一种检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，特别涉及一种检测试剂盒。该试剂盒包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物；该检测试剂盒具有高度灵敏和特异性，可以一次检测12种抗体，具有较高的准确性、操作简便、节约抗原、降低成本等优点，同时优化了相关的试剂配方和处理方法，使试剂盒的稳定性更好(2‑8℃冷藏2年，室温可储存6个月)，储存及运输条件更为便利。

【技术实现步骤摘要】
一种检测试剂盒本申请是申请日为2018年03月07日、专利技术名称为“一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置”、申请号为201810186409.5的专利技术的分案申请。
本专利技术涉及生物检测
，特别涉及一种检测试剂盒。
技术介绍
自身免疫相关性肾炎是由于自身抗原和自身抗体相结合形成免疫复合物沉积在肾脏，导致肾脏损伤的一类疾病。包括狼疮性肾炎(LN)，原发性膜性肾病(PMN)，抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性肾损害等。至今在中国免疫性肾炎的发病率仍然很高。该病为潜在病理改变的持续性或进行性发展，使病情迁延，成为慢性，而不单纯是急性肾炎的慢性阶段。早期诊断有助于自身免疫性疾病的临床控制。研究已发现大部分的自身免疫性肾病患者血清中存在着特异性自身抗体，例如ANCA相关血管炎的抗髓过氧化物酶(MPO)抗体、抗蛋白酶3抗体(PR3)、抗肾小球基底膜抗体(GBM)、抗内皮细胞抗体、抗乳铁蛋白(LF)抗体、抗人溶酶体相关膜蛋白(LAMP-2)抗体；狼疮性肾炎(LN)的抗C1q抗体、抗核小体(Nucleosome)抗体和抗双链DNA(dsDNA)抗体，原发性膜性肾病(IMN)的抗磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体和1型血小板反应蛋白7A(THSD7A)抗体，还有本公司研究制备的抗磷脂酶A2受体(PLA2R)与1型血小板反应蛋白7A域(THSD7A)融合的融合蛋白PT蛋白抗体,这些特异性自身抗体是自身免疫性肾病诊断标准中重要的组成部分。目前有很多检测自身免疫相关性肾炎抗体的方法，包括间接免疫荧光分析法、酶联免疫吸附法或免疫印迹法，但还是存在各自的缺点。间接免疫荧光分析法是通过形成的荧光结合物来推断自身抗体的类别，缺乏一个具体客观的诊断，需要利用其他技术进行二次证实，如免疫印迹法、酶联免疫法等。酶联免疫吸附法一次试验只能检测单一抗体，效率低，成本较高，在诊断应用方面存在一定的局限性。免疫印记法所需标本量大、操作繁琐、检测时间过长、成本较高等问题。且试剂盒的稳定期一般都是2-8℃稳定期1年。ELISA-Array技术不但保持着ELISA方法的操作简便、成本低的优点，而且具有蛋白芯片技术高通量的优点；该技术通过点样仪以微阵列的形式将多种标记物固定于微孔板板孔内，可同时检测多种病原体。它可以在一个微孔中实现一份样本的多种检测，大大减少了标本和试剂的量。但目前国内尚无针对自身免疫性肾病的ELISA-Array技术检测的研究。因此，提供一种高度灵敏和特异的、稳定性更好的自身免疫相关性肾炎抗体的检测试剂盒具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种检测试剂盒。该试剂盒可以一次检测12种抗体，具有较高的准确性、操作简便、节约抗原、降低成本等优点，同时优化了相关的试剂配方和处理方法，使试剂盒的稳定性更好(2-8℃冷藏2年，室温可储存6个月)，储存及运输条件更为便利。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种检测试剂盒，包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物；所述检测试剂盒中所述柠檬酸、甘露醇、PVA2W的体积比为(1～1.5):(0.3～0.6):(0.8～1.5)或所述组合物包括如下组分：在本专利技术的一些具体实施方案中，还包括BSA、Proclin300、PBS或磷酸氢二钠中的一种或两者以上的混合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述BSA在所述组合物中的质量体积百分含量为1～2.5％；所述Proclin300在所述组合物中的体积百分含量为0.05％；所述PBS的浓度为0.01M；所述磷酸氢二钠的浓度为0.01M。在本专利技术的一些具体实施方案中，还包括自身免疫性肾病相关抗原；所述自身免疫性肾病相关抗原包括GBM、PR3、MPO、LF、LAMP-2、PLA2R、THSD7A、PT蛋白、内皮细胞、C1q、dsDNA、核小体中的至少一种。