【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外检测，具体涉及试剂组合以及免离心的全血中目标免疫抑制剂的检测方法。
技术介绍
1、免疫抑制剂是一类具有免疫抑制作用的药物，临床主要用于器官移植的排斥反应和自身免疫反应性疾病。
2、药物通过各种给药途径吸收入血后，通过血液循环到达作用部位或受体部位，血液中的游离药物通过扩散进入细胞外液，或进而扩散到细胞内，与受体相结合，产生药理作用。药物在组织中的分布或在作用部位与受体的结合，是一种可逆的生理生化过程，并且处于动态平衡之中。药物在体内分布平衡时，虽然血液和靶位的药物浓度往往并不相等，但对绝大多数药物，特别是以被动转运方式在体内运输，其血药浓度与靶位药物浓度的比值是恒定的，由于药物效应与血药浓度间存在着相关性，血液中的药物浓度可间接地反映药物在受体部位的浓度，因此，测定血药浓度已普遍为临床接受，并成为治疗药物监测的主要方法。
3、另一方面，为了避免器官移植排斥反应的发生，器官移植受者在移植术后需要终身使用免疫抑制剂，而这些药物治疗范围窄，副作用大。当免疫抑制剂作用增强时，免疫缺陷反应也增强，会削弱患者全身免疫功能，降低患者对感染和肿瘤的抵抗能力，感染和肿瘤的发生率增加。当免疫抑制作用减弱时，不能有效的控制和预防排斥反应，导致移植物失去功能，因此需要医生直接参与器官移植术后的患者药学监护，以便提高器官移植受者的用药依从性、安全性、有效性、合理性及经济性。
4、通常临床上需要用于治疗药物监测的免疫抑制剂主要有环孢霉素(csa)、他克莫司、西罗莫司等。这类药物大多数在血液中以结合态的形
5、由于免疫抑制剂的疏水结构导致其与血液及血细胞中的各种大分子形成相对稳定的复合物。因此，在进行全血检测时，需要使血细胞破碎释放这些稳定的复合物，并通过置换提取出游离的免疫抑制剂。
6、目前通常采用化学发光法检测血液或血细胞中的免疫抑制剂，由于全血会影响后续化学发光法中发光基团的信号测定，传统方式是先将血液溶解、离心，把杂质去除，将免疫抑制剂从血细胞中释放出。然而，离心的过程增加了检验科医生的工作负担，该步骤费时，且需要控制条件来保证离心样品的质量，且通常需要加入有毒性的全血沉淀剂，这也给检验人员来来了安全隐患。
7、例如，已公开的检测免疫抑制剂的方法包括步骤：
8、取全血样本和全血溶解剂、全血沉淀剂(含有硫酸锌的甲醇和乙二醇溶液)按2:1:4比例混合于xsystems离心管中，立即涡旋样品5-10s，再离心4min，取上清液移植至预处理管中，上机检测。该方案中甲醇和乙二醇具有毒性，同时该方法还需要进行离心处理，过程繁琐。
9、因此，亟需开发一种毒性低、安全的试剂组合以及基于该试剂组合的检测免疫抑制剂的方法，采用该试剂组合可以在对全血进行免疫抑制剂检测时，无需离心过程即可满足免疫检测的要求。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种毒性低、安全的试剂组合以及全血中目标免疫抑制剂的检测方法，利用本专利技术方法进行免疫检测，在离心后均能与质谱检测结果保持高度的一致，说明样本中结合态的药物被充分释放，且所得的游离态的药物能够满足免疫检测的要求。
2、为此，本专利技术第一方面提供一种全血处理剂。根据本专利技术的实施方案，所述全血处理剂包括：
3、丁醇以及任选地皂素和/或抗坏血酸。
4、根据本专利技术的实施方案，利用所述全血处理剂对全血进行处理时，所述丁醇的工作浓度为0.1 -1.0％v/v。
5、根据本专利技术的实施方案，利用所述全血处理剂对全血进行处理时，所述皂素的工作浓度为0.3-3％w/v；
6、任选地，所述抗坏血酸的工作浓度为0.5-1.0％w/v。
7、本专利技术第二方面提供一种试剂组合。根据本专利技术的实施方案，所述试剂组合包括第一方面所述的全血处理剂以及缓冲液，
8、所述缓冲液包括选自pbs缓冲液、tris缓冲液、mes缓冲液中的至少之一，且进一步包括吐温-20、曲拉通、亲水性氨基酸中的至少之一。
9、根据本专利技术的实施方案，所述亲水性氨基酸包括选自精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸中的至少之一。
10、根据本专利技术的实施方案，当所述缓冲液中含有曲拉通时，在所述缓冲液中，所述曲拉通的浓度为0.065-0.3％v/v。本专利技术第三方面提供第一方面所述的全血处理剂、第二方面所述的试剂组合在检测全血中目标分子中的用途。
11、根据本专利技术的实施方案，所述目标分子包括免疫抑制剂。
12、根据本专利技术的实施方案，所述免疫抑制剂包括选自环孢霉素、西罗莫司、fk506中的至少之一。
13、本专利技术第四方面提供一种全血中目标分子的检测方法。根据本专利技术的实施方案，所述检测方法包括：
14、(1)利用第一方面所述的全血处理剂对待检测全血进行处理，获得处理后待测样品；
15、(2)基于免疫分析方法，对所述处理后待测样品进行目标分子的检测。
16、根据本专利技术的实施方案，所述目标分子包括免疫抑制剂。
17、根据本专利技术的实施方案，所述免疫抑制剂包括选自环孢霉素、西罗莫司、fk506中的至少之一。
