使用氨基酸分析仪测定氨基葡萄糖的方法技术

本发明专利技术涉及一种使用氨基酸分析仪测定氨基葡萄糖的方法，该方法可用于对食品、保健食品、药品或其原材料中的氨基葡萄糖及其类似物的定性定量测定。该方法包括如下步骤：提供氨基酸分析仪、色谱柱阳离子交换树脂柱、和色谱洗脱用流动相，使用规定的色谱分析条件，制备供试品溶液和对照品溶液等，对相关测试物进行测试。通过本发明专利技术的实施，完整地建立了氨基葡萄糖的高效、快速、灵敏和准确的定性定量分析方法，为氨基葡萄糖在食品、保健食品和药品的应用和检测奠定了良好基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种食品、保健食品、药品或其原材料中的氨基葡萄糖及其类似物的定性定量测定方法。
技术介绍
氨基葡萄糖是一种可以人体内合成的物质，是形成软骨细胞的重要营养素，是健康关节软骨的天然组织成份，亦是软骨细胞进行生物合成与代谢必不可少的底物。随着年龄的增长，人体内的氨基葡萄糖的缺乏越来越严重，以致引发骨关节疾病和骨关节炎。大量医学研究表明：氨基葡萄糖可以帮助修复和维护软骨，并能刺激软骨细胞的生长，改善关节活动，缓解关节疼痛。它对治疗风湿性关节炎症有良好的疗效，是合成抗生素和抗癌药物的主要原料，还可应用于食品，化妆品和饲料添加剂中。目前有多种检测方法用于食品、保健食品及药品中氨基葡萄糖含量的测定，例如在GB/T20365-2006中采用液相色谱法进行测定，此外还有分光光度法、液相色谱衍生化法、气相色谱衍生化法、薄层色谱法、旋光法、毛细管电泳法及液质分析法等。当食品、保健食品及药品中复配组分较多时，上述方法具有多种瓶颈问题，如操作复杂、影响因素多、专属性不强、灵敏度低、或不易推广等。随着氨基葡萄糖在保健食品及药品中越来越广泛的应用，建立一套快速、灵敏、简便、准确的分析方法迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种食品、保健食品、药品或其原材料中的氨基葡萄糖及其类似物的定性定量测定方法，并且期待这种方法具有快速、灵敏、简便、准确等一个或者多个方面的优点。已经出人意料地发现，使用本专利技术方法能够有效地实现上述一个或多个目的。本专利技术基于此发现而得以完成。为此，本专利技术第一方面提供了一种测定制品中的氨基葡萄糖或其类似物的方法，该方法使用氨基酸分析仪进行测定，包括如下步骤：(1)提供分析仪器氨基酸分析仪；(2)提供色谱柱阳离子交换树脂柱，色谱柱的长度10-30cm，直径3-10mm；(3)提供色谱洗脱用流动相，该流动相选自：pH2-7柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、其他酸/相应盐缓冲液、或pH7-14氢氧化钠缓冲液；(4)色谱分析条件：氨基酸分析仪泵流速10-100ml/h；色谱柱柱温30-100℃；反应温度30-150℃；色谱分析时间3-60min；检测波长200-800nm；进样量2-50μl；(5)供试品溶液的制备：取相当于含0.5mg-250mg氨基葡萄糖的供试品，精密称定，置于250ml容量瓶中，加水150ml稀释，超声处理15min，冷却后定容至刻度，经0.45μm的微孔滤膜过滤，续滤液作为供试品溶液；(6)对照品溶液的制备：取盐酸氨基葡萄糖对照品1-200mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用水稀释并定容至刻度作为对照品储备液，取对照品储备液适量，稀释成浓度为1-1000μg/ml对照品溶液；(需要说明的是，使用盐酸氨基葡萄糖配制的对照品溶液可以用于测定其它形式的氨基葡萄糖例如用于测定硫酸氨基葡萄糖，只要在最后计算时作简单的换算即可)。(7)辅料溶液的制备：如果所述制品中存在辅料且已知其组成，则按处方比例称取与供试品溶液制备时所取供试品相当量的辅料，精密称定，置于250ml容量瓶中，加水稀释并定容至刻度；(8)在上述色谱分析条件下，采用氨基酸分析仪分析，分别将对照品溶液、供试品溶液及辅料溶液注入色谱仪，记录色谱图；读取对照品溶液和供试品溶液色谱图中氨基葡萄糖或其类似物峰的保留时间和峰面积；使用对照品溶液浓度与峰面积计算其线性回归方程，在该线性回归方程的相关系数大于0.999％的情况下，利用样品保留时间对供试品进行定性，利用线性回归方程对供试品进行定量。