一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测chagas抗体的试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括组分A和组分B，其中组分A为标记有示踪标记物或包被磁球的chagas抗原，组分B为包被磁球或标记有示踪标记物的chagas二抗；并且，组分A和组分B中的任意一种标记有示踪标记物，另一种则包被磁球。本发明专利技术还提供了一种检测chagas抗体的方法，利用本发明专利技术提供的试剂盒，可以准确、灵敏地测定样本中的chagas浓度。在此基础上，以预处理液进行预处理优化，可以降低背景干扰，提高检测灵敏度。同时，该方法可以借助化学发光免疫分析仪，实现全自动化学发光法检测，减少了操作时间，降低人为操作误差。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用
本专利技术涉及生物物质检测的
，具体涉及一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备，以及应用该试剂盒检测克氏锥虫抗体的方法。
技术介绍
克氏锥虫病，又名美洲锥虫病(Americantrypanosomiasis)/查加斯病(Chagas)，是由克氏锥虫(Trypanosomacruzi)引起的一种人兽共患的寄生原虫病。病原体是克氏锥虫，它是一种单细胞原生动物，能够以不同形态在哺乳动物(包括人)的血液、细胞和锥蝽的消化道内生长，流行区主要通过“患者或储存宿主→锥蝽→人”的途径传播。非流行区病原体可通过血制品、器官移植、垂直传播或进食污染的食物等方式传播。该病的临床症状因感染阶段不同而异，急性期约95％的患者在感染克氏锥虫后无症状，但外周血涂片中可找到病原体，锥虫侵入部位可形成红斑和硬结，其他急性症状还包括发热、皮疹、肌肉关节痛、嗜睡、腹泻、水肿、全身淋巴结肿大、肝脾肿大、呼吸紊乱、发绀、昏迷等。绝大多数急性期症状和体征在数周至数月时间内自发的逐渐消退进入隐匿期，此期无任何临床症状和体征，显微镜检查外周血涂片亦难以发现克氏锥虫，但特异性抗体存在。约三分之一的患者经历隐匿期后逐渐进入慢性期，常发生于感染后10-20年，患者可累及心脏，称为查加斯心脏病，表现为心悸、眩晕甚至晕厥等。而后可逐渐发展至心肌肥大或心力衰竭，多为右心衰，可见心脏增大，伴见充血性肝肿大和外周性水肿，部分患者可见食管和结肠扩张，继而形成巨食管症和巨结肠症。因克氏锥虫与人免疫缺陷病毒HIV的早期传播模式、漫长的潜伏期和难以治愈等方面极其相似，有专家将查加斯病称为“美洲的新艾滋病”。该病曾局限于美洲地区，但现已随人口迁移传播到欧洲等大陆。美洲锥虫病的诊断试验包括显微镜检查、病原分离、血清学试验和分子生物学技术。急性感染的诊断以寄生虫检测为基础，血液、脑脊髓液或组织样品经吉姆萨或瑞氏染色，可在显微镜下观察克氏锥虫。但该方法不适用于大通量样本的快速检测。分子生物学检测技术主要是通过PCR和免疫印迹试验，可用来检测血液或组织中的克氏锥虫DNA。当血清学方法不确定时，可以进一步证实，也可用于治疗效果的辅助监测手段。但该技术需要专业人员且操作复杂，同样不适用于大通量样本的快速检测。克氏锥虫感染后1周～2周，进入急性期，持续约2月，为严重的虫血症，以持续升高的IgG抗体为特征。急性期后，虫血症非常低，IgG抗体达到最高水平，并持续终生。因此，血清免疫学试验经常用来检测IgG抗体以诊断慢性感染。血清免疫学检查具有方便、快捷和准确等优点，已经普遍应用于医疗检测和诊断领域。较常见的血清免疫学检查方法有免疫荧光技术(ABS)、放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附技术(ELISA)、免疫层析体技术(ICA)及化学发光免疫分析技术(CLIA)等。目前市场上检测chagas抗体主要的方法是酶联免疫法和化学发光法。酶联免疫法采用双抗体夹心捕获目标物，以辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)显色来实现目标物检测。采用ELISA方法检测血清中的chagas抗体，灵敏度较差，此外ELISA方法需要反复洗板，依赖人工操作，且检测周期长，使临床无法在早期快速准确的诊断出chagas，因而限制了ELISA方法在chagas临床检测方面的进一步应用。采用化学发光法检测血清中的chagas抗体，其灵敏度和精密度均远高于ELISA方法。现有技术文献中有记载通过化学发光法测定chagas抗体，采用双抗原夹心方法捕获目标物，以发光标记物进行化学发光产生信号实现目标物检测。但在采用双抗原夹心法检测chagas的化学发光方法中，能够相互配对的抗原多数特异性不好，容易出现非特异性结合，导致检测灵敏度受限。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测chagas抗体的试剂盒及其制备方法，利用chagas抗原与抗体的特异性结合，结合示踪标记物的发光性能和磁球的磁分离性，该试剂盒能够增强特异性，降低背景信号干扰，准确、灵敏地测定样本中的chagas抗体含量。本专利技术的目的还在于提供一种检测chagas抗体的方法，利用本专利技术提供的试剂盒，根据间接法或捕获法的测定原理，准确地测定样本中的chagas抗体含量。尤其是采用该试剂盒，通过全自动化学发光法检测chagas抗体，提高检测灵敏度的同时，还能够减少操作时间，降低人为操作误差。