一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法技术

本发明专利技术属于临床诊断技术领域，公开了一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法。本发明专利技术所述蛋白质质控芯片的稳定剂包含乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物和有机溶剂。采用本发明专利技术所述稳定剂对蛋白质质控芯片进行稳定，解决了质控芯片拖尾的现象和质控芯片常温不稳定的问题，可制备出形貌规则、稳定性好的质控芯片，且质控芯片在37℃下可至少稳定1年，2～8℃可以稳定数年。制得的形貌规则、稳定性好的质控芯片可作为参照对试剂盒进行批间控制，亦可对仪器成像系统进行定期校准。

A stabilizer of protein quality control chip and the method of preparing protein quality control chip

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法
本专利技术属于临床诊断
，具体涉及一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法。
技术介绍
生物芯片技术是生物工程学的一项革命性的新技术，具体是指通过微加工技术和微电子技术在固相基质表明构建的微型生物化学分析系统，以实现对生命机体的组织、细胞、蛋白质、核酸、糖类以及其他生物组分的准确、快速与大信息量的检测。自1998年美国宣布正式启动基因芯片计划依赖，生物芯片技术的理论研究与实际应用在国内外迅速发展，已经成为人们获取相关信息的重要手段之一。生物芯片技术是生命科学研究中继基因克隆技术、基因自动测序技术、PCR技术后的又一次革命性技术突破，在生物、医学、食品、环境科学等领域具有十分广阔的应用前景。生物芯片种类繁多，就目前为止有基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片、细胞芯片、微路流芯片、糖芯片等。蛋白质芯片是一种新型的生物芯片。是由固定于不同种类支持介质上的蛋白微阵列组成，阵列中固定分子的位置及组成是已知的。用未经标记或标记(荧光物质、酶或化学发光物质等标记)的生物分子与芯片上的探针进行反应，然后通过特定的扫描装置进行检测，结果由计算机分析处理。蛋白质芯片具有特异性强、敏感性高、通量高、应用性强等特点。近年来，微阵列蛋白芯片已经在蛋白质组的功能研究、疾病诊断以及药物开发中显示出巨大的潜力。如可用于分析抗原-抗体、蛋白-蛋白、蛋白-核酸、蛋白-脂质、蛋白-小分子以及酶-底物间的相互作用等。蛋白质芯片技术是由芯片制作、样品制备、生物学反应、信号的检测与分析4个环节组成。制作蛋白质芯片是利用蛋白质芯片技术检测相应抗原、抗体、底物、受体、小分子的关键步骤之一。通常先将已知特性的蛋白质通过阵列点样仪准确、快速、定量、有序地点加在玻璃片、硅片、膜或云母片等载体表面。经干燥、洗涤和封闭后即制成蛋白质芯片。体外诊断试剂的批间稳定性至关重要，制备出形貌规则、稳定性强的质控芯片，可用于试剂盒的批间控制以及生物芯片阅读仪成像系统的定期校准。但是按照普通的封闭(3％BSA)工艺，则容易造成拖尾，导致芯片上的圆点不规则，不适合用于试剂盒的批间控制以及生物芯片阅读仪的定期校准。另外，常规制备的微阵列质控芯片，微阵列质控芯片的信号值在4℃下仅可稳定2个月，室温情况下仅稳定3天，37℃下十分不稳定。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术中存在的蛋白质质控芯片形貌不规则有拖尾、稳定性差的问题提供一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法，能够解决质控芯片拖尾的现象且提高质控芯片的稳定性。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：一种蛋白质质控芯片的稳定剂，包含乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物和有机溶剂。其中，所述的稳定剂中所述乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物为聚(乙烯基甲醚-alt-马来酸单乙酯)、聚(乙烯基甲醚-alt-马来酸单丁酯)或聚(乙烯基甲醚-alt-马来酸单异丙基酯)。在一些实施方案中，所述的稳定剂中所述有机溶剂为无水乙醇、异丙醇、氯仿、甲醇。在本专利技术所述稳定剂中，按g/ml计，所述乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物与有机溶剂的质量体积比为1∶(4-8)。