一种在大肠杆菌中分泌表达重组人粒细胞集落因子的方法技术

本发明专利技术涉及一种在大肠杆菌分泌型表达重组人粒细胞集落因子（ｒＨＧ－ＣＳＦ），该载体通过在外源蛋白的Ｎ端添加ＤｓｂＡ信号肽（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１），并使用λＰ↓［Ｌ］启动子，可构建一种周质腔分泌型表达重组蛋白的载体，转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞，通过温度诱导实现外源蛋白在大肠杆菌周质腔中表达。该方法表达量高、分泌效率高，适用于高效稳定地分泌表达多种外源基因。

Method for secreting recombinant human granulocyte colony factor in Escherichia coli

The invention relates to a secretory type in Escherichia coli expressing recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rHG CSF), the vector by adding DsbA signal peptide in heterologous protein N terminal (SEQ ID NO:1), and the use of lambda P down L promoter can construct a periplasmic secretion type expression the recombinant protein vector and transformed into Escherichia coli DH5 alpha competent cells, induced the expression of exogenous proteins in Escherichia coli periplasm by temperature. The method has high expression and high secretion efficiency, and is suitable for efficiently and stably secreting and expressing a plurality of foreign genes.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种大肠杆菌周质腔分泌型表达重组人粒细胞集落因子(G-CSF)方法，更 具体地，涉及一种通过在G-CSF的N端添加DsbA信号肽(MKKIWLALAGLVLAFSASA (SEQ IDNO:l))，并使外源蛋白在大肠杆菌周质腔中表达的新型表达载体；这种表达载体的说明及应用。
技术介绍
基因工程重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)，主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减 少症.此外还用于自身骨髓移植、某些类型的白血病、艾滋病的白细胞减少和再生障碍性贫 血等，均显示具有显著的疗效。目前大多通过大肠杆菌表达，表达量虽高，但形成包涵体， 需经过变性复性才能得到活性蛋白，收率很低，N端甲硫氨酸不能去除。采用原核表达体系(主要是大肠杆菌表达体系)具有许多独特的优点。比如遗传背景清 楚、细胞生长迅速、发酵周期短、易于筛选和基因重组操作、表达系统较为丰富等。但是原 核表达体系也存在一些缺点如外源蛋白无法糖基化和易于形成包涵体等。外源蛋白形成的 包涵体必须经过变性、再折叠复性，才能得到活性蛋白产物。上述过程操作烦琐、复性效率 低，对于不同的外源蛋白需要分别进行优化。因此，如果能够采用原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种周质腔分泌型表达表达重组人粒细胞集落此刺激因子的方法，其结构如图１所示。其特征在于蛋白基因的Ｎ端含有信号肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：梁果义，王俊玲，刘迎，连治国，杨仲璠，张鹏，吴彦卓，徐明波，
申请(专利权)人：北京双鹭药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]