在本专利技术的一些具体实施方案中，还包括标记物、样品稀释液、洗涤液、显色液中的一种或两者以上的混合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述标记物为标记偶联物标记的抗人IgG抗体；所述标记偶联物包括酶标记物、亲和素或吖啶酯；所述酶标记物为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；所述抗人IgG抗体为兔抗人IgG抗体或羊抗人IgG抗体；所述样品稀释液为包含0.15MNaCl、0.05％Tween20、0.01％酪蛋白的pH7.4的0.02MTris溶液；所述洗涤液为包含0.15MNaCl、0.05％Tween20的pH7.4的0.02MTris溶液；所述显色液为ECL。本专利技术还提供了一种组合物，包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中柠檬酸、甘露醇、PVA2W的体积比为(1～1.5):(0.3～0.6):(0.8～1.5)。在本专利技术的另一些具体实施方案中，所述组合物中包括如下组分：在本专利技术的另一些具体实施方案中，所述组合物还包括BSA、Proclin300、PBS或磷酸氢二钠中的一种或两者以上的混合物。在本专利技术的另一些具体实施方案中，所述BSA在所述组合物中的质量体积百分含量为1～2.5％；所述Proclin300在所述组合物中的体积百分含量为0.05％；所述PBS的浓度为0.01M；所述磷酸氢二钠的浓度为0.01M。本专利技术还提供了所述的组合物在制备芯片和/或检测装置中的应用。本专利技术还提供了一种芯片，其包被有所述的组合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述芯片还包被有自身免疫性肾病相关抗原。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述自身免疫性肾病相关抗原包括GBM、PR3、MPO、LF、LAMP-2、PLA2R、THSD7A、PT蛋白、内皮细胞、C1q、dsDNA、核小体中的至少一种。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述芯片还包含质控点和/或参考点；所述质控点包含至少一个阳性质控点(PC)、至少一个阴性质控点(NC)、至少一个样品质控点(SC)和/或至少一个酶标质控点(EC)；所述参考点包含不同浓度的参考曲线点(S1-S3)和/或至少一个芯片位置参考点(Loc)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述阳性质控点包被人IgG或包被BSA-DNP偶联物；所述阴性质控点包被低于反应信号值的微量浓度的人IgG或其他的与自身免疫性肾病无关的蛋白；所述样品质控点为包被抗人IgG；所述酶标质控点包被人IgG、抗兔的抗体或抗羊的抗体；所述参考曲线点包被不同浓度的人IgG；所述芯片位置参考点包被已知浓度的人IgG溶液。本专利技术提供了所述的芯片的制备方法，包括如下步骤：步骤1：将所述自身免疫性肾病相关抗原、所述质控点的蛋白和/或所述参考点的蛋白经包被缓冲液稀释后，以点阵列形式包被于所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测试剂盒，其特征在于，包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物；/n所述检测试剂盒中所述柠檬酸、甘露醇、PVA2W的体积比为(1～1.5):(0.3～0.6):(0.8～1.5)或/n所述组合物包括如下组分：/n

【技术特征摘要】
1.一种检测试剂盒，其特征在于，包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物；
所述检测试剂盒中所述柠檬酸、甘露醇、PVA2W的体积比为(1～1.5):(0.3～0.6):(0.8～1.5)或
所述组合物包括如下组分：





2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括BSA、Proclin300、PBS或磷酸氢二钠中的一种或两者以上的混合物。


3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述BSA在所述组合物中的质量体积百分含量为1～2.5％；
所述Proclin300在所述组合物中的体积百分含量为0.05％；
所述PBS的浓度为0.01M；
所述磷酸氢二钠的浓度为0.01M。


4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括自身免疫性肾病相关抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大准，王洪涛，张永顶，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44