调控AKT3基因表达的miRNA-382的用途制造技术

本发明专利技术公开了调控AKT3基因表达的miRNA-382的用途。本发明专利技术提供了miRNA-382在制备抑制海洛因复吸药物中用途，及其靶基因AKT3基因在制备海洛因复吸药物的用途，本发明专利技术进行了大鼠体内过表达miRNA-382实验，实验结果表明，过表达miRNA-382能下调靶向基因AKT3表达，有效抑制海洛因复吸行为。本发明专利技术公开了与海洛因复吸行为相关的miRNA-382，为海洛因成瘾提供新的治疗药物靶点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及能调节AKT3基因表达的小分子非编码RNAmiRNA-382的用途。
技术介绍
据统计，2015年全国累计登记吸毒人员295.5万名，其中滥用阿片类毒品人员145.8万名、滥用合成毒品人员145.9万名，分别占49.3％和49.4％。1874年，英国伦敦圣玛莉医院的化学家莱特，在吗啡中加入醋酸酐等物质，首次提炼出镇痛效果更佳的半合成化衍生物，二乙酸吗啡，这就是最早合成的海洛因。海洛因成瘾是指任何原因引起的非医疗目的地滥用海洛因等阿片类药物，滥用个体在难以自制的强迫性反复连续用药过程中，形成了药理学和毒理学的精神依赖性与生理依赖性，一旦中断用药即可出现戒断症状和体征，使滥用个体处于一种阿片药物的慢性中毒状态。海洛因成瘾是一种慢性、复发性脑病，长期成瘾性药物的使用可使神经系统发生可塑性变化，分子和细胞发生适应性变化，这些过程涉及表观遗传学修饰。MicroRNA，即miRNA是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的小分子非编码RNA，其大小长约20～25个核苷酸。成熟的miRNA是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体(RNA-inducedsilencingcomplex，RISC)，通过碱基互补配对的方式识别靶信使RNA，即mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。最近的研究表明，miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。研究表明，miRNA在转录后水平通过诱导mRNA的降解或抑制其翻译从而抑制靶基因的表达，起到调控基因表达的作用。研究发现，miRNA在神经元细胞分化、突触可塑性及药物成瘾过程中发挥了重要的作用；在动物组织和人类组织中均存在有稳定表达的miRNA，且不会被内源性RNA酶降解，从而为成瘾性疾病神经生物学机制研究提供了全新的视角。在我国海洛因吸食者占吸毒人员近50％，对于海洛因成瘾治疗主要将美沙酮口服液作为治疗药物，对海洛因成瘾者进行长期维持治疗，目的是减轻其对海洛因的依赖，而美沙酮本身具有成瘾性，只是相比海洛因成瘾性小，所以目前并没有针对海洛因成瘾的有效药物。因此，本领域迫切需要寻找能够治疗或抑制海洛因成瘾的安全、有效的方法，并与之相配合使用的药物和检测方法。
技术实现思路
为了解决上述海洛因成瘾无有效治疗方式和药物的技术问题，本专利技术公开了调控AKT3基因表达的miRNA-382的用途，所述miRNA-382能特异性、高效性的与靶基因AKT3结合，下调靶基因表达，从而为海洛因复吸成瘾提供一种有效的抑制方法，并基于此提供了miRNA-382和AKT3基因在制备海洛因复吸药物的用途。本专利技术人通过大量科学实验发现大鼠海洛因成瘾和戒断复吸后中脑伏隔核区miRNA-382表达量发生显著变化，并由此推断大鼠海洛因复吸行为与miRNA-382表达量有关，通过科学实验验证miRNA-382过表达可显著抑制大鼠海洛因复吸行为。本专利技术公开了一种调控AKT3基因表达的miRNA-382在制备抑制海洛因复吸药物中的用途，所述miRNA-382核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述AKT3mRNA核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。在本专利技术公开的调控AKT3基因表达的miRNA-382在制备抑制海洛因复吸药物中的用途的一种较佳的实施例中，所述miRNA-382通过调节AKT3的表达量，以抑制海洛因复吸行为。