一种包被缓冲液、试剂盒及应用制造技术

本申请属于临床诊断技术领域，公开了一种包被缓冲液、试剂盒及应用。本发明专利技术所述包被缓冲液包含缓冲盐溶液和5v/v％～15v/v％甘油。采用本发明专利技术所述包被缓冲液稀释待测样本后包被酶标板后进行ELISA检测，可以明显提高P/N，进而提高检测的灵敏度和特异度，解决了灵敏度低的问题，检测试验的阳性符合率与阴性符合率均能达到100％。本发明专利技术所述包被缓冲液或包括上述的包被缓冲液的试剂盒可用于制备THSD7A‑P1蛋白诊断产品。

A coating buffer, kit and its application

【技术实现步骤摘要】
一种包被缓冲液、试剂盒及应用
本专利技术属于临床诊断
，具体涉及一种包被缓冲液、试剂盒及应用，尤其是涉及一种THSD7A抗体的检测试剂盒。
技术介绍
特发性膜性肾病(IdiopathicMembranousNephropathy，IMN)是以肾小球基底膜上皮细胞下免疫复合物沉积伴基底膜弥漫增厚为特征的一组疾病，是构成中老年原发性肾病综合征的常见肾病类型之一，好发年龄为50-60岁，近年来该病发病率呈逐步增长和年轻化趋势。IMN的典型临床特征是大量蛋白尿(≥3.5g/24小时尿)、低白蛋白血症(＜30g/dL)、高脂血症和浮肿。研究表明，所有IMN患者中近40％病人终将进入慢性肾衰竭。对于IMN患者，虽有一些临床指标可指导临床医生了解病情，判断预后，如大量蛋白尿长期不能缓解、伴高血压、肾功能不全、高龄且有其他合并症者常提示预后不良，但因缺乏特异性生物标志物、无评估其病情活动和预后的特异性监测指标，如何处理这些病人始终是困扰医生的重大难题。2009年，Beck等证实成人IMN患者肾小球足细胞表面存在一种特异性靶抗原一M型磷脂酶A2受体(PhospholipaseA2receptor，PLA2R)，且70％IMN病人血液循环中存在抗PLA2R抗体，两者结合形成颗粒状免疫复合物沉积于上皮下，这是首次发现足细胞靶抗原及可疑致病抗原，对明确IMN发病机制具有重要意义。近期有研究指出IMN患者血清中除抗PLA2R抗体之外还有针对IMN患者肾小球的其他循环抗体，其是一种分子量为250kD的肾小球蛋白，质谱分析确定该抗原为1型血小板反应蛋白7A域(ThrombospondinType-1Domain-containing7A(THSD7A))，证实THSD7A是参与成人IMN发病的第二个抗原，并且在血清抗PLA2R抗体阳性的IMN患者及其他肾病患者均不能识别THSD7A。这表明血清抗THSD7A抗体阳性的患者代表了明显不同的一个IMN患者亚组。这将有助于进一步了解IMN的发病机制，并且可以通过检测血清抗PLAR2抗体阴性IMN患者血清中抗THSD7A抗体，使两者可以成为互补诊断IMN的可能。1971年瑞典学者Engvall和Perlmann，荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)。ELISA现在已成为目前分析化学领域中常用的方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)的基础上发展起来的一种免疫测定技术。在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜。通常的包被缓冲液一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液(CB)作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液(PBS)及pH8.5的Tris-HCl(TRIS)缓冲液作为稀释液的。但上述3种包被缓冲液在包被公司的THSD7A-P1蛋白时，检测试验的阳性标本信号与阴性标本的信号比(P/N)较低，弱阳标本检测结果为阴性。检测试验的灵敏度较低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术中存在的酶联免疫吸附测定法中P/N较低，检测灵敏度低的问题，提供一种能够提高检测试验的阳性标本信号与阴性标本的信号比(P/N)的酶联免疫吸附测定法的包被缓冲液。