【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种表达嗜热内切葡聚糖酶的重组毕赤酵母的构建方法,其特征在于包括以下步骤:1)以携带有嗜热葡聚糖酶基因的质粒pET21a(Amp+)‑ ph1171‑sgc‑mut‑sd为模板,进行PCR扩增,引物:5’1171SD‑XhoI‑F 5’‑CACTACCTCGAGAAAAGAATGGAAAATACAACATATCAA‑3’3’1171SD‑NotI‑R 5’‑TGGGATGCATGCGGCCGCTCAAGAACTTTTGGAACAA‑3’在嗜热内切‑β‑1,4‑葡聚糖酶基因两端分别引入Xho I和Not I两个酶切位点,使用Tli DNA聚合酶扩增得到大小为1168 bp的嗜热内切‑β‑1,4‑葡聚糖酶基因;2)将上述通过PCR扩增得到的嗜热内切‑β‑1,4‑葡聚糖酶基因及质粒pPICZα‑A经Xho I和Not I双酶切回收后,再经T4 DNA连接酶连接,插入到pPICZα‑A的多克隆位点,转化大肠杆菌DH5α,在ZeocinTM LB平板上筛选阳性转化子并测序;3)将测序正确的阳性克隆培养,大量提取质粒后,采用Sac I线性化并使用乙醇沉淀线性化产物,用于毕赤酵母转导;4)重 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:田方,柳晓瑜,郑春阳,
申请(专利权)人:天津强微特生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:天津;12
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