幽门螺杆菌药敏检测试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术提供了用于幽门螺杆菌药敏试验的培养基和判读方法，该培养基配方独特，能够高效稳定地促进幽门螺杆菌的生长，保证药敏试验检测结果中的抑菌圈及其大小只同抗生素种类和抗生素浓度相关，从而可以根据抑菌圈的出现与否以及抑菌圈的大小，依据设定的判读方法和标准科学确定不同幽门螺杆菌分离株对不同抗生素的敏感性，具有快速、准确、直观、便捷的特点和优势。是针对各种病原菌独特、可靠的新型药敏检测方法。同标准药敏试验相比较，其检测准确性可以达到100％。准确性可以达到100％。

【技术实现步骤摘要】
幽门螺杆菌药敏检测试剂盒和检测方法
[0001]本申请是申请日为2018.04.18、专利技术名称为“幽门螺杆菌药敏检测培养基及试剂盒”、申请号为201810350533.0的专利技术的分案申请。


[0002]本专利技术涉及药敏检测领域，尤其涉及幽门螺杆菌药敏检测培养基及试剂盒。

技术介绍

[0003]幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，HP)是一种革兰氏阴性菌，可定植于胃粘膜，世界范围内约有高达50％～70％的感染率。流行病学分析显示，慢性活动性胃炎HP检出率为92.43％，十二指肠溃疡中检出率为89.47％，胃溃疡检出率为83.35％，胃癌中检出率为58.99％。可见，幽门螺杆菌感染是慢性胃炎的主要原因。同时长期的HP感染还会引发严重的萎缩性胃炎、伴随性肠上皮化生，甚至可以极大地提高胃癌风险。
[0004]目前，幽门螺杆菌的感染主要靠以抗生素为主的三联或四联疗法进行治疗，但是目前幽门螺杆菌的清除率和相关疾病的治愈率在逐年下降，其中非常重要的原因是患者感染幽门螺杆菌的耐药性越来越严重而且普遍，目前对HP的治疗方案几乎全凭临床经验制订，药物组成和配方单一，没有针对不同感染者施行个体化精准治疗，因此往往导致治疗失败，需要多次除菌治疗，不仅导致病人的经济负担，同时也导致药物治疗的副作用高发。
[0005]对不同患者体内幽门螺杆菌菌株进行药物敏感性检测，是制定个体化、精准治疗方案的有效方法。纸片扩散法是应用最广泛的药敏测试方法，该法是将含有特定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的培养基表面上，纸片中的药物在培养基中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度逐渐降低，从而在药敏片周围形成浓度梯度，药敏片周围细菌依据对药物的不同敏感性而在药敏片周围形成不同大小的抑菌圈，高敏感的药敏片周围会形成较大的抑菌圈，耐药药敏片周围则形成较小抑菌圈或无抑菌圈，所以可以根据抑菌圈的大小来判断是药物的敏感、中度敏感、耐药。通过药敏试验，筛选针对于特定微生物的敏感药物，从而对临床治疗提供指导。美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的“抗微生物药物敏感性试验执行标准”，为临床试验和相关医疗问题提供指南，受到全世界的公认和采用。
[0006]但通常纸片法药敏检测结果首先需要用尺子测量抑菌圈直径，再查找标准数据进行比对，才能得到正确的结果。这样的不仅操作麻烦、测量不准、耗时，更重要的是，目前还缺少能够用于幽门螺杆菌药敏检测的标准培养基。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于幽门螺杆菌药敏检测培养基及试剂盒，本专利技术所述的培养基能够很好保证幽门螺杆菌的生长，同时保证药敏试验检测结果中的抑菌圈及其大小只同抗生素种类和抗生素浓度相关。
[0008]本专利技术提供的培养基由绵羊血和营养液组成；所述营养液由水和如下组分组成：
[0009][0010]一些实施例中，所述营养液由水和如下组分组成：
[0011][0012]另一些实施例中，所述营养液由水和如下组分组成：
[0013][0014][0015]另一些实施例中，所述营养液由水和如下组分组成：
[0016][0017]本专利技术采用的绵羊血为无菌脱纤维绵羊血，购自南京茂捷微生物科技有限公司。本专利技术所述绵羊血与营养液的体积比为1∶(8～10)。
[0018]一些实施例中，所述绵羊血与营养液的体积比为1∶9。
[0019]本专利技术提供的培养基的pH值为7.2
±
0.1。
