乳糖代替IPTG诱导重组鸡α干扰素在大肠杆菌中的表达制造技术

本发明专利技术公开一种乳糖代替IPTG作为诱导剂诱导pET28a载体生产重组鸡α干扰素的方法。对乳糖诱导的时机、乳糖浓度、诱导持续时间条件进行研究，确定了乳糖诱导的最佳条件。结果表明，乳糖能有效地诱导重组α干扰素表达的表达，并且目的蛋白的表达量高于IPTG的诱导量。生产成本降低10%左右，菌体量提高20%，同时乳糖不会对环境造成污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程药物制备领域，更具体地，本专利技术涉及一种利用乳糖代替IPTG生产重组鸡α干扰素的方法。
技术介绍
干扰素(interfeixm，IFN)是一类重要的细胞因子，具有广谱的抗病毒、抗细胞增殖、免疫调节等多种生物活性。动物机体受到病毒感染后干扰素从细胞内释放出来，可保护与其接触的其他细胞不受感染。由于天然干扰素在生物体内含量少且不易提取，在应用中受到限制。20世纪70年代起，科学家开始探索利用基因工程的方法来改造干扰素及其表达系统，取得了很大进步。在我国，禽类干扰素的研究起步比较晚。目前，市售的干扰素价格高昂，与动物价格低廉存在着尖锐的矛盾，无法在兽医临床上广泛应用。利用基因工程技术选择一个合适的系统，使其得到高效表达，生产具有廉价、广谱抗病毒活性、无毒害、无残留等优点的干扰素无疑是促使干扰素在兽医临床上推广应用的有效途径。目前工业生产中大多使用大肠杆菌作为工程菌来生产目的蛋白。大肠杆菌作为工程菌表达目的蛋白主要有两个优势一是大肠杆菌具有遗传背景清楚，易于控制基因的表达；二是大肠杆菌容易培养，可以获得较高产量的目的蛋白。乳糖(Lac)操纵子是研究的最为详尽的大肠杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乳糖代替IPTG诱导重组鸡α干扰素在大肠杆菌中的表达，其特征在于包括如下步骤：（1）种子培养方法：从?70℃冰箱中取出含鸡α干扰素重组质粒的甘油保藏管1支，于冰水浴中解冻，混匀后以1%接种量转接到50mlLB培养基中，在37℃的恒温摇床中振荡培养12h，转速为200r/min;（2）发酵和诱导：将经活化的种子液按1%的接种量接种于2L培养基中，37℃恒温摇床中振荡培养，转速为200r/min,当菌体浓度达到一定OD值时，添加诱导剂乳糖,分别调整诱导剂浓度、诱导时机、诱导培养时间因素进行发酵培养，以诱导后目的蛋白的浓度作为依据，确定最佳诱导方案。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马仲彬，徐公豹，李炳志，李秋霞，申艳敏，王兴涛，王新娟，
申请(专利权)人：河南省康星药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：