一种用固定化酶生产糖基化葛根素的方法技术

本发明专利技术涉及一种用固定化酶生产糖基化葛根素的方法，步骤如下：1）粗酶的制备：将菌体经高压破碎，离心得粗酶液；2）固定化酶的制备：将粗酶与预处理的纤维素于磷酸缓冲液中反应，使酶固定在纤维素表面，酶的量为2-15mg酶/g湿重纤维素；3）糖基化葛根素的制备：在搅拌条件下，将溶于反应介质中的葛根素与固定化酶进行转化反应，反应体系的ph为3.0-8.0，温度5-50℃，时间1-24小时；4）糖基化葛根素的纯化：将转化液经双柱串联层析分离，旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥，制得糖基化葛根素；反应结束后，过滤回收固定化酶。本发明专利技术的优点为：成本低，转化副产物少，固定化酶可重复利用，适应于规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及糖基化葛根素的制备，具体地说是。
技术介绍
葛根素(puerarin),8-C- β -D-葡萄糖基-7，4' 二轻基-异黄酮(8-C- β -D-Glucopyranosyl-7, 4' -hydroxy-1soflavone)。葛根素毒性小、安全范围广、疗效好，具有广泛的 药理作用，临床上主要应用于心脑血管系统疾病、糖尿病、眼底疾病、突发性耳聋、急性酒精中毒、拟菊酯类农药中毒及肿瘤的治疗。但是临床使用中葛根素存在如下缺点(1)体内消除速率快，临床使用剂量较大，口服生物利用度低；(2)葛根素水溶解度低，仅为6. 24g/L，因此临床使用的注射剂中需加入助溶剂，以提高溶解度。因此对葛根素进行修饰改造，改善其水溶性和脂溶性，提高其生物利用度及选择性，最终增强其药理活性，是一种行之有效的开发新药途径，也是当前葛根素研究的热点。研究表明，氧化微杆菌(Microbacterium oxydans CGMCC 1788)通过静息细胞转化或细胞粗酶提取液转化，可以将葛根素转化为葛根素-7-0-葡萄糖苷。与葛根素相比，葛根素-7-0-葡萄糖苷水溶解度提高18倍，有较长的半衰期及平均本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用固定化酶生产糖基化葛根素的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）粗酶液的制备将氧化微杆菌（Microbacterium?oxydans?）CGMCC?1788培养至OD600?1.0—3.0，离心收集菌体，加预冷pH8.0的磷酸缓冲液重悬，破碎两次，离心得粗酶液；?（2）固定化酶的制备称取一定量纤维素，预处理后与粗酶液于磷酸缓冲液中进行反应，使酶固定在纤维素表面，制备得到固定化酶;（3）糖基化葛根素的制备在搅拌条件下，将葛根素溶于缓冲液中，与步骤（2）制备的固定化酶进行转化反应，反应体系的pH为3.0?8.0，温度5?50℃，时间1?24小时，即制得含糖基化葛根素的转化液；（4）糖基化葛根...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘贵友，袁生，孙磊，封建树，黄国栋，崔沂，陆舟，沈娇娇，武秀秀，
申请(专利权)人：南京师范大学，江苏教育学院，
类型：发明
国别省市：