测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法，该方法包括如下步骤：提供氨基酸分析仪和色谱柱；配制分离分析用的缓冲液；配制衍生化反应试剂；流动相流速为0.40ml/min，衍生试剂流速为0.35ml/min，柱温57℃，反应器温度为135℃，检测波长570nm，进样量5μl，按梯度洗脱；供试品溶液的配制；对照品溶液的配制和色谱测定。其中色谱测定时按外标法以峰面积计算供试品溶液中游离氨的浓度，并根据供试品溶液配制方法计算复方氨基酸注射液中游离氨的含量。还涉及使用本发明专利技术方法测定的复方氨基酸注射液。本发明专利技术方法呈现如说明书所述优异技术效果，例如快速、简便、灵敏、稳定。

Determination of free ammonia in compound amino acid injection

【技术实现步骤摘要】
测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法
本专利技术属于医药
，涉及一种药品的检测方法，尤其是涉及一种复方氨基酸注射液的检测方法，该方法尤其是用于测定复方氨基酸注射液中的游离氨。本专利技术方法呈现如本专利技术中所述的优异技术效果。
技术介绍
复方氨基酸注射液是由多种氨基酸配制而成的灭菌水溶液，主要用于不能口服或经肠道补给营养以及营养不能满足需要的患者，通过静脉输注本品以满足机体获取氨基酸合成蛋白质的需要。目前，在国家食品药品监督管理总局收录的国产的与“复方氨基酸注射液”有关的国产药品有多达500多个批准文号，2015年版中国药典二部收录的复方氨基酸注射液的药品标准也达5种之多。复方氨基酸注射液在生产及贮藏过程中，氨基酸可以因发生脱氨作用而产生游离氨(即，NH3)。由于复方氨基酸注射液属于大容量肠外营养补充剂，患者使用时间长，且用量大，对于长期输注本品的患者，大量摄入的游离氨可以在一定条件下转化为亚硝酸盐，而亚硝酸盐能使血液中正常携氧的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白而失去携氧能力而引起组织缺氧，且亚硝酸盐有可能在体内转化为强致癌物质亚硝胺，对人体健康有极大害处。因此，应对复方氨基酸注射液产品中游离氨的含量进行严格控制。现有的游离氨测定方法通常采用的是酶催化紫外-可见分光光度法。其原理为：氨与2-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶(GIDH)作用下，将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化，即：被氧化的NADH量与氨的量呈线性关系，可通过340nm吸光值确定NADH量来推定氨的含量。该方法操作过程中存在多步添加试剂的过程，且每一步需严格控制反应时间，结果受人为操作影响较大，易出现波动，且最后一步需每隔2分钟测定一次紫外吸收值至吸光度稳定，操作较繁琐。张永亮文献(张永亮，等，心肌氨基酸代谢与早期急性心肌缺血的关系中国法医学杂志，1993年02期)报道，通过结扎家兔左冠状动脉前降支，对急性心肌缺血时蛋白质的降解和氨基酸代谢进行了研究。用离子交换色谱法测定缺血心肌组织游离氨基酸(酸性、中性、碱性)以及氨含量，发现缺血时大多数游离氨基酸含量上升，丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和组氨酸含量在缺血15min即有明显增加，但苏氨酸、谷氨酸和游离氨基酸总量却随缺血时间的延长而逐渐下降。丝氨酸含量在缺血早期上升，缺血60～480min，含量无明显变化。缺血120min以后，甘氨酸和精氨酸含量逐渐下降。组织氨含量在缺血早期上升，晚期下降。游离氨基酸总量、苏氨酸、甘氨酸、精氨酸以及组织氨含量的降低是缺血心肌氨基酸代谢的特征性变化，并认为测定缺血心肌游离氨基酸及组织氨含量有助于急性心肌缺血的早期诊断。然而，本专利技术人已经发现，上述用于生物样品(即，心肌组织)检测游离氨的张永亮文献方法并不适用于检测市售复方氨基酸注射液中的游离氨。因此，对于需要大批量逐批测定游离氨含量的药品生产企业质量控制部门或药品检验检测机构而言，建立一种快速、简便、灵敏且稳定的复方氨基酸注射液中游离氨测定方法迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种复方氨基酸注射液中的游离氨的定性定量测定方法，期待该方法具有快速、简便、灵敏、稳定等一个或者多个的效果。已经发现，通过本专利技术方法能够获得上述一个或者多个技术效果，本专利技术基于此发现而得以完成。为此，本专利技术第一方面提供了测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法，该方法包括如下步骤：(1)提供测定设备：提供氨基酸分析仪和色谱柱(例如，氨基酸分析仪为日立L-8900型；例如，色谱柱是钠离子型磺酸基强酸性阳离子交换树脂为填充剂的色谱柱，例如色谱柱的规格为4.6mm×60mm，3μm)；(2)配制分离分析用的缓冲液：按照下表的配方，配制分离用缓冲液B1、B2、B3、B4和B5：试剂B1B2B3B4B5水700ml700ml700ml700ml700ml柠檬酸钠，以其二水合物计量6.19g7.74g13.31g26.67g-氢氧化钠0.24g0.8g--8.0g氯化钠5.66g7.07g3.74g54.35g-柠檬酸，以其一水合物计量19.8g22.0g12.8g6.1g-乙醇135.0ml25.0ml9.0ml-100.0ml加水定容至1000ml1000ml1000ml1000ml1000ml；(3)配制衍生化反应试剂：取乙二醇单甲基醚979ml，充入氮气5分钟，加入硼氢化钠83mg，继续充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液R1；取乙二醇单甲基醚401ml，置1000ml量瓶中，加入无水醋酸钠204g，加入冰醋酸123ml，加水336ml，溶解，加水定容至刻度，充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液R2；取乙醇50ml，加水稀释至1000ml，作为氨基酸分析用显色液R3；(上述显色液R1、R2、R3亦可称为衍生化反应试剂、反应试剂、衍生试剂等)(4)色谱条件：作为流动相的缓冲液B1、B2、B3、B4和B5流速为0.40ml/min，衍生试剂R1、R2、R3的流速为0.35ml/min，柱温57℃，反应器温度为135℃，检测波长570nm，进样量5μl，按下表进行梯度洗脱：时间，分钟B1，％B2，％B3，％B4，％B5，％R1，％R2，％R3，％0.01000000505003.010000003.101000006.001000006.1001000014.8001000014.9000100029.0000100029.1000010032.05050032本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法，该方法包括如下步骤：/n(1)提供测定设备：提供氨基酸分析仪和色谱柱；/n(2)配制分离分析用的缓冲液：/n按照下表的配方，配制分离用缓冲液B1、B2、B3、B4和B5：/n

