一种内切β-1,3-葡聚糖酶编码基因及其酶和制备方法与应用技术

技术编号:15514986 阅读:261 留言:0更新日期:2017-06-04 06:35
本发明专利技术公开了一种来源于纤维化纤维微细菌(Cellulosimicrobium cellulans)的内切β-1,3-葡聚糖酶编码基因及其酶和制备方法与应用,即利用基因工程的技术方法,将该内切β-1,3-葡聚糖酶的基因克隆到大肠杆菌表达载体上,获得可异源表达该酶的大肠杆菌重组菌株,用该菌株异源表达制备的内切β-1,3-葡聚糖酶,能直接高效降解固体Curdlan(可德兰多糖)。本发明专利技术还提供了一种防治动植物病害的生防菌剂——内切β-1,3-葡聚糖酶,属于生物防治领域,有望成为一种新型的生物农药。本发明专利技术提供的内切β-1,3-葡聚糖酶可广泛应用于农业、食品、饲料添加剂、医药及葡寡糖制备等领域。

【技术实现步骤摘要】
一种内切β-1,3-葡聚糖酶编码基因及其酶和制备方法与应用
本专利技术涉及一种内切β-1,3-葡聚糖酶的基因序列及其制备方法和应用。本专利技术提供了该内切β-1,3-葡聚糖酶的重组质粒和重组基因工程菌株及其在多糖降解和动植物病害防治方面的应用。本专利技术提供的内切β-1,3-葡聚糖酶可广泛应用于农业、食品、饲料添加、医药及寡糖制备等领域。
技术介绍
β-1,3-葡寡糖在营养与保健、疾病诊断与防治、畜牧养殖、植物生长调节及诱导植物抗性等方面有着巨大的应用潜力,功能性寡糖的开发利用也已应用于食品、医药、饲料和农业等各个领域。相对于其它β-葡聚糖,如昆布多糖、酵母多糖等,可德兰多糖生成和提取的成本更低,以可德兰多糖为原料制备β-葡寡糖具有更大的经济价值。可德兰多糖,是迄今为止世界上发现的唯一一种不含分支的β-1,3-葡聚糖,为水不溶性葡聚糖,其分子式可表示为(C6H10O5)n,CAS号为54724-00-4,是葡糖糖残基通过β-(1-3)糖苷键连接而成的线性分子,平均聚合度约为450,分子量在44000-77000。可德兰多糖是一种白色轻质粉末,对光、热、空气均稳定,可常温长期保存而不改本文档来自技高网...
一种内切β-1,3-葡聚糖酶编码基因及其酶和制备方法与应用

【技术保护点】
一种内切β‑1,3‑葡聚糖酶编码基因,其核苷酸序列具有如下特征中的一种或二种以上:1)具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列;2)编码SEQ ID NO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列;3)对序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列进行一个或两个以上核苷酸取代、缺失或添加而得到的编码具有内切β‑1,3‑葡聚糖酶活性的核苷酸序列;4)与SEQ ID NO.1限定的脱氧核糖核酸(DNA)序列的同源性达到80%及以上,且能编码降解葡聚糖的蛋白质的脱氧核糖核酸(DNA)序列。

【技术特征摘要】
1.一种内切β-1,3-葡聚糖酶编码基因,其核苷酸序列具有如下特征中的一种或二种以上:1)具有序列表中SEQIDNO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列;2)编码SEQIDNO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列;3)对序列表中SEQIDNO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列进行一个或两个以上核苷酸取代、缺失或添加而得到的编码具有内切β-1,3-葡聚糖酶活性的核苷酸序列;4)与SEQIDNO.1限定的脱氧核糖核酸(DNA)序列的同源性达到80%及以上,且能编码降解葡聚糖的蛋白质的脱氧核糖核酸(DNA)序列。2.一种权利要求1所述的内切β-1,3-葡聚糖酶基因编码的内切β-1,3-葡聚糖酶,其特征在于:其氨基酸序列具有如下特征中的一种或二种:1)序列表中SEQIDNO.2从氨基端开始的第21-406位氨基酸残基序列;2)对序列表中SEQIDNO.2所示的氨基酸序列进行一个或两个以上氨基酸取代、缺失或添加而形成的具有内切β-1,3-葡聚糖酶活性的氨基酸序列。3.一种权利要求2所述的内切β-1,3-葡聚糖酶的制备方法,其特征在于:将内切β-1,3-葡聚糖酶基因克隆入重组表达载体,导入宿主细胞,获得重组表达的内切β-1,3-葡聚糖酶;上述内切β-1,3-葡聚糖酶基因,其核苷酸序列具有如下特征中的一种或二种以上:1)具有序列表中SEQIDNO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列;2)编码SEQIDNO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列;3)对序列表中SEQIDNO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列进行一个或两个以上核苷酸取代、缺失或添加而得到的编码具有内切β-1,3-葡聚糖酶活性的核苷酸序列;4)所述的重组表达内切β-1,3-葡聚糖酶的表达载体,是指大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体、或哺乳动物细胞表达载体中的一种或二种以上。4.按照权利要求3所述的方法,其特征在于:所述宿主细胞,即用于重组表达内切β-1,3-葡聚糖酶的重组菌...

【专利技术属性】
技术研发人员:尹恒李悝悝王文霞谭海东张鑫
申请(专利权)人:中国科学院大连化学物理研究所
类型:发明
国别省市:辽宁,21

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