单克隆抗体偶联的量子点，所述的硝酸纤维素膜上包被有另一株PGI单克隆抗体作为检测线，硝酸纤维素膜上还包被有羊抗鼠抗体或其他抗鼠抗体作为质控线；所述上壳体上设置有加样孔、观察窗和信息区，所述加样孔与PGI检测试纸条上的样本垫对应，观察窗与硝酸纤维素膜上的检测线和质控线对应；所述信息区上喷涂有用于识别病人ID的二维码、条形码或磁卡；所述试剂盒上还设置有标定芯片。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张永顶，马伟民，张大准，马新民，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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