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述制品选自：包含氨基葡萄糖或其类似物的食品、保健食品、药品，或者制备它们的氨基葡萄糖或其类似物原料。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述氨基葡萄糖类似物选自：盐酸氨基葡萄糖、硫酸氨基葡萄糖、氨基葡萄糖硫酸钾盐、氨基葡萄糖枸橼酸钙等氨基葡萄糖有机酸盐及氨基葡萄糖无机酸盐等。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述辅料色谱图中应未出现与对照品溶液色谱图主峰保留时间一致色谱峰。换言之，如果存在，辅料色谱图中出现色谱峰应不干扰对照品溶液色谱图的主峰。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述阳离子交换树脂柱的色谱柱的长度20cm，直径5mm。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述流动相是pH3～pH7的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述柠檬酸/柠檬酸钠组成的流动相中，柠檬酸根浓度为0.01M～0.1M。优选柠檬酸根浓度为0.025M～0.05M。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述流动相选自：pH3.20柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、pH4.25柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、pH6.45柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、及其组合。所述流动相的pH值是通过调节柠檬酸和柠檬酸钠两者相对量获得的。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述氨基酸分析仪泵流速为25～50ml/h。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述色谱柱柱温40-80℃。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述反应温度120-140℃。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述色谱分析时间30-50min。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述检测波长530-570nm。根据本专利技术第一方面的方法，其中进样量10-30μl。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤(5)中，取相当于20～100mg氨基葡萄糖的供试品。根据本专利技术第一方面的方法，其中步骤(6)中，制成浓度为1-500μg/ml对照品溶液(例如用于线性相关性试验)。已经发现，本专利技术下文实施例1-11中所检测的制品或对照品，已经确知均不含硬脂酸或硬脂酸镁，并且经各实施例测定，全部试验的供试品和对照品色谱图中主成份色谱峰的拖尾因子(T)均在0.95～1.05范围内，满足药典的要求。但是，通常来讲，对于添加了辅料的制品，例如包含氨基葡萄糖或其类似物的食品、保健食品、药品，通常会添加少许的硬脂酸或硬脂酸镁，以改善产品的物理性能。本专利技术人在补充的试验中发现，当分别向实施例1-9、11所述检品(包括供试品和对照品)中添加0.5％硬脂酸镁时，已经发现，所得色谱图中主成份色谱峰的拖尾因子(T)均在1.21～1.37范围内，这种方法上的缺陷显然是期待克服的，尽管这种缺陷在测定中勉强是可以接受的。