蔓越莓木葡聚糖低聚糖组合物制造技术

一种由蔓越莓花萼经酶处理的组合物制备的组合物，其能减少或抑制微生物与具有用于粘附的α-Gal-(1-4)-Gal末端低聚糖受体的细胞的粘附。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蔓越莓木葡聚糖低聚糖组合物
本专利技术提供一种新的木葡聚糖低聚糖组合物，该组合物被命名为抗微生物粘附抑制性级分A6，一种含有所述包含抗微生物粘附抑制性级分A6的低聚糖组合物的组合物，和使用所述组合物至少减少病原体粘附对动物细胞，特别是人和哺乳动物细胞粘附的方法。
技术介绍
木葡聚糖是公知的在双子叶植物和非鸭跖草科单子叶植物中发现的Ⅰ型植物细胞壁中的主要交联多糖(Carpita和Gibeaut,PlantJournal,Volume3,1-30,1993)。带一个β-(1-4)-葡聚糖骨架，木葡聚糖氢键结合到纤维素微纤维表面并且形成连接细胞壁中相邻微纤维的网络。该木葡聚糖网络与细胞壁基质多糖的胶质网络相互交错(Carpita和Gibeaut,1993，见前)。这使得木葡聚糖成为初生细胞壁生长和形成中的重要多糖(Carpita和McCann,BiochemistryandMolecularBiologyofPlants,BuchananB.B.,Gruissem,W.,Jones,R.L.,Eds.；AmericanSocietyofPlantPhysiologists,Rockville,MD.,52-108,2000)。木葡聚糖中存在似块状结构，其中6-11糖序列在整个多糖中重复。因此，碳水化合物结构对植物分类群是特异性的(Sims等,CarbohydrateResearch,Volume293,147-172,1996；Vierhuis等,CarbohydrateResearch,Volume332,285-297,2001；Ray等,CarbohydrateResearch,Volume339,201-208,2004；Hoffman等,CarbohydrateResearch,Volume340,1826-1840,2005)。3种木葡聚糖结构已被描述具有岩藻半乳-木葡聚糖，岩藻糖半乳糖-木葡聚糖最常分布在单子叶植物分类学的目中约一半，和所有除茄目、唇形目、龙胆目、杜鹃花目外的双子叶植物目的植物中(Carpita和McCann2000,见前；Hoffman等2005,见前)。来自这些后一目的木葡聚糖含有阿拉伯糖基-木葡聚糖结构。少量的第三种木葡聚糖结构同样在鸭跖草科单子叶植物中(禾本科植物草,凤梨科植物，棕榈,和柏树)作为在纤维素骨架上随机分布的单一木糖取代基存在(Carpita和McCann,2000,见前)。单一字母命名被开发用于描述木葡聚糖取代基的顺序(Fry等,Physiol.Plant.,Volume89,1-3,1993)。蔓越莓汁是酸性的(pH约2.6或更低)，富含花青素和赋予它涩味的丹宁酸(Holmes和Starr,FruitJuiceProcessingTechnology,Nagy,S.,Chen,C.S.,Shaw,P.E.(Eds.),AGSCIENCE,Auburndale,FL,515-531,1993)。果汁是在用热的市售果胶酶浸软(约50℃作用约1小时)浆果后经研磨和压榨而制备的。蔓越莓胶质具有非常高的甲氧基含量，在压榨后和果汁过滤和浓缩前需要二次的热的市售果胶酶处理。蔓越莓汁被认为是一种健康的果汁。原花色素具有抗氧化特性(Uri-Sarda等,Anal.Bioanal.Chem,Volume394,1545-1556,2009)，并且被报道能抑制P-伞状大肠杆菌与尿路上皮细胞的粘附(Howell等,Phytochem.,Volume66,2281-2291,2005)。P-伞状大肠杆菌是引发尿路感染的主要原因，其造成每年830万的医院就次数(Zopf和Roth,Lancet,Volume347,1017-1021,1996)。蔓越莓汁也被报道具有益生特性(Clifford等,美国专利申请号20090022849,2009)。最近，Coleman等(于07/13/2010提交AmericanSocietyofPharmaconosy,St.PetersburgBeach,FL的报告)用蔓越莓汁粉喂猪并从尿中分离出低聚糖或氨基糖，其能够抑制由尿路致病性大肠杆菌引发的红细胞凝集。相同的α-Gal-(1-4)-β-Gal受体是红细胞凝集和P-伞状大肠杆菌与尿路上皮细胞粘附所必须的(Howell等2005,见前)。因此，非源自原花色素的碳水化合物，被报道具有细菌抗粘附特性(Coleman等2010,见前)。