本发明专利技术公开了一种微生物发酵生产阿维拉霉素的方法，包括以下步骤：制备,产绿链霉菌的带孢子斜面，将斜面孢子接种子瓶培养得到种子液，种子液在液氮下保存；将冻存种子液接种到种子培养基中进行种子培养得到种子液；按5wt%的接种量将种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；发酵后的发酵液进一步处理得到阿维拉霉素的晶体。本方法简单易行，省去了繁琐的制种过程，减少了菌种衰退，降低了染菌风险；接种量容易控制，重复性好，发酵结果稳定，生产成本低。发酵结果比传统工艺有所提高，阿维拉霉素产量可以达到6500μg/ml以上。?
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于工业生物技术，发酵工程领域。
技术介绍
阿维拉霉素又称卑霉素、阿美拉霉素，是一种新型消化促进剂或代谢调节剂，是由产绿链霉菌(Sir<9/7 ο焊Ce1S viridocbromogene)发酵产生的Orthosomycin (寡糖类)抗生素二氯异扁枝衣酸酯，通过与细菌核糖体结合来抑制蛋白质的合成，是一种特殊的蛋白质合成抑制剂。阿维拉霉素为中性，呈无色针状结晶，熔点为181 182°C，微溶于水，易溶于丙酮、丙醇、乙酸乙酯、苯和乙醚等有机溶剂中。阿维拉霉素约有A、A,、B、C、D1、D2、E、F、G、H、I、J、K等十多个组分，其中A组分活性最高。 阿维拉霉素主要抑制革兰阳性菌，对革兰阴性菌效果较差，具有稳定而良好的促生长和预防动物疾病的双重效果，安全性高、残留极低、无交叉耐药性、对环境无影响等优点，能够提高猪和肉鸡的平均日增重。众多的国家和地区如拉丁美洲、亚洲和欧洲均允许将阿维拉霉素作为一种抗菌促生长剂添加于猪鸡饲料中。目前，阿维拉霉素主要采用传统的斜面培养，接种环挖块接种摇瓶，摇瓶再接种子罐工艺，制种工艺繁琐，菌种容易退化，发酵结果不稳定，稳定性差。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，通过对传统工艺改进，优化制种工艺，用液氮保存种子液，可以大量的保存一株高产菌种，省去了不断制种过程，节约了成本，而且发酵稳定性高，生产成本低，使阿维拉霉素产量高，效价可达到6500μ g/ml以上,且30天后效价保持更稳定,效价活力较优。，技术方案如下 (O制备斜面孢子 将在北京北纳创联生物技术研究院购买的MCCC1A01659-产绿色链霉菌，菌株保藏编号为1A01659，接种到斜面培养基中，进行斜面培养得到斜面孢子，斜面表面充满灰白色至微灰色孢子； (2)制备冻存种子液 a、将上述斜面孢子接种到IOOml种子培养基中，接种量为O.2-0. 8 X IO7个孢子，培养温度28°C，培养时间24-36h，得到种子液，种子液中固形物占种子液总量的20-30%V/V ； b、在上述得到的种子液中加入等体积质量分数为40%的甘油水溶液，混匀制成甘油种子液，分装在冻存管中在液氣中保存、待用； (3)种子培养将冻存种子液按O.02%V/V接到种子培养基中，培养得到种子液，种子液中固形物占种子液总量的20-30%V/V ； (4)发酵培养按5%的接种量将种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养。发酵完毕，将发酵液过滤，菌丝体用甲醇浸提，浸提液浓缩后结晶得到阿维拉晶体。其中，斜面培养基的培养条件及成分为g/L :玉米淀粉20.0，KNO3 I. O，K2HPO4O. 5，CaCl2 2. O,琼脂30. O,培养基pH7. 0-7. 2 ;培养温度28°C，培养周期6_8天。其中，种子培养基的培养条件及成分为g/L :黄豆饼粉15. 0，酵母粉25. 0，葡萄糖5. 0，糊精 20. O, CaCl22. O, CaCO3L O, ρΗ7· 0-7. 2 ;培养温度 28°C，通气量 1:1-1:1, lvvm,转速 150-200rpm，培养时间 24_36h。其中，发酵培养基的培养条件及成分为g/L:玉米淀粉40.0g/l，葡萄糖20.0g/l，黄豆饼粉 10. O g/1, CaCl2 2.0 g/1, CaCO3 4.0 g/1, NaCl 1.0 g/1，ρΗ7· 2_7· 4 ;培养温度27. 5-28. 5°C，通气比 1:0. 