本专利技术人在进一步的补充的试验中发现，分别向实施例1-9、11所述检品(包括供试品和对照品)中添加0.5％硬脂酸镁，并且在各实施例所用流动相中额外添加0.02％(w/v)三乙胺(流动相中枸橼酸根仍保持原水平，并且仍通过枸橼酸或其盐的量调节pH值至原水平；下同)，已经发现，所得色谱图中主成份色谱峰的本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定制品中的氨基葡萄糖或其类似物的方法，该方法使用氨基酸分析仪进行测定，包括如下步骤：(1)提供分析仪器氨基酸分析仪；(2)提供色谱柱阳离子交换树脂柱，色谱柱的长度10‑30cm，直径3‑10mm；(3)提供色谱洗脱用流动相，该流动相选自：pH2‑7柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、其他酸/相应盐缓冲液、或pH7‑14氢氧化钠缓冲液；(4)色谱分析条件：氨基酸分析仪泵流速10‑100ml/h；色谱柱柱温30‑100℃；反应温度30‑150℃；色谱分析时间3‑60min；检测波长200‑800nm；进样量2‑50μl；(5)供试品溶液的制备：取相当于含0.5mg‑250mg氨基葡萄糖的供试品，精密称定，置于250ml容量瓶中，加水150ml稀释，超声处理15min，冷却后定容至刻度，经0.45μm的微孔滤膜过滤，续滤液作为供试品溶液；(6)对照品溶液的制备：取盐酸氨基葡萄糖对照品1‑200mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用水稀释并定容至刻度作为对照品储备液，取对照品储备液适量，稀释成浓度为1‑1000μg/ml对照品溶液；(7)辅料溶液的制备：如果所述制品中存在辅料且已知其组成，则按处方比例称取与供试品溶液制备时所取供试品相当量的辅料，精密称定，置于250ml容量瓶中，加水稀释并定容至刻度；(8)在上述色谱分析条件下，采用氨基酸分析仪分析，分别将对照品溶液、供试品溶液及辅料溶液注入色谱仪，记录色谱图；读取对照品溶液和供试品溶液色谱图中氨基葡萄糖或其类似物峰的保留时间和峰面积；使用对照品溶液浓度与峰面积计算其线性回归方程，在该线性回归方程的相关系数大于0.999％的情况下，利用样品保留时间对供试品进行定性，利用线性回归方程对供试品进行定量。...

【技术特征摘要】
1.测定制品中的氨基葡萄糖或其类似物的方法，该方法使用氨基酸分析仪进行测定，包括如下步
骤：
(1)提供分析仪器氨基酸分析仪；
(2)提供色谱柱阳离子交换树脂柱，色谱柱的长度10-30cm，直径3-10mm；
(3)提供色谱洗脱用流动相，该流动相选自：pH2-7柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、其他酸/相应盐缓冲液、
或pH7-14氢氧化钠缓冲液；
(4)色谱分析条件：氨基酸分析仪泵流速10-100ml/h；色谱柱柱温30-100℃；反应温度30-150℃；
色谱分析时间3-60min；检测波长200-800nm；进样量2-50μl；
(5)供试品溶液的制备：取相当于含0.5mg-250mg氨基葡萄糖的供试品，精密称定，置于250ml容量
瓶中，加水150ml稀释，超声处理15min，冷却后定容至刻度，经0.45μm的微孔滤膜过滤，续滤液作为
供试品溶液；
(6)对照品溶液的制备：取盐酸氨基葡萄糖对照品1-200mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，用水
稀释并定容至刻度作为对照品储备液，取对照品储备液适量，稀释成浓度为1-1000μg/ml对照品溶液；
(7)辅料溶液的制备：如果所述制品中存在辅料且已知其组成，则按处方比例称取与供试品溶液制
备时所取供试品相当量的辅料，精密称定，置于250ml容量瓶中，加水稀释并定容至刻度；
(8)在上述色谱分析条件下，采用氨基酸分析仪分析，分别将对照品溶液、供试品溶液及辅料溶液
注入色谱仪，记录色谱图；读取对照品溶液和供试品溶液色谱图中氨基葡萄糖或其类似物峰的保留时
间和峰面积；使用对照品溶液浓度与峰面积计算其线性回归方程，在该线性回归方程的相关系数大于
0.999％的情况下，利用样品保留时间对供试品进行定性，利用线性回归方程对供试品进行定量。
2.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙亮，张华珺，张蓉，邬国庆，邸铮，刘齐，贾伯阳，韩萧茜，
申请(专利权)人：北京市药品检验所，
类型：发明
国别省市：北京;11