Fab和Fab’分子的分析方法技术

一种测量由Fab-PEG或Fab’-PEG中的Fab或Fab’组分降解所产生的酸性物质的方法，包括步骤：a)用酶从Fab-PEG或Fab’-PEG中将PEG和连接子切割下来，b)任选地将步骤a)中产生的PEG和连接子从Fab或Fab’中分离出来，以提供Fab或Fab’以及c)对与经切割的Fab或Fab’和/或经切割的PEG相关的酸性物质进行定量分析。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种测量聚乙二醇化蛋白中的酸性物质的改进的测定方法。特别地，本专利技术涉及一种测量聚乙二醇化Fab和聚乙二醇化Fab’抗体形式中的酸性物质的改进的测定方法。聚乙二醇化Fab和聚乙二醇化Fab’抗体形式是有用的，因为其提供与全抗体类似的体内循环半衰期，却没有与全抗体相关的效应子功能。这些形式已经开始用于治疗中，并且需要进行长期稳定性测试，以辅助许可这些治疗性产品出售的监管批准过程。此外，一旦被批准在公众中使用，所制造的产品在可供出售之前必须进行批次释放测试。制剂中存在酸性物质，例如在储藏之后，可能表明Fab和Fab’发生了降解(特别是脱酰胺化)。脱酰胺化被监管机构归类为一种降解途径，就此而言为产品设定了脱酰胺化水平的界限。在产品的保质期内不应当超过这些水平。同时不期望受到理论的约束，认为天冬酰胺残基可能通过脱酰胺化经由琥珀酰亚胺基碳酸酯中间体而被降解，从而产生酸性物质，例如异天冬氨酸/天冬氨酸，如方案I中所列出:权利要求1.一种测量由Fab-PEG或Fab’ -PEG的Fab或Fab’组分降解所产生的酸性物质的方法，包括步骤: a)用酶从Fab-PEG或Fab’-PEG中将PEG和连接子切割下来， b)任选地将步骤a)中产生的PEG和连接子从Fab或Fab’中分离出来，以提供Fab或Fab’以及 c)对与经切割的Fab或Fab’和/或经切割的PEG相关的酸性物质进行定量分析。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶或胰凝胶蛋白酶。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤a)中的切割在25至40°C的温度范围下进行，例如37°C。4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中步骤a)中的切割发生于赖氨酸与苏氨酸之间，特别是在Fab或Fab’重链的C末端中。5.根据权利要求4所述的方法，其中赖氨酸和苏氨酸发现于位于Fab’C末端的序列SCDKTHTCAA 中。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述酶切割Fab’的绞链部分，从Fab’中释放出PEG和连接子。7.根据权利要求1至6任一项所述的方法，其中将步骤a)中产生的PEG和连接子从Fab或Fab’中分离出来，以提供Fab或Fab’。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述分离通过使用阳离子交换色谱、cIEF和/或尺寸排阻色谱实现。9.根据权利要求1至8任一项所述的方法，其中通过使用阳离子交换色谱或成像毛细管等电电泳，例如CEX-HPLC，对酸性物质进行定量。10.根据权利要求1至8任一项所述的方法，其中所述Fab’包含或由SEQID N0:10组 成。全文摘要一种测量由Fab-PEG或Fab’-PEG中的Fab或Fab’组分降解所产生的酸性物质的方法，包括步骤a)用酶从Fab-PEG或Fab’-PEG中将PEG和连接子切割下来，b)任选地将步骤a)中产生的PEG和连接子从Fab或Fab’中分离出来，以提供Fab或Fab’以及c)对与经切割的Fab或Fab’和/或经切割的PEG相关的酸性物质进行定量分析。文档编号G01N33/68GK103229058SQ201180036182 公开日2013年7月31日 申请日期2011年7月28日 优先权日2010年7月29日专利技术者B·J·史密斯, H·M·凯尔克 申请人:Ucb医药有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·J·史密斯，H·M·凯尔克，
申请(专利权)人：UCB医药有限公司，
类型：
国别省市：