肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术专利公开了一种肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于试剂盒由试纸卡、比色卡和胶体金定量读数仪组成。试纸卡结构为：在塑料底板(1)一端粘贴上样垫(2)，上样垫的一端紧密压接含有标记抗人肌钙蛋白I（cTnI）特异性抗体的胶体金垫(3)，胶体金垫一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(4)，NC膜上包被有相互分离的检测线T(5)和质控线C（6），T线为和标记抗体配对的cTnI抗体，C线为抗鼠IgG抗体，NC膜的另一端连接吸样垫(7)形成试纸，试纸装入塑料卡内形成试纸卡。检测时用胶体金定量读数仪或比色卡对结果进行定量或半定量判定，具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术是涉及生物应用
，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法制备的肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒。
技术介绍
肌钙蛋白是组成横纹肌细肌丝的结构蛋白，其亚单位1、T和C组成复合物，在肌肉收缩和舒张过程中起着重要调节作用。其中，肌钙蛋白I( CTnI)经大量的研究，已被证实为心肌损伤最特异、最敏感的血清标志物之一。正常人血液中含量一般低于0.3μ g /L,当心肌细胞胞膜完整性因缺血或缺氧等受到破坏时，游离的cTnl可迅速透过细胞膜进入血流。因此，在发病初期，快速、灵敏且准确地测定人血中的cTnl及其变化趋势对于急性心肌梗死的诊断、急性冠状动脉综合征的危险分层、监测各种因素导致的心肌损伤等有着重要的临床意义。目前国内外已有检测肌钙蛋白I的试剂盒上市，主要采用酶联免疫法(ELISA)、化学发光法、金标层析法、生物芯片等，少数公司产品已获FDA注册或CE认证。免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，基本原理如下:利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线，在一定的条件下，T线的强弱和样品中的浓度呈正相关或负相关，从而实现检测。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
技术实现思路
本技术的目的是提供肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒，具有全程定量或半定量检测能力，操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于试剂盒由试纸卡、比色卡和胶体金定量读数仪构成。所述试纸卡结构为:在塑料底板(I) 一端粘贴上样垫(2)，上样垫的一端紧密压接含有标记抗人肌钙蛋白I特异性抗体的胶体金垫(3)，胶体金垫一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(4)，NC膜上包被有相互分离的检测线T (5)和质控线C (6)，检测线为和标记抗体配对的cTnl抗体，质控线为抗鼠IgG抗体，硝酸纤维素膜的另一端连接吸样垫(7)形成试纸，试纸装入塑料卡内形成试纸卡。所述试纸卡的抗体为高敏cTnl配对抗体，分别识别cTnl不同表位，抗体可以为纯化的单克隆抗体或多克隆抗体。所述试纸卡的NC膜为孔径8-12微米的多 孔样结构膜，上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫由吸水滤纸构成。所述比色卡是白色背景上印有系列不同深浅红色线条的纸板，用于对检测结果的对比判定。不同深浅的红色线条共5条，分别对应5、2、1、0.5,0.25ng/ml的cTnl浓度。所述胶体金定量读数仪是一种光学检测系统，用于对检测结果的定量判定，对CTNI的检测范围为0-5ng/ml。所述试纸卡，NC膜抗体的包被过程为:以0.0lM pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)将cTnl抗体配制成0.5 — 2mg/ml的溶液,将抗鼠IgG配制成0.5_2mg/ml的溶液,用喷膜仪在NC膜上部和下部以1-1.5ul/cm的参数进行分别划线，包被C、T线，划线后将NC膜在干燥间，温度20-25°C，湿度小于30%，干燥2-5小时。所述试纸卡，胶体金垫制备过程为:以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30 - 50nm的胶体金溶液，制备完成后取IOOml胶体金液放在烧杯内，用0.2M K2CO3调至PH8.0左右，按IOOml胶体金溶液加入0.5 — 2mg和包被cTnl配对的另一 cTnl抗体，室温搅拌2小时，加入终浓度为1%牛血清白蛋白，1%聚乙二醇20000封闭20min，12000r/m离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至50ml，按Iml溶液铺20cm2的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间，温度20-25°C，湿度小于30%，干燥2-5小时，制成胶体金垫。