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【技术实现步骤摘要】
本文涉及临床检查技术,尤指一种纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物及其试剂及制备方法。
技术介绍
1、临床检查,特别是血凝检验中,通常需要同时测定d-二聚体和纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物(fibrinogen and fibrin degradation products,fdp)的含量。d-二聚体和fdp是纤溶系统降解产物,其值对与凝血、凝血因子等相关的检验以及诊断具有重要意义。因此,临床上通常需要符合标准的d-二聚体和fdp作为检验及判断的校准品。
2、纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物(fibrinogen and fibrin degradationproducts,fdp),是在纤溶酶的水解作用下,纤维蛋白(原)被降解生成的多种大小不一、结构不同的碎片的总称,包括纤维蛋白原(fg)降解产物(fgdp)和纤维蛋白降解产物(fbdp)。纤维蛋白降解产物(fbdp)是非交联纤维蛋白降解产物和交联纤维蛋白降解产物(包括d-二聚体(d-dimer))的总称。纤维蛋白原降解产物(fgdp)是由纤溶酶降解纤维蛋白原,生成的降解片段的总称。
3、目前,纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物的制备方法通常采用多种酶的混合物,反应条件是人为制造的,与人体内的生理降解过程可能存在差异,且使用商业化的纤溶酶,往往需要加入的酶量较大,原料价格昂贵,而且制备得到的最终产品均需要进行冻干处理。因此,该领域对操作便捷且具有成本效益的高浓度、高稳定性的纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物制备方法存在需求。
技术实现思路
>1、以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。
2、为解决上述现有技术中存在的问题,本专利技术第一方面提供了一种纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物的制备方法,其中,所述制备方法包括以下步骤:
3、在第一血浆中加入纤溶酶原激活物和纤维蛋白进行反应,获得纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物。
4、进一步的,所述纤维蛋白通过将第二血浆在钙离子溶液和生理盐水的条件下完全凝固而获得。
5、进一步的,所述纤维蛋白可以通过商购获得。
6、优选地,所述第一血浆和所述第二血浆的体积比例为1:1-1:10。
7、进一步的,所述血浆是人类血浆或牛血浆。
8、进一步的,所述第一血浆为枸橼酸钠抗凝血浆,优选地,抗凝剂与血浆的体积比例为1:9。
9、进一步的,所述枸橼酸钠的质量浓度为3.2%或3.8%
10、进一步的,所述纤溶酶原激活物为组织型纤溶酶原激活物t-pa,或尿激酶型纤溶酶原激活物u-pa,或其他类型的纤溶酶原激活物;所述组织型纤溶酶原激活物为阿替普酶、西替普酶、瑞替普酶或替奈普酶;所述尿激酶型纤溶酶原激活物为尿激酶;所述其他类型的纤溶酶原激活物为链激酶或葡激酶;
11、优选地,所述纤溶酶原激活物为尿激酶;
12、优选地,所述尿激酶在反应体系中的终浓度为100u/ml-1000u/ml。
13、本专利技术第二方面提供了一种根据上述制备方法获得的纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物。
14、本专利技术第三方面提供了一种试剂,所述试剂是将权利要求6所述的纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物进行稀释获得。
15、所述进行稀释包括使用稀释缓冲液,优选地,所述稀释缓冲液为pbs缓冲液。
16、所述pbs缓冲液包含丝氨酸蛋白酶抑制剂,所述丝氨酸蛋白酶抑制剂选自抑肽酶、aebsf、pmsf和苄脒盐酸盐中的任一种。
17、优选地,所述丝氨酸蛋白酶抑制剂为苄脒盐酸盐。
18、进一步的,所述苄脒盐酸盐在pbs缓冲液中的浓度范围为1mm-20mm。
19、本专利技术第四方面还提供了前述的试剂在临床检查中的应用,其中,所述试剂作为校准品和/或质控品。
20、与相关技术相比,本申请包括以下有益效果:
21、应用本专利技术的技术方案,通过向血浆中添加纤溶酶原激活物,激活纤溶酶,用于同时水解纤维蛋白和血浆中纤维蛋白原,能够提高纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物的产量,降低了生产成本。进一步的,通过稀释母液,并添加丝氨酸蛋白酶抑制剂获得的纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物能够以液态的形式稳定保存。
22、本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述,并且,部分地从说明书中变得显而易见,或者通过实施本申请而了解。本申请的其他优点可通过在说明书以及附图中所描述的方案来实现和获得。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物的制备方法,其中,所述制备方法包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述纤维蛋白通过将第二血浆在钙离子溶液和生理盐水的条件下完全凝固获得;
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其中,所述血浆是人类血浆或牛血浆。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述第一血浆为枸橼酸钠抗凝血浆,优选地,抗凝剂与血浆的体积比例为1:9。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述纤溶酶原激活物为组织型纤溶酶原激活物t-PA,或尿激酶型纤溶酶原激活物u-PA,或其他类型的纤溶酶原激活物;所述组织型纤溶酶原激活物为阿替普酶、西替普酶、瑞替普酶或替奈普酶;所述尿激酶型纤溶酶原激活物为尿激酶;所述其他类型的纤溶酶原激活物为链激酶或葡激酶;
6.一种根据权利要求1至5中任一项所述的制备方法获得的纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物。
7.一种试剂,其中,所述试剂是将权利要求6所述的纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物进行稀释获得。
8.根据权利要求7所述的试剂,其中,所述进行稀释
9.根据权利要求8所述的试剂,其中,所述PBS缓冲液包含丝氨酸蛋白酶抑制剂,所述丝氨酸蛋白酶抑制剂选自抑肽酶、AEBSF、PMSF和苄脒盐酸盐中的任一种;
10.根据权利要求7至9中任一项所述的试剂在临床检查中的应用,其中,所述试剂作为校准品和/或质控品。
...【技术特征摘要】
1.一种纤维蛋白与纤维蛋白原降解产物的制备方法,其中,所述制备方法包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述纤维蛋白通过将第二血浆在钙离子溶液和生理盐水的条件下完全凝固获得;
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其中,所述血浆是人类血浆或牛血浆。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述第一血浆为枸橼酸钠抗凝血浆,优选地,抗凝剂与血浆的体积比例为1:9。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述纤溶酶原激活物为组织型纤溶酶原激活物t-pa,或尿激酶型纤溶酶原激活物u-pa,或其他类型的纤溶酶原激活物;所述组织型纤溶酶原激活物为阿替普酶、西替普酶、瑞替普酶或替奈普酶;所述尿激酶型纤溶酶原...
【专利技术属性】
技术研发人员:李婷华,刘坤,陈华,黎宇田,
申请(专利权)人:深圳市新产业生物医学工程股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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