5-1:1. lvvm，罐压 O. 05-0. lOMPa，转速80_150rpm培养200_240h。MCCC1A01659-产绿色链霉菌的信息来自于http://www. mum800. com/p_32/p_36632. html。 具体信息如下 菌株保藏编号* (2) 1A01659 中文名称(3)产绿色链霉菌 属名 * (4) Streptomyces 种名加词(5) viridochromogenes 原产国(10)中国 模式菌株*(12)非模式菌株 主要用途*(13)分类，研究 生物危害程度*(16) 不清楚 培养基编号* (23) 0012 培养温度* (24) 28 0C 机构名称* (28) 中国海洋微生物菌种保藏管理中心 机构名称缩写(29) MCCC 隶属单位名称* (30)国家海洋局第三海洋研究所 资源保藏类型* (31)培养物 保存方法* (32) 液氮超低温冻结法，-80°C冰箱冻结法，真空冷冻干燥法。本方法简单易行，一次制备菌种，可长期使用，并且减少了染菌风险；接种量容易控制，发酵结果稳定，大幅度提高了阿维拉霉素的生产水平，降低了生产成本；种子液在液氮中冷冻保存，降低了种子变异几率，不用在频繁的进行菌种分纯复壮；生产过程绿色环保，产品生物活性高，无交叉耐药性，无残留，可有效的促进动物生长和预防动物疾病。具体实施例方式 实施例I: ，技术方案如下 (O制备斜面孢子 将在北京北纳创联生物技术研究院购买的MCCC1A01659-产绿色链霉菌，菌株保藏编号为1A01659，接种到斜面培养基中，进行斜面培养得到斜面孢子，斜面表面充满灰白色至微灰色孢子； (2)制备冻存种子液a、将上述斜面孢子接种到IOOml种子培养基中，接种量为O.2X IO7个孢子，培养温度28°C，培养时间24h，得到种子液，种子液中固形物占种子液总量的20%V/V ； b、在上述得到的种子液中加入等体积质量分数为40%的甘油水溶液，混匀制成甘油种子液，分装在冻存管中在液氣中保存、待用； (3)种子培养将冻存种子液按O.02%V/V接到种子培养基中，培养得到种子液，种子液中固形物占种子液总量的20%V/V ； (4)发酵培养按5%的接种量将种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养。发酵完毕，将发酵液过滤，菌丝体用甲醇浸提，浸提液浓缩后结晶得到阿维拉晶体。其中，斜面培养基的培养条件及成分为g/L :玉米淀粉20.0，KNO3 I. O，K2HPO4 O. 5，CaCl2 2. O,琼脂30. O,培养基pH7. O ;培养温度28°C，培养周期6天。其中，种子培养基的培养条件及成分为g/L :黄豆饼粉15. 0，酵母粉25. 0，葡萄糖5. 0，糊精 20. O, CaCl22. O, CaCO3L O, ρΗ7· O ;培养温度 28°C，通气量 l:lvvm，转速 150rpm,培养时间24h。其中，发酵培养基的培养条件及成分为g/L :玉米淀粉40. 0，葡萄糖20. 0，黄豆饼粉 10. O, CaCl2 2. O, CaCO3 4. O, NaCl I. O, ρΗ7· 2 ;培养温度 27. 5°C，通气比 1:0. 5vvm，罐压 O. 05MPa,转速 80rpm 培养 200h。实施例2: ，技术方案如下 (O制备斜面孢子 将在北京北纳创联生物技术研究院购买的MCCC1A01659-产绿色链霉菌，菌株保藏编号为1A01659，接种到斜面培养基中，进行斜面培养得到斜面孢子，斜面表面充满灰白色至微灰色孢子； (2)制备冻存种子液 a、将上述斜面孢子接种到IOOml种子培养基中，接种量为O.5X IO本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种发酵生产阿维拉霉素的方法，其特征为：技术方案如下：（1）制备斜面孢子；（2）制备冻存种子液；（3）种子培养；（4）发酵培养。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩风华，李国栋，邹君彪，邓健，黄苓，
申请(专利权)人：江西兴鼎科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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