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：一种包被缓冲液，包含缓冲盐溶液和5v/v％～15v/v％甘油。在一些实施方案中，所述包被缓冲液中甘油浓度为5v/v％。在一些实施方案中，所述包被缓冲液中甘油浓度为10v/v％。在一些实施方案中，所述包被缓冲液中甘油浓度为15v/v％。进一步的在本专利技术中，所述的包被缓冲液中，按g/mL计还包括5％～10％海藻糖。在本专利技术中，按g/mL计，所述的包被缓冲液中还包括0.005％～0.10％植酸钠。即每100mL包被缓冲液中还包括0.005g～0.10g植酸钠。在一些实施方案中，所述包被缓冲液中植酸钠浓度为0.005％。即每100mL包被缓冲液中还包括0.005g植酸钠。在一些实施方案中，所述包被缓冲液中植酸钠浓度为0.02％。即每100mL包被缓冲液中还包括0.02g植酸钠。在一些实施方案中，所述包被缓冲液中植酸钠浓度为0.10％。即每100mL包被缓冲液中还包括0.10g植酸钠。在本专利技术中，所述的包被缓冲液中还包括0.1v/v％ProClin300。进一步的，在本专利技术中，所述的包被缓冲液中所述缓冲盐溶液为pH8.5的Tris缓冲液、pH9.6的碳酸盐缓冲液或pH7.4的磷酸缓冲盐溶液。在一些实施方案中，所述包被缓冲液由10mMpH7.4的磷酸缓冲盐溶液、10％(g/mL)海藻糖、15％甘油、0.005％-0.02％(g/mL)植酸钠、0.1v/v％ProClin300组成。本专利技术还提供了一种ELISA检测的试剂盒，包括上述的包被缓冲液。在一些实施方案中，本专利技术采用不同包被缓冲液配制的包被液对阳性参考品和阴性参考品进行检测，比较1份阳性参考品及7份阴性参考品的OD值计算得到P/N，结果显示本专利技术所述包被缓冲液可以明显提高P/N。P/N为阳性结果与阴性结果的比值，反映了检测试验能够区分阳性和阴性的能力。而体外诊断试剂检测实验的P/N对检测试验的灵敏度影响很大，检测试验能够控制较好的P/N，能提高检测方法的灵敏度和特异度。故本专利技术所述包被缓冲液可以明显提高检测的灵敏度和特异度。因此本专利技术提供了上述的包被缓冲液或包括上述的包被缓冲液的试剂盒在制备THSD7A-P1蛋白诊断产品中的应用。由上述技术方案可知，本专利技术提供了一种包被缓冲液、试剂盒及应用。本专利技术所述包被缓冲液包含缓冲盐溶液和5v/v％～15v/v％甘油。采用本专利技术所述包被缓冲液稀释待测样本后包被酶标板后进行ELISA检测，可以明显提高P/N，进而提高检测的灵敏度和特异度，解决了灵敏度低的问题，检测试验的阳性符合率与阴性符合率均能达到100％。本专利技术所述包被缓冲液或包括上述的包被缓冲液的试剂盒可用于制备THSD7A-P1蛋白诊断产品。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示实施例1不同包被缓冲液稀释样本后进行酶联免疫吸附测定P/N结果统计图。具体实施方式本专利技术公开了一种包被缓冲液、试剂盒及应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包被缓冲液，包含缓冲盐溶液和5v/v％～15v/v％甘油。/n

【技术特征摘要】
1.一种包被缓冲液，包含缓冲盐溶液和5v/v％～15v/v％甘油。


2.根据权利要求1所述的包被缓冲液，按g/mL计还包括5％～10％海藻糖。


3.根据权利要求2所述的包被缓冲液，按g/mL计还包括0.005％～0.10％植酸钠。


4.根据权利要求1-3任一项所述的包被缓冲液，还包括0.1v/v％ProClin300。

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪涛，张大准，詹婷婷，梁香禄，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44