一种麻附辛制剂马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法技术

本发明专利技术提供了一种麻附辛药物中马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，采用高效液相色谱法测定，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈﹕甲醇（50:50至30：70）为流动相A，以0.01%‑0.10%磷酸为流动相B，检测波长为212‑242nm，理论板数按马兜铃酸Ⅰ峰计算应不低于7000，其目标成分分离度、峰形均良好，且专属性、耐用性均好。

Limit test method of aristolochic acid I

【技术实现步骤摘要】
一种麻附辛制剂马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法
本专利技术涉及药品，具体涉及一种麻附辛制剂马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，属药品
技术背景麻附辛制剂是麻黄附子细辛汤方制成制剂的简称，由附子、麻黄、细辛组成，具有解表散寒，固本通阳的功效。现代研究表明马兜铃酸Ⅰ是毒性成分，具有肾毒性，必须准确的测定其含量，否则无法保证其安全有效。使用《中国药典》2010年版一部中采用的高效液相色谱法测定细辛药材中马兜铃酸Ⅰ及《中国药典》2010年版第一增补本天仙藤药材中马兜铃酸Ⅰ的限量检查方法进行检查，经过试验验证，测定“麻附辛制剂”中马兜铃酸Ⅰ含量，杂质分离效果不好，阴性存在明显干扰，无法对马兜铃酸Ⅰ含量进行准确测定。无法在生产和使用中有效的保证产品的有效性和安全性。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，本专利技术杂质与细辛中马兜铃酸Ⅰ分离效果好，阴性无干扰，专属性、耐用性均良好。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：本专利技术所述的一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于：用高效液相色谱法测定细辛中马兜铃酸Ⅰ的限度含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈的混合溶液=50:50至30:70为流动相A，以0.01%～0.10%磷酸为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为212-242nm。本专利技术所述的一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于：流动相比例0～10分钟，流动相A45%～60%→55%～68%，流动相B55%～40%→45%～32%；流动相比例10～12分钟，流动相A55%～68%→65%～45%，流动相B45%～32%→35%～55%；流动相比例12～40分钟，流动相A45%～65%，流动相B55%～35%。本专利技术所述的一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于：采用高效液相色谱法测定，理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于7000；对照品溶液的制备：取马兜铃酸I对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.1至2.0μg的溶液，制得对照品溶液；供试品溶液的制备：取检品，称取1.0-4.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%-85%甲醇溶液15ml-50ml，密塞，称定重量，超声处理20-60分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用50%-85%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本专利技术所述的一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱长度为3-25cm，内径为2.1-10mm，填充剂粒径为3-10μm。为了更好的理解本专利技术，以下通过本专利技术限度检查方法的方法学研究进一步说明本专利技术的有益效果。方法学旨在进一步说明本专利技术的作用，而非本专利技术的限制。一、制备样品1、制备麻附辛颗粒剂取附子10kg，麻黄7kg，细辛3.5kg，加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮2小时，合并两次煎液，滤过，浓缩至稠膏状，在80℃以下减压干燥，粉碎，与适量糊精混匀，制成颗粒，干燥，整粒，得麻附辛药物的颗粒剂。2、制备不含细辛的阴性颗粒剂取附子200g，麻黄140g，照麻附辛颗粒剂制法，制得不含细辛的阴性颗粒剂。二、药典法和本专利技术法限度检查适用性比较《中国药典》2010年版第一部细辛项下马兜铃酸Ⅰ限度检查法（以下简称“药材法”）、《中国药典》2010年版第一增补本天仙藤项下马兜铃酸Ⅰ限度检查法（以下简称“天仙藤法”）与本专利技术马兜铃酸Ⅰ限度检查法，用于麻附辛颗粒剂细辛马兜铃酸Ⅰ限度检查的适用性比较。1.“药材法”测定麻附辛颗粒剂马兜铃酸Ⅰ含量适用性试验。色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（DIKMA，C18，250×4.6mm，5μm，以下简称“C18”）；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为223nm。理论板数按马兜铃酸Ⅰ峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备：取马兜铃酸Ⅰ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含0.2μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取麻附辛颗粒剂，研细，混匀，取3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25ml，密塞，超声处理40分钟并，放冷，再称定重量，用70%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得。阴性溶液的制备：取阴性制剂同法操作。测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果显示，阴性供试品溶液在对照品相应位置存在干扰，因此“药材法”中采用流动相组成及比例不适用于麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查。2.“天仙藤法”测定麻附辛颗粒剂马兜铃酸Ⅰ含量适用性试验。色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,以1%冰醋酸溶液-0.3%三乙胺溶液（10：1)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为223nm。理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于7000。对照品溶液的制备：取马兜铃酸Ⅰ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含0.2μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取麻附辛颗粒剂，研细，混匀，取3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25ml，密塞，超声处理40分钟并，放冷，再称定重量，用70%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得。阴性溶液的制备：取阴性制剂同法操作。测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果显示，此方法检测，灵敏度低，且在供试品色谱中，供试品自身在目标峰相应位置存在干扰，因此“天仙藤法”中采用流动相组成及比例不适用于麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查。3.本专利技术方法用于测定麻附辛制剂中马兜铃酸Ⅰ含量适用性试验。色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈（60:40）为流动相A，0.08%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为232nm。理论板数按马兜铃酸I峰计算应不低于7000。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0~1055→5845→4210~1258→5542→4512~405545对照品溶液的制备：取马兜铃酸Ⅰ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含0.2μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取取麻附辛颗粒剂，研细，混匀，取3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25ml，密塞，超声处理40分钟并，放冷，再称定重量，用70%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得。阴性溶液的制备：取阴性制剂同法操作。测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液各10μl，注入液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于：用高效液相色谱法测定细辛中马兜铃酸Ⅰ的限度含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈的混合溶液为流动相A ，其比例为50:50至30:70，以0.01%～0.10%磷酸为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为212-242nm。/n

【技术特征摘要】
1.一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于：用高效液相色谱法测定细辛中马兜铃酸Ⅰ的限度含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈的混合溶液为流动相A，其比例为50:50至30:70，以0.01%～0.10%磷酸为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为212-242nm。


2.根据权利要求1的一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于：流动相比例0～10分钟，流动相A45%～60%→55%～68%，流动相B55%～40%→45%～32%；流动相比例10～12分钟，流动相A55%～68%→65%～45%，流动相B45%～32%→35%～55%；流动相比例12～40分钟，流动相A45%～65%，流动相B55%～35%。


3.根据权利要求1的一种麻附辛药物马兜铃酸Ⅰ的限度检查方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵颖，周建军，石红艳，曹珍荣，刘学中，
申请(专利权)人：刘圣梅，
类型：发明
国别省市：山东;37