在本专利技术公开的调控AKT3基因表达的miRNA-382在制备抑制海洛因复吸药物中的用途的一种较佳的实施例中，过表达调节所述miRNA-382通过构建含所述miRNA-382目标基因的慢病毒LV-miRNA-382并用所述LV-miRNA-382感染宿主细胞实现。在本专利技术公开的一种调控AKT3基因表达的miRNA-382在制备抑制海洛因复吸药物中的用途的一种较佳的实施例中，所述LV-miRNA-382的过表达慢病毒载体为Ubi-MCS-SV40-EGFP。本专利技术还公开了一种结合miRNA-382的AKT3基因在制备海洛因复吸药物中的用途，所述miRNA-382核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述AKT3mRNA核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。在本专利技术公开的结合miRNA-382的AKT3基因在制备海洛因复吸药物中的用途的一种较佳的实施例中，所述miRNA-382通过调节AKT3的表达量，以抑制海洛因复吸行为。相较于相关技术，本专利技术提供的调控AKT3基因表达的miRNA-382的用途具有以下有益效果：一、成功建立大鼠海洛因自身给药模型，为其他相关成瘾性药物研究提供参考。二、成功验证miRNA-382在海洛因自身给药大鼠伏隔核中的表达变化，并与芯片结果一致，并证明miRNA-382与大鼠海洛因成瘾和复吸相关，为后续研究提供依据。三、通过构建LV-miRNA-382慢病毒表达载体可升高miRNA-382在伏隔核表达，干预AKT3mRNA表达，抑制海洛因成瘾戒断后线索诱导的复吸。四、通过包装慢病毒LV-siRNA-AKT3验证AKT3蛋白表达与海洛因复吸相关。五、miRNA-382可用于作为针对海洛因成瘾治疗和抗复吸的基因药物，干预AKT3表达可作为潜在治疗海洛因复吸的药物靶标，有望弥补现有无治疗海洛因成瘾和复吸的基因药物空白。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：图1为大鼠海洛因成瘾模型建立折线图；图2(a)为戒断后线索诱导海洛因复吸大鼠的伏隔核差异表达miRNA的聚类图；图2(b)为图2(a)的部分放大图；图3为大鼠海洛因成瘾戒断线索诱导后miRNA-382的RT-PCR表达量柱状图；图4(a)为LV-miRNA-382表达载体Ubi-MCS-SV40-EGFP图谱；图4(b)为LV-siRNA-AKT3表达载体U6-MCS-Ubi-EGFP图谱；图5为LV-miRNA-382转染脑区位置图，图5中(a)为4倍显微镜图，图5中(b)为10倍显微镜图，图5中(c)为20倍显微镜图；图6为海洛因成瘾模型大鼠伏隔核注射LV-miRNA-382后复吸行为测试柱状图；图7为海洛因成瘾模型大鼠伏隔核本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种调控AKT3基因表达的miRNA‑382在制备抑制海洛因复吸药物中的用途，所述miRNA‑382的靶基因为AKT3，其中所述miRNA‑382核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述AKT3mRNA核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种调控AKT3基因表达的miRNA-382在制备抑制海洛因复吸药物中的用途，所述
miRNA-382的靶基因为AKT3，其中所述miRNA-382核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述
AKT3mRNA核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述miRNA-382通过调节AKT3的表达量，以
抑制海洛因复吸行为。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，过表达调节所述miRNA-382通过构建含所
述miRNA-382目标基因的慢病毒LV-miRNA-...

【专利技术属性】
技术研发人员：周文华，刘惠芬，马宏，陈为升，朱华强，赖苗军，庄丁丁，
申请(专利权)人：宁波市微循环与莨菪类药研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33