[0020]本专利技术所述培养基的制备方法为，将牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、Na2HPO4、蛋白胨、NaCl与水混合，加入琼脂粉后，经灭菌制得营养液；所述营养液与绵羊血混合，制得培养基。
[0021]各组分与水混合后，经滤纸过滤和灭菌的步骤；所述灭菌的条件为：121℃灭菌20min。
[0022]混合后的溶液可灭菌后于4℃保存备用，使用时取出加入琼脂粉共同灭菌制备营养液。或者混合后的直接加入琼脂粉，经灭菌制得营养液。所述灭菌的条件为：121℃灭菌20min。
[0023]将灭菌后的营养液与绵羊血混合，充分混匀后，制备平板。
[0024]本专利技术所述的培养基在幽门螺杆菌药敏检测中的应用。
[0025]本专利技术还提供了一种幽门螺杆菌药敏判读工具，其在基底表面设置指示环；所述指示环由2个同心圆及其圆心组成，所述同心圆的直径分别为1.5cm、2.4cm。
[0026]本专利技术实施例中，所述基底为培养皿底部或卡片。
[0027]所述卡片为圆形，直径为10cm。所述指示环的个数为4个。
[0028]所述培养皿的直径为10cm，所述指示环的个数为4个。
[0029]本专利技术还提供了一种幽门螺杆菌药敏检测试剂盒，包括本专利技术提供的培养基及本专利技术所述的指示工具。
[0030]本专利技术还提供了一种幽门螺杆菌药敏检测方法，将待测幽门螺杆菌菌株涂布至本专利技术培养基上，在培养基表面放置含有待测药物的药敏片，然后转入85vol％N2、5vol％O2和10vol％CO2环境内37℃培养4天，以本专利技术所述的指示工具判断药敏情况。
[0031]本专利技术中，药敏片放置在指示环的圆心对应位置。
[0032]所述待测菌株由分离培养菌株以生理盐水重悬后进行涂布；所述重悬至菌株密度为0.8
×
105CFU/mL～1.2
×
105CFU/mL。
[0033]所述待测菌株的分离培养采用的培养基为含有抗生素的本专利技术所述培养基。
[0034]具体的，分离培养基中含有本专利技术所述培养基和万古霉素9mg/L～12mg/L；甲氧苄氨嘧啶3mg/L～6mg/L；两性霉素3mg/L～6mg/L；多粘菌素3mg/L～6mg/L。
[0035]本专利技术中，所述判断具体为：抑菌圈超出外部同心圆为敏感；抑菌圈位于外部同心圆与内部同心圆之间为中度敏感，抑菌圈小于内部同心圆为耐药。
[0036]所述待测菌株的分离培养采用幽门螺杆菌选择分离培养基。
[0037]所述药敏片的直径为0.6cm。
[0038]所述待测药物分别为甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星、利福平、红霉素、四环素；所述待测药物在药敏片上的含量依次为5μg、10μg、15μg、5μg、5μg、5μg、15μg、5μg。
[0039]本专利技术提供了用于幽门螺杆菌药敏检测的培养基和指示工具，该培养基配方合理，能够很好的控制幽门螺杆菌的生长，使其在检测过程中产生的抑菌圈大小合理，能够配合本专利技术提供的检测工具使用。根据抗生素药敏片针对特定药物的测试结果，确定不同敏感微生物抑菌圈大小范围，并将这些范围利用肉眼可以明确观察的标志环进行标记。根据抑菌圈同上述指示环的比对，确认相关微生物对特定药敏片荷载药物的敏感程度，比如敏感、中度敏感和耐药。培养皿上有明确的不同药敏片定位标志，本专利技术操作简便快速、成本低、稳定性好，直观可靠，准确性可达100％。
附图说明
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌药敏检测试剂盒，其特征在于，包括培养基和判读工具；所述培养基的pH值为7.2
±
0.1，其由绵羊血和营养液组成；所述绵羊血与营养液的体积比为1∶(8～10)；所述营养液由水和如下组分组成：所述判读工具在基底表面设置指示环；所述指示环由2个同心圆及其圆心组成，所述同心圆的直径分别为1.5cm、2.4cm；所述基底为培养皿底部或卡片；所述卡片为圆形，直径为10cm；所述指示环的个数为4个；所述培养皿的直径为10cm，所述指示环的个数为4个。2.一种幽门螺杆菌药敏判读方法，其特征在于，将待测幽门螺杆菌菌株接种至权利要求1中所述的培养基上，在培养基表面放置含有待测药物的药敏片，然后转入85vol％N2、5vol％O2和10vol％CO2环境内37℃培养5天，以权利要求1中所述的判读工具判断药敏情况；药敏片放置在指示环的圆心对应位置。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪涛，马伟民，张永顶，刘谦，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：