【技术特征摘要】
1.测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法，该方法包括如下步骤：
(1)提供测定设备：提供氨基酸分析仪和色谱柱；
(2)配制分离分析用的缓冲液：
按照下表的配方，配制分离用缓冲液B1、B2、B3、B4和B5：












试剂
B1
B2
B3
B4
B5


水
700ml
700ml
700ml
700ml
700ml


柠檬酸钠
6.19g
7.74g
13.31g
26.67g
-


氢氧化钠
0.24g
0.8g
-
-
8.0g


氯化钠
5.66g
7.07g
3.74g
54.35g
-


柠檬酸
19.8g
22.0g
12.8g
6.1g
-


乙醇
135.0ml
25.0ml
9.0ml
-
100.0ml


加水定容至
1000ml
1000ml
1000ml
1000ml
1000ml；






(3)配制衍生化反应试剂：
取乙二醇单甲基醚979ml，充入氮气5分钟，加入硼氢化钠83mg，继续充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液R1；
取乙二醇单甲基醚401ml，置1000ml量瓶中，加入无水醋酸钠204g，加入冰醋酸123ml，加水336ml，溶解，加水定容至刻度，充入氮气30分钟，作为氨基酸分析用显色液R2；
取乙醇50ml，加水稀释至1000ml，作为氨基酸分析用显色液R3；
(4)色谱条件：
作为流动相的缓冲液B1、B2、B3、B4和B5流速为0.40ml/min，衍生试剂R1、R2、...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵天舒，郭雷，周长明，王铁松，郭洪祝，
申请(专利权)人：北京市药品检验所，
类型：发明
国别省市：北京;11