果胶的低聚糖抑制大肠杆菌的产维罗毒素菌株和肠道致病菌株与HT29细胞的粘附(Rhoades等J.FoodProtect.,卷71,2272-2277,2008)。所以，植物细胞壁低聚糖优先地具有细菌抗粘附特性。然而，蔓越莓植物细胞壁低聚糖的结构仍然未知，且Coleman等(2010,见前)并未报道低聚糖如何在尿排泄前被胃肠道吸收。对中和和/或从宿主机体，如人和家畜，去除细菌和细菌成分的现有治疗方案很大程度上基于抗生素的使用。自20世纪40年代引入抗生素药以来，抗生素药被证明对许多细菌相关疾病是有效的。然而，它们时常被滥用已导致抗生素耐药性细菌菌株的产生，这需要开发和使用越来越更强效的药物。医院内的细菌感染在不断增加，导致严重病患的病例激增，在某些情况下，甚至出现危急性命的症状。例如，尿路感染(UTI)是一个普遍的卫生保健问题。UTI通常定义为尿中出现>100,000细胞/毫升的细菌。UTI普遍地由革兰氏阴性细菌，特别是大肠杆菌(E.coli)引起，并主要感染女性。这种感染是由细菌与尿道上皮细胞粘附并定植所致。大肠杆菌的粘附是通过细菌细胞壁上的蛋白质性纤维(菌毛)进行的，蛋白质性纤维能够附着在尿路上皮细胞上特异性的低聚糖受体。抗生素是常规开处方用于治疗，但常常提高细菌的耐药性。四分之一的女性也出现感染复发且经常被发现更易于这些感染。能治疗和预防UTI的自然物质可被用于那些在许多情况下因抗生素治疗而导致患有这种病况的患者，如需要后续抗真菌治疗的继发性阴道酵母感染。已有大量文献报道蔓越莓植物营养素在预防和减轻尿路感染(UTI)中的作用，特别是革兰氏阴性尿路致病性细菌大肠杆菌，是UTI的最常见病因(Lavigne等,ClinicalMicrobiologyandInfection,Volume14,350-355,2008；Ofeck等,AdvancesinExperimentalMedicineandBiology,Volume408,179-183,1996；Ofeck等,NewEnglandJournalofMedicine,Volume324,1599,1991)。已发现食用蔓越莓在解决UTI感染有一定的效果。蔓越莓产品能防止某些细菌菌毛与尿道的尿道上皮细胞的粘附，由此减少细菌产生感染的能力(DiMartino等,WorldJournalofUrology,2006)；(Liu等,BiotechnologyBioengineering,2006)。在蔓越莓汁中发现的原花色素，其是浓缩的丹宁酸，被证实抑制大肠杆菌粘附(Howell等,JournalofMedicine,1998)。于2009年公布的美国专利申请2009/0226548，指出一些本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗微生物粘附的组合物，包含有效量的分离自蔓越莓的抗微生物的粘附抑制性级分A6作为活性成分，其中所述分离的级分含有乙酰化、富含中性糖的多糖，所述多糖的重均摩尔质量为约10.2×103±2.0Da，Z平均流体力学半径为约2.0±0.2nm，重量–平均特征粘度为约0.048±0.0001dL/g，且具有对尿路致病性菌和产维罗毒素菌有粘附抑制活性，其中所述有效量至少降低细菌与具有用于粘附的α‑Gal‑(1‑4)‑Gal末端低聚糖受体的细胞的粘附。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.25 US 13/480,9031.一种抗微生物粘附的组合物，包含有效量的分离自蔓越莓的抗微生物的粘附抑制性级分A6作为活性成分，其中所述分离的级分含有乙酰化、富含中性糖的多糖，所述多糖的重均摩尔质量为10.2×103±2.0Da，Z平均流体力学半径为2.0±0.2nm，重量–平均特征粘度为0.048±0.0001dL/g，所述组合物通过包括以下步骤的方法制备：(a)提供蔓越莓花萼，(b)用足量的与Klerzyme150果胶酶的家族等效的果胶酶处理所述蔓越莓花萼，从而使所述花萼脱果胶以形成酶处理的组合物，(c)使用倾析或离心的方法从所述酶处理的组合物中去除碎片，以形成第一液体，(d)对所述第一液体进行喷雾干燥以形成组合物A1，(e)用去离子水溶解所述组合物A1并将其加样至来自BiotageFLASH-40色谱系统的柱中，该系统改为接收装有SNAPKP-C18-HS12g样品的...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿兰·T·霍奇斯基，阿尔伯托·努涅斯，克里斯蒂娜·邱，加里·D·斯特拉恩，
申请(专利权)人：美利坚合众国由农业部长代表，优鲜沛蔓越莓公司，
类型：发明
国别省市：美国;US