所述试纸卡的装配过程为:在干燥室内，温度20-25 °C，湿度小于40%，取塑料底板，将已包被的NC膜放置在塑料底板的中部粘贴，将胶体金垫裁切成合适的宽度，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫，搭胶体金垫的1/4粘贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫，搭胶体金垫的1/3粘贴；在NC膜C线一侧搭接吸样垫，搭吸样垫的1/10粘贴；最后用裁剪机将贴好的塑料板切成3 — 5mm宽的试纸条,再装入塑料卡内，形成试剂试纸卡。所述试剂盒，检测方法为:1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放；2)精确吸取10 μ I血清、血浆样本，样本为全血时吸取20ul样本，加入洁净的离心管中，再加入500ul样本稀释液 (生理盐水或PBS)，充分混匀；3)用移液枪吸取IOul稀释后的样本加入到样本孔中，再立即在下部的缓冲液孔中加入100 μ L样本稀释液，15-20分钟内用胶体金定量读数仪或比色卡(半)定量判定结果；4)仪器判定时，设置好仪器相关参数后将试纸卡放入仪器内进行检测，仪器将显示出样品浓度的定量测定结果；5)用比色卡判定结果时，将试纸卡T线的颜色和比色卡上标准线的颜色深浅进行对比，半定量判定样品的浓度区间。本技术的有益效果是:提供一种利用免疫层析胶体金技术制备的肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒，定量检测范围宽，适合血清、血浆和全血样本，并适合临床上单人份检测。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。附图说明:图1是肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒的试纸卡附图符号说明:1:塑料底板；2:上样垫；3:胶体金垫；4:NC膜；5:检测线T ;6:质控线C ;7:吸样垫具体实施方式实施例:肌钙蛋白I快速定量免疫层析检测试剂盒制备及检测I 主要材料1.1 cTnl特异性配对抗体、cTnl标准品:中检所；鼠抗人IgG抗体:美国Arista公司产品；氯金酸=Sigma公司产品；硝酸纤维素(NC)膜:SART0RIUS (德国)，CN140 ;德国赛多利斯公司产品；牛血清白蛋白(BSA)，聚乙二醇PEG20000，水解酪蛋白=Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。1.2临床样本由公司在相关医院获得，共200份，其中血清样本100份，血浆和全血样本各50份，cTnl含量分布区间为0.25-5ng/ml之间的定值血清。1.3金标读数仪:型号:DS/TMYQ_CGR100，杭州弘科生物技术有限公司产品。2 方法2.1 cTnl抗体胶体金标记氯金酸一柠檬酸三钠还原法制备直径为30_40nm的胶体金溶液，制备完成后取三份胶体金，分别用0.2M K2CO3将溶液调到pH7.5、pH8.0和pH8.5。然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每IOOml溶液加入0.5mg、lmg、l.5mg将标记用cTnl抗体缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌2小时，再加入到终浓度为1%的PEG2000和1%的BSA进行封闭20min，标记结束后以12000 r/m离心，弃上清，沉淀按50%原体积复溶至不同配比的胶体金工作液中(PH8.0，含BSA，羊血清，蔗糖和表面活性剂)。然后将标记胶体金溶液按Iml溶液铺20cm2的比例加样于无纺布上，在温度20_25°C，相对湿度在< 30%的干燥间干燥2-5小时，制成胶体金垫。2.2 NC 膜包被用 0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肌钙蛋白I(?cTnI)快速定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于试剂盒由试纸卡、比色卡和胶体金定量读数仪构成，所述比色卡是白色背景上印有系列不同深浅红色线条的纸板，用于对检测结果的对比判定，不同深浅的红色线条共5条，分别对应5、2、1、0.5、0.25ng/ml的cTnI浓度，胶体金定量读数仪是一种光学检测系统，用于对检测结果的定量判定，对cTnI的检测范围为0?5ng/ml。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩一玮，刘围，杨小姣，
申请(专利权)人：济南卓冠生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：