一种融合蛋白包涵体的制备方法技术

技术编号:8484909 阅读:213 留言:0更新日期:2013-03-28 04:18
本发明专利技术提供一种融合蛋白包涵体的制备方法,包括以下几个步骤:工程菌破碎步骤、包涵体的洗涤步骤、包涵体变性溶解和过滤步骤。本发明专利技术的有益效果是:制备得到的包涵体变性溶解液的澄清度显著增加,滤器过滤容量亦明显增加。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及,尤其涉及一种适合工业化且低成本的Mtb72f融合蛋白包涵体的制备方法
技术介绍
目前来说,高效表达质粒构建的大肠杆菌工程菌在大量合成异源蛋白质时,一般情况下以包涵体的形式存在于细菌内。包涵体由高度聚集的外源蛋白质、核酸及蛋白质合成酶及核糖体组成。其中大部分(50%以上)是克隆外源基因的表达产物,它们具有工程菌 表达的外源基因的正确的氨基酸序列,但空间构象往往是错误的,因而没有生物活性。由于包涵体位于细菌细胞内且没有生物活性,需经细胞裂解后经提取洗涤后变性复性及纯化步骤方能得到有活性的蛋白质。
技术实现思路
为了解决以上技术问题,本专利技术提供了,包括以下几个步骤工程菌破碎步骤、包涵体的洗涤步骤、包涵体变性溶解和过滤步骤。优选的,所述工程菌破碎步骤包括以下几个步骤I)取Mtb72f工程菌菌株接种于发酵罐中按流加补料的方式进行高密度发酵,当发酵液0D65tol=50时加入IPTG于37°C进行诱导,诱导5小时后收获菌体。按每IOOg菌体配IL的比例取一定量的菌体添加入预冷的裂解缓冲液(pH=7.0,IOmM bis-tris丙烷)中,得到菌体复溶液。将菌体复溶液用高速均质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种融合蛋白包涵体的制备方法,其特征在于,包括以下几个步骤:工程菌破碎步骤、包涵体的洗涤步骤、包涵体变性溶解和过滤步骤。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:丘力功韦剑魏荣华黄明
申请(专利权)人:广州白云山拜迪生物医药有限公司
类型:发明
国别省市:

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