一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物及其应用。一种与ICP辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物，由S10A9_HUMAN(人S100钙结合蛋白A9)，CHLE_HUMAN(人胆碱酯酶)和APOA1_HUMAN(人载脂蛋白A1)组成。发明专利技术人通过分离和研究初产、单胎妊娠的ICP病例和与其年龄匹配的健康孕妇对照血清/血浆中的蛋白质分子标志物，寻找一组与ICP发病高度相关的高特异性和敏感性的蛋白质分子标志物，为ICP的筛查和诊断治疗提供实验室支持。

A serum / plasma protein molecular marker related to the diagnosis of intrahepatic cholestasis of pregnancy and its application

【技术实现步骤摘要】
一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物及其应用专利
本专利技术属于基因工程及生殖医学领域，涉及一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物及其应用。
技术介绍
妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepaticcholestasisofpregnancy，ICP)是一种常见的且严重的妊娠期特发性肝病，通常发生在妊娠中、晚期，临床上以总胆汁酸(TBA)水平升高、肝功能异常及皮肤瘙痒为特征。该病的主要危害是影响围产儿预后，导致早产、羊水粪染、胎儿宫内窘迫，甚至不明原因的胎儿宫内死亡等。ICP在我国的发生率最近估计为1.2％，其中重庆、成都和上海发病率较高，为3.2％-6.3％。大量的流行病学和实验研究表明，ICP的发生主要与雌激素、遗传、免疫和环境因素等有关，但迄今仍没有一种学说可以独立、系统地解释ICP的发病机制对ICP人群进行早期诊断、早期干预及合理治疗可以有效降低该病的发病风险和母婴并发症，大大降低ICP给母婴和其家庭带来的疾病痛苦和经济压力。目前，上升的血清总胆汁酸(TBA)水平被认为是最为敏感的实验室检测ICP异常的指标，然而，有研究表明血清TBA水平会随着受试人群的不同而改变，这使得仅仅依据血清总胆汁酸水平作为临床上ICP诊断的生化指标可能并不全面，因此，探索新的、更为精确的适合妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断指标迫在眉睫。蛋白质组学是在高通量水平上的研究，从蛋白质表达水平的变化，不同类型的修饰及蛋白间相互作用等方面入手，探索疾病的发生过程，为筛选疾病的辅助诊断分子标志物提供帮助。目前，蛋白质组学技术在妊娠期相关疾病中的研究逐年增多，包括妊娠期糖尿病，妊娠期高血压等疾病均通过蛋白质组学实验筛选出了有效的诊断标志物，提高了疾病的诊断效率。因此，通过蛋白质组学筛选诊断ICP有效的生物标志物是一个新的，可行的实验手段。目前国、内外还没有用于ICP辅助诊断的较为稳定的生物标志物的报道，若能通过蛋白质组学技术筛选出ICP特异或异常表达的蛋白质分子作为生物标志物，并研制相应的辅助诊断试剂盒，将极大改善我国ICP的诊断现状。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是针对上述技术问题，提出一组与ICP辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物。本专利技术的第二个目的是提供上述血清/血浆蛋白质分子标志物在制备ICP辅助诊断试剂盒中的应用。本专利技术第三个目的是提供用于ICP辅助诊断的试剂盒。本专利技术的目的是通过下列技术方案实现的：一组与ICP辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物，该标志物选自S10A9_HUMAN(人S100钙结合蛋白A9)，CHLE_HUMAN(人胆碱酯酶)，APOA1_HUMAN(人载脂蛋白A1)中的任意一种或多种。作为本专利技术的一种优选，该标志物选自S10A9_HUMAN，CHLE_HUMAN和APOA1_HUMAN中的任意两种的组合。作为本专利技术的一种优选，该标志物由S10A9_HUMAN，CHLE_HUMAN和APOA1_HUMAN组成。本专利技术所述的血清/血浆蛋白质分子标志物作为检测靶标在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂盒中的应用。本专利技术所述的血清/血浆蛋白质分子标志物的检测试剂在制备妊娠期肝内胆汁淤积症血清/血浆辅助诊断试剂盒中的应用。