根据本专利技术，提供了一种用于检测chagas抗体的试剂盒，所述试剂盒包括组分A和组分B，其中组分A为标记有示踪标记物或包被磁球的chagas抗原，组分B为包被磁球或标记有示踪标记物的chagas二抗；并且，组分A和组分B中的任意一种标记有示踪标记物，另一种则包被磁球；其中，所述chagas二抗为抗人IgG抗体。根据本专利技术，所述示踪标记物可以选自本领域中常用于标记抗原或抗体的示踪标记物，例如金刚烷、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯，尤其优选为N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI)。适用于本专利技术的磁球也称为磁珠，可以是本领域中常用的磁性微球或颗粒。优选的，本专利技术使用的磁球，是将纳米级的Fe2O3或Fe3O4磁性粒子和有机高分子材料进行复合，形成具有超顺磁性和极大量蛋白吸附容量的微米级的固相微球，具有在外加磁场作用下可迅速被磁化，在撤走磁场后剩磁为零的属性。其中，所述有机高分子材料的种类没有特别限制，可根据需要进行选择。本专利技术所使用的磁性微球应能满足直径为0.1-5μm，磁性微球还可以通过表面改性而带有多种活性功能基团，包括但不限于-OH、-COOH、-NH2。在一个具体实施例中，所述磁球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体，并具有0.1-5μm的粒径；并且，所述磁球任选地通过表面改性而带有一种或多种活性功能基团。在本专利技术的一些实施方案中，所述示踪标记物直接或间接地标记chagas抗原。间接标记的方式包括但不限于通过异硫氰酸荧光素(FITC)与抗FITC抗体体系或链霉亲和素(SA)与生物素(Biotin)体系进行间接标记。直接标记是指示踪标记物直接与chagas抗原连接进行标记；间接标记是指通过中间媒介链接体系使得示踪标记物标记抗chagas抗原，所述中间媒介链接体系包括但不限于FITC与抗FITC抗体体系或SA-Biotin体系，可以自由选用相同或不同的中间媒介链接体系进行间接标记。在这些实施方案中，所述chagas二抗直接或间接地包被磁球。间接包被磁球的方式包括但不限于通过FITC与抗FITC抗体体系或SA-Biotin体系进行间接包被。直接包被是指利用chagas二抗直接对磁球进行包被；间接包被是指通过中间媒介链接体系，使得chagas二抗对磁球进行包被，所述中间媒介链接体系包括但不限于FITC与抗FITC抗体体系或SA-Biotin体系，可以自由选用相同或不同的中间媒介链接体系进行间接包被。根据本专利技术，所述试剂盒还包括组分C预处理液，所述预处理液的成分包括：牛血清白蛋白、新生牛血清、羊血清、鼠血清、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘露醇、丙三醇、酪蛋白、乙二胺四乙酸二钾、TritonX-100、十二烷基硫酸钠、甘氨酸、PEG6000和防腐剂。所述预处理液中各组分的含量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括组分A和组分B，其中组分A为标记有示踪标记物或包被磁球的克氏锥虫抗原，组分B为包被磁球或标记有示踪标记物的克氏锥虫二抗；并且，组分A和组分B中的任意一种标记有示踪标记物，另一种则包被磁球；其中，所述克氏锥虫二抗为抗人IgG抗体。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括组分A和组分B，其中组分A为标记有示踪标记物或包被磁球的克氏锥虫抗原，组分B为包被磁球或标记有示踪标记物的克氏锥虫二抗；并且，组分A和组分B中的任意一种标记有示踪标记物，另一种则包被磁球；其中，所述克氏锥虫二抗为抗人IgG抗体；所述试剂盒还包括组分C预处理液，所述预处理液的成分包括：牛血清白蛋白、新生牛血清、羊血清、鼠血清、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘露醇、丙三醇、酪蛋白、乙二胺四乙酸二钾、TritonX-100、十二烷基硫酸钠、甘氨酸、PEG6000和防腐剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述示踪标记物为金刚烷、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯中的至少一种。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述示踪标记物为N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体，并具有0.1-5μm的粒径；并且，所述磁球任选地通过表面改性而带有一种或多种活性功能基团。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述示踪标记物直接或间接地标记克氏锥虫二抗，并且间接标记的方式包括通过异硫氰酸荧光素与抗异硫氰酸荧光素抗体体系或链霉亲和素与生物素体系进行间接标记；所述克氏锥虫抗原直接或间接地包被磁球，并且间接包被磁球的方式包括通过异硫氰酸荧光素与抗异硫氰酸荧光素抗体体系或链霉亲和素与生物素体系进行间接包被。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理液中各组分的...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶微，刘坤，方中刚，刘晓森，李婷华，
申请(专利权)人：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44