本专利技术还提供了上述的稳定剂的制备方法，具体为乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物加入有机溶剂剧烈震荡10分钟至完全溶解。本专利技术还提供了一种制备蛋白质质控芯片的方法，将蛋白抗原及参考点蛋白点样于芯片基质上，进行芯片固定、封闭、稳定、参考品孵育、酶结合物孵育、芯片底物孵育、上述稳定剂稳定、烘干。在本专利技术中，所述封闭前还包括2％(g/ml)酪蛋白雾化封闭的步骤。所述2％(g/ml)酪蛋白为2g酪蛋白加入100ml水中溶解。进一步的，所述雾化封闭的喷雾量为5μL，雾化时间5秒。在本专利技术中，所述制备蛋白质质控芯片的方法，所述蛋白抗原为糖尿病特异抗原、特发性膜性肾病特异抗原或幽门螺杆菌特异抗原。在一些实施方案中，所述糖尿病特异抗原为GAD重组蛋白、IA-2重组蛋白、ICA重组蛋白、ZNT8重组蛋白和/或INS重组蛋白。在一些实施方案中，所述特发性膜性肾病特异抗原为PLA2R重组蛋白和/或THSD7A重组蛋白。在一些实施方案中，所述幽门螺杆菌特异抗原为CagA重组蛋白、VacA重组蛋白、UreA重组蛋白和/或UreB重组蛋白。在本专利技术中，所述制备蛋白质质控芯片的方法中所述封闭后的稳定为用LiquidPlate进行稳定。具体为每孔加入100μLLiquidPlate室温(20-25℃)稳定30min，甩出液体。在本专利技术中，所述制备蛋白质质控芯片的方法中所述稳定剂稳定为各孔加入上述稳定剂(高分子稳定剂)50μL，37℃烘干2h。由上述技术方案可知，本专利技术提供了一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法。本专利技术所述蛋白质质控芯片的稳定剂包含乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物和有机溶剂。采用本专利技术所述稳定剂对蛋白质质控芯片进行稳定，解决了质控芯片拖尾的现象和质控芯片常温不稳定的问题，可制备出形貌规则、稳定性好的质控芯片，且质控芯片在37℃下可至少稳定1年，2～8℃可以稳定数年。制得的形貌规则、稳定性好的质控芯片可作为参照对试剂盒进行批间控制，亦可对仪器成像系统进行定期校准。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1-12示实施例2雾化封闭的结果图；图13-24示实施例2常规封闭(非雾化封闭)的结果图。具体实施方式本专利技术公开了一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。实施例1、微阵列质控芯片检测糖尿病自身抗体本专利技术中微阵列质控芯片的制备包括：通过点样仪将糖尿病的5种重组抗原以及一些参考点蛋白以一定的点阵列点样于芯片基质上，通过芯片固定，雾化封闭、封闭、稳定，参考品孵育，酶结合物孵育，芯片底物孵育，高分子稳定，烘干等步骤组成。1、配制点样缓冲液1.1配置点样缓冲液配制1000mLTris点样缓冲液：在烧杯中称取T本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白质质控芯片的稳定剂，包含乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物和有机溶剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质质控芯片的稳定剂，包含乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物和有机溶剂。


2.根据权利要求1所述的稳定剂，所述乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物为聚(乙烯基甲醚-alt-马来酸单乙酯)、聚(乙烯基甲醚-alt-马来酸单丁酯)或聚(乙烯基甲醚-alt-马来酸单异丙基酯)。


3.根据权利要求1所述的稳定剂，所述有机溶剂为无水乙醇、异丙醇、氯仿、甲醇。


4.根据权利要求1所述的稳定剂，按g/ml计，所述乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物与有机溶剂的质量体积比为1∶(4-20)。


5.权利要求1-4任一项所述的稳定剂的制备方法乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物加入有机溶剂剧烈震荡10分钟至完全溶解。


6.一种制备蛋白质质控芯片的方法，将蛋白抗原及参考点蛋白点样于芯片基质上，进行芯片固定、封闭...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪涛，张大准，段江磊，陈晓彤，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44