一组妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断试剂盒，该试剂盒包括检测血清/血浆蛋白质分子标志物S10A9_HUMAN(人S100钙结合蛋白A9)，CHLE_HUMAN(人胆碱酯酶)，APOA1_HUMAN(人载脂蛋白A1)中任意一种或多种的试剂；优选包括检测CHLE_HUMAN(人胆碱酯酶)，APOA1_HUMAN(人载脂蛋白A1)中任意两种的试剂；或者优选检测S10A9_HUMAN(人S100钙结合蛋白A9)，CHLE_HUMAN(人胆碱酯酶)和APOA1_HUMAN(人载脂蛋白A1)的检测试剂。本专利技术的专利技术点在于发现S10A9_HUMAN(人S100钙结合蛋白A9)，CHLE_HUMAN(人胆碱酯酶)，APOA1_HUMAN(人载脂蛋白A1)中的任意两个、三个可以作为妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物。本专利技术血清/血浆蛋白分子标志物通过以下方法筛选得到：1.研究样本的选择(1)纳入病例组：ICP诊断标准参照ICP患者诊疗指南(第一版)，具体标准如下：1)妊娠中晚期出现皮肤瘙痒，或伴有不同程度的黄疸；2)实验室检查：血清/血浆总胆汁酸(TBA)增高(>40μmol/L)，或伴转氨酶(ALT及AST)轻到中度升高，可伴胆红素升高；3)妊娠是引起皮肤瘙痒和生化异常的唯一原因；4)患者一般情况良好，无明显呕吐、食欲不佳、虚弱及其他疾病症状；5)分娩后上述症状、体征、血清/血浆生化指标迅速恢复正常。收集临床资料完整的ICP患者50例。(2)纳入正常对照组：无妊娠并发症及合并症，剖宫产指征为臀位、骨盆异常和社会因素等，收集临床资料完整的正常孕妇50例。(3)两组排除标准：1)患其它肝胆疾病；2)有其它妊娠并发症如妊娠期高血压疾病或有不能用ICP解释的血、尿或生化异常；3)有全身疾病如糖尿病、高血压、精神及神经疾病等；4)患有遗传性或免疫性疾病；5)有输血、移植或免疫治疗史者；6)有口服避孕药史者。本研究共采用100例符合标准的样本进行研究。2.DIA定量蛋白质检测(1)提取血清/血浆样本中的蛋白质进行预实验(2)选取预实验中质控合格的样本进行DDA建库(3)DIA质谱分析(4)DIA数据分析3.差异蛋白质验证实验(1)酶联免疫吸附实验(2)全自动生化分析仪检测(3)比较ICP病例与健康对照血清/血浆样本中S10A9_HUMAN、APOA1_HUMAN、ITIH3_HUMAN(人间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H3)和CHLE_HUMAN的量的变化。4.统计分析方法运用studentt检验比较人口学特征，TBA(μmol/L)、ALT(IU/L)、AST(IU/L)水平和蛋白质分子平均表达水平在研究对象组间分布的差异。我们在探索性样本人群(10例ICP病例和10例健康对照)中运用DIA定量技术的研究结果初步筛选发现12个蛋白质分子上调、19个蛋白质分子下调。验证差异表达的四种蛋白质分子(S10A9_HUMAN、ITIH3_HUMAN、APOA1_HUMAN和CHLE_HUMAN)与ICP发病情况的关联性。选择每组内至少有一半数据为非空值的数据进行显著性差异分析，筛选表达差异倍数大于1.5倍(上下调)且Pvalue(ttest)小于0.05的蛋白质作为差异表达蛋白质。对有统计学显著差异的蛋白质分子在另外50例病例和50例对照中进一步应用酶联免疫吸附实验和全自动生化分析仪进行验证。统计学分析均应用SPSS16.0统计学分析软件完成。统计学显著性水平P值设为0.05，所有统计学检验均为双侧检验。以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物，其特征在于该标志物选自S10A9_HUMAN， CHLE_HUMAN 和APOA1_HUMAN 中的一种或多种。/n

【技术特征摘要】
1.一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆蛋白质分子标志物，其特征在于该标志物选自S10A9_HUMAN，CHLE_HUMAN和APOA1_HUMAN中的一种或多种。


2.根据权利要求1所述的血清/血浆蛋白质分子标志物，其特征在于该标志物选自S10A9_HUMAN，CHLE_HUMAN和APOA1_HUMAN中的任意两种的组合。


3.根据权利要求1所述的血清/血浆蛋白质分子标志物，其特征在于该标志物由S10A9_HUMAN，CHLE_HU...

【专利技术属性】
技术研发人员：张婷，董蕊锐，罗亮，陈道桢，李娜，王晶，周涛，陈敏健，邹少晗，陈月娟，邹萍，王瑶，
申请(专利权)人：无锡市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：江苏;32