一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法，特点在于采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液供试品进行检测，然后采用外标法计算其效价。本发明专利技术采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液效价进行检测，其方法简便、快速，易于操作，结果准确，重复性好，灵敏度高，当甲基金霉素发酵液效价在10‑200 u/ml之间时，均有较好的线性关系，其线性相关系数为0.9991。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化学分析
，尤其涉及一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法。
技术介绍
去甲基金霉素，别名地美环素、去甲基氯四环素、DMCT。本品抗菌谱与金霉素相似，其特点是作用比四环素、土霉素强，比金霉素稳定。临床用于肺炎、尿路感染、淋病、细菌性痢疾、布氏杆菌病及小儿猩红热等。去甲基金霉素抗菌活性较四环素强，吸收较好。是广谱抗生素，起抑菌作用。其抗菌谱包括许多革兰阳性和阴性菌、立克次体、支原体、衣原体、放线菌等。现主要用于立克次体病、布氏杆菌病、淋巴肉芽肿、支原体肺炎、螺旋体病、衣原体病，也可用于敏感的革兰阳性球菌或革兰阴性杆菌所引起的轻症感染。去甲基金霉素的结构如下：目前去甲基金霉素发酵液的检测方法使用的是分光光度法进行检测，加入一定的三氯化铁显色剂后进行测定，在检测过程中处理麻烦，并且显色时间长，三氯化铁本身性质不稳定。因此开发一种能够快速、准确测定去甲基金霉素发酵液效价的方法一直是有待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种方法简便、快速，易于操作，结果准确，重复性好的去甲基金霉素发酵液效价的检测方法。一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液供试品进行检测，然后采用外标法计算其效价。所述高效液相色谱法的色谱仪条件为：色谱柱：C18柱；检测器：DAD检测器；流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液＝20-30：80-70；流速：0.80-1.20ml/min；>进样量：10-20ul；检测波长：250-260nm。所述C18柱的规格为：长度250mm或150mm，内径4.6mm，填料粒径5um。所述去甲基金霉素发酵液先用0.15mol/L盐酸溶液溶解后再配制成供试品。所述用盐酸溶液溶解后的甲基金霉素发酵液效价在10-200u/ml。本专利技术采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液效价进行检测，其方法简便、快速，易于操作，结果准确，重复性好，灵敏度高，当甲基金霉素发酵液效价在10-200u/ml之间时，均有较好的线性关系，其线性相关系数为0.9991。附图说明图1为去甲基金霉素发酵液效价对照品的HPLC检测图谱；图2为去甲基金霉素发酵液效价的HPLC检测图谱；图3为去甲基金霉素发酵液效价的线性关系图与回归方程。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好的理解专利技术的技术方案，下面结合具体实施方法对本专利技术所述技术方案作进一步的详细说明。实施例1去甲基金霉素发酵液分析样品的制备：标准品溶液的制备：称取去甲基金霉素发酵液效价对照品10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀。用注射器取溶液经0.45um的有机滤头过滤，得对照品溶液。供试品溶液的制备：称取去甲基金霉素发酵液1.0g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加0.15mol/L的盐酸溶液适量，溶解后定容至刻度，摇匀，放置10min后，过滤，初滤液弃去。用1ml注射器取溶液经0.45um的有机滤头过滤，得供试品溶液；标准品溶液和供试品溶液各制得5份。色谱分析条件：岛津LC-20A液相色谱仪，WatersC18色谱柱（250*4.6,5um）；流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液＝（20:80），流速：1.0ml/min；进样量：20ul；检测波长：254nm。柱温箱35℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积为2834815，RSD为0.12%；供试品溶液的5个样品所得峰面积平均值为3898300，RSD为0.07%。根据公式：去甲基金霉素发酵液效价：a=A样*C标/A标M样*nA样:发酵液样品的峰面积；A标:标准品的峰面积；C标:标准品的效价（u/ml）；M样:发酵液的质量（g）；n:发酵液的稀释倍数。采用外标法将标准品和供试品平均代入即可得供试品去甲基金霉素的效价为11806u/g。本专利技术实施例1所述检测方法的方法学考察：（1）精密度实验称取同一去甲基金霉素发酵液，进行6次重复试验，峰面积表1：表1去甲基金霉素发酵液效价重复试验的面积次数123456峰面积389830038870603897068389518138865953869293峰面积RSD为0.28%，结果表明，本方法检测去甲基金霉素发酵液效价精密度高，重现性好。（2）线性关系考察根据专利技术所述方法，用50ml的容量瓶配制效价为1000u/ml的对照品储备液，加纯化水分别稀释成效价浓度分别为10u/ml、20u/ml、50u/ml、100u/ml、150u/ml、200u/ml，按照本方法，对样品浓度（X）和峰面积（Y）进行数据回归分析，线性回归方程为Y=30416X-78136，线性关系如图3所示，R2=0.9991，结果表明去甲基金霉素发酵液效价在10-200u/ml浓度范围内，峰面积和浓度呈良好的线性关系。（3）加样回收实验准确称取已知含量的去甲基金霉素发酵液效价适量，再分别精密加入一定量的去甲基金霉素发酵液效价样品80%，100%，120%，使供试品溶液中的去甲基金霉素发酵液效价在去甲基金霉素发酵液效价标准曲线的高、中、低区域各3份，按照本专利技术项下的操作，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为99.46%，RSD为0.58%，表明该方法加样回收率好。综上表明本专利技术所述含量检测方法稳定性好，精密度高，适合去甲基金霉素发酵液效价的测定。实施例2样品及标准品配制同实施例1。色谱分析条件：岛津LC-20A液相色谱仪，WatersC18色谱柱（150*4.6,5um）；流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液＝（30:70），流速：0.9ml/min；进样量：20ul；检测波长：250nm。柱温箱30℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积为2723203，RSD为0.25%；供试品溶液的5个样品所得峰面积平均值为4006298，RSD为0.31%。根据公式：去甲基金霉素发酵液效价：a=A样*C标/A标M样*n。采用外标法将标准品和供试品平均代入即可得供试品去甲基金霉素发酵液效价为11109u/g。实施例3样品及标准品配制同实施例1。色谱分析条件：WatersC18色谱柱（150*4.6,5um）；流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液＝（20:80），流速：0.8ml/min；进样量：20ul；检测波长：260nm。柱温箱40℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积2972108为，RSD为0.32%；供试品溶液的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液供试品进行检测，然后采用外标法计算其效价。

【技术特征摘要】
1.一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液供试品进行检测，然后采用外标法计算其效价。
2.按照权利要求1所述的去甲基金霉素发酵液效价的检测方法，其特征在于所述高效液相色谱法的色谱条件为：
色谱柱：C18柱；
检测器：DAD检测器；
流动相：乙腈：0.5%磷酸溶液＝20-30：80-70；
流速：0.80-1.20ml/min；
进样量：10-20ul；
检测波长：250-260n...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈红丽，
申请(专利权)人：宁夏泰瑞制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：宁夏;64