18、根据本专利技术的实施方案，步骤(1)中所述全血与全血处理剂的体积比为(1-50):(1-3)。
19、本专利技术第五方面提供一种全血中目标免疫抑制剂的检测方法。根据本专利技术的实施方案，包括：
20、1)提供信号检测试剂和包被第一抗体的磁性载体，其中，所述信号检测试剂含有与第二抗体相连的信号生成物，所述第一抗体能够特异性识别待测样本中的目标分子并结合形成目标分子-第一抗体复合物，且所述复合物中目标分子诱导第一抗体形成至少一个新的构象表位，所述第二抗体能够特异性结合所述至少一个新的构象表位；2)利用第一方面所述的全血处理剂对待检测全血进行处理，获得处理后待测样品；
21、3)将所述处理后待测样品与所述包被第一抗体的磁性载体接触，以便获得目标免疫抑制剂-第一抗体-磁性载体的复合物；
22、4)将所述目标免疫抑制剂-第一抗体-磁性载体的复合物与所述信号检测试剂接触，以便获得目标免疫抑制剂-第一抗体-磁性载体-第二抗体-信号生成物的复合物；
23、5)利用免疫分析方法，对4)获得的所述目标免疫抑制剂-第一抗体-磁性载体-第二抗体-信号生成物的复合物进行信号检测，以便检测全血中含有的目标免疫抑制剂。
24、根据本专利技术的实施方案，所述第二抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种全血处理剂，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的全血处理剂，其特征在于，利用所述全血处理剂对全血进行处理时，所述丁醇的工作浓度为0.1-1％v/v；
3.一种试剂组合，其特征在于，包括权利要求1或2所述的全血处理剂，以及缓冲液，
4.根据权利要求3所述的试剂组合，其特征在于，所述亲水性氨基酸包括选自精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸中的至少之一。
5.权利要求1或2所述的全血处理剂、权利要求3或4所述的试剂组合在检测全血中目标分子中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述目标分子包括免疫抑制剂；
7.一种全血中目标分子的检测方法，其特征在于，包括：
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述目标分子包括免疫抑制剂；
9.一种全血中目标免疫抑制剂的检测方法，其特征在于，包括：
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述第二抗体的亲和力常数KD值为1×10-10～9×10-9；
11.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述目标免疫抑制剂包括选自环孢霉素、西罗莫司、FK506中的至少之一。
12.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法进一步包括提供缓冲液，所述处理后待测样品与所述包被第一抗体的磁性载体在所述缓冲液中接触；任选地，所述缓冲液包括选自PBS缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液中的至少之一；
13.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述信号生成物包括选自ABEI、吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺、AHEI、ITCI、光泽精中的至少之一。
...【技术特征摘要】
1.一种全血处理剂，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的全血处理剂，其特征在于，利用所述全血处理剂对全血进行处理时，所述丁醇的工作浓度为0.1-1％v/v；
3.一种试剂组合，其特征在于，包括权利要求1或2所述的全血处理剂，以及缓冲液，
4.根据权利要求3所述的试剂组合，其特征在于，所述亲水性氨基酸包括选自精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸中的至少之一。
5.权利要求1或2所述的全血处理剂、权利要求3或4所述的试剂组合在检测全血中目标分子中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述目标分子包括免疫抑制剂；
7.一种全血中目标分子的检测方法，其特征在于，包括：
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：饶捷，李婷华，张云，罗春，郑文迪，徐红，
申请(专利权)人：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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