一种非天然氨基酸N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种非天然氨基酸N‑芴甲氧羰基‑β‑(2‑噻吩基)‑D‑丙氨酸的制备方法，主要解决原工艺中的复杂性，收率低，成本高等技术问题，本发明专利技术制备方法包括以下步骤：第一步，将2‑噻吩甲醇和氯酰化剂经过氯酰化制备成2‑氯甲基噻吩；第二步，将2‑氯甲基噻吩和乙酰氨基丙二酸二乙酯经过乙醇钠反应制得2‑噻吩基丙二酸二乙酯，第三步2‑噻吩基丙二酸二乙酯经过碱皂化、L‑乙酰化酶拆分并和fmoc‑基团反应，将所得L氨基保护产物过滤，将母液收集，加盐酸和甲醇溶液回流反应，经NMR检测反应进程，之后加入fmoc‑osu反应，TLC跟踪检测反应进程，之后经过在经过萃取杂质，酸化等，得到N‑芴甲氧羰基‑β‑(2‑噻吩基)‑D‑丙氨酸。

A non natural amino acid N 9-fluorenylmethoxycarbonyl beta (2 thienyl) method for preparation of D alanine

The invention discloses a non natural amino acid N 9-fluorenylmethoxycarbonyl beta (2 thienyl) method for preparation of D alanine, which mainly solves the complexity of the original process of low yield, high cost of technical problems, the preparation method of the invention comprises the following steps: the first step, 2 thiophene chloride methanol and acylating agent after chloride acylation prepared 2 chloromethyl thiophene; the second step, the 2 chloromethyl thiophene and two ethyl acetamidomalonate after ethanol sodium was prepared by the reaction of 2 thiophene ethyl malonic acid two, third step 2 thiophene ethyl malonic acid by two alkali saponification, acetylation and L split and Fmoc group reaction, the resulting L amino protecting product filtration, the mother liquor is collected, adding hydrochloric acid and methanol reflux reaction, detected by NMR reaction process, after joining the Fmoc OSU reaction, TLC reaction process tracking and detection After, after extraction, acidification, N 9-fluorenylmethoxycarbonyl beta (2 thienyl) alanine D.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽合成、药物多肽等领域，具体涉及一种非天然氨基酸N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸及其中间体的制备方法。
技术介绍
目前现有技术中，非天然氨基酸N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸及其中间体的制备方法路线为：将2-噻吩甲醇通过羟基氯酰化做成2-氯甲基噻吩，再经过和金属钠和乙醇和乙酰氨基丙二酸二乙酯混合合成二乙酯，再加入D-酰化酶拆分得到h-d-thi-oh，再和fmoc-基团反应制得fmoc-d-thi-oh，这种方法操作过程看似简单，但是需要用到相对昂贵的D-酰化酶，且成本高，不适宜商业化生产。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服原工艺中的复杂性，成本高，收率低等技术问题，提供了一种非天然氨基酸N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸及其中间体的制备方法，该方法简单易控制，成本低，适宜于规模化生产。为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是：一种非天然氨基酸N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1），将2-噻吩甲醇加入二氯甲烷中，再加砒啶搅拌，冰浴并通入氯酰化剂进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过萃取碱洗，水洗，盐水洗，得到2-氯甲基噻吩；（2），将2-氯甲基噻吩、乙酰基丙二酸二乙酯和乙醇钠混合在无水乙醇中加热回流反应，冰浴结晶，将结晶物过滤水洗石油醚洗，烘干，得2-噻吩基丙二酸二乙酯；（3），将2-噻吩基丙二酸二乙酯经过氢氧化钠皂化处理，并经过L-酰化酶的处理再加入fmoc-osu和的丙酮，并用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9反应，反应完成后处理好后得固体为fmoc-thi-oh，母液低温保存待用；（4），将母液用乙酸乙酯洗涤，然后加入盐酸和甲醇等比例混合液，加热回流反应，TLC跟踪检测进程，并送NMR验证，至基本反应完成后，分批多次加入fmoc-osu的固体，并TLC跟踪检测进程，反应完成后抽滤，将体系用的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂多次洗涤，之后用盐酸酸化体系，并降温搅拌，得到褐色结晶，即为N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸。所述步骤（1），2-噻吩甲醇、吡啶和氯酰化剂的物质的量比为1:1.5:（1-2），反应的温度为：0-10℃，反应时间为3-5h，所述的氯酰化剂为氯化亚砜、三光气、光气，优选氯化亚砜。所述步骤（2），2-氯甲基噻吩、乙酰基丙二酸二乙酯和乙醇钠的物质的量比为：1:（1-1.4）:（1-1.4），反应温度为40℃至回流，反应时间为4-7h。所述步骤（4），母液和盐酸与甲醇的等比例混合溶液的体积比为1:（0.25-1），反应时间为：48-72h。所述TLC跟踪检测进程的条件：1、醋酸乙酯:二氯甲烷体积比=1:3，2、三氯甲烷:甲醇:乙酸体积比=90:8:2。本专利技术的有益效果：本专利技术制备方法通过用盐酸的有机溶液在加热回流而取代用昂贵的d-酰化酶来脱除乙酰基而制备成h-d-thi-oh，并最终制得N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸，此方法简单易控制，大大简化了工艺，降低了成本，缩短了周期，适用于大规模生产，本专利技术制得N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸收率高，质量也有明显的提高。附图说明图1为本专利技术产物的核磁图谱。图2为本专利技术产物的质谱图谱。具体实施方式下面结合具体实例对本专利技术进行详细的描述，但他们不是对本专利技术的进一步限制。实验所用主要检测仪器：1、岛津20A2、检验条件：色谱柱：4.6*250㎜，sinochromODS-BP5μm3、检测波长：220nm4、流动相：A：0.1%质量百分浓度三氟乙酸溶液B：0.1%质量百分浓度三氟乙酸乙腈混合溶液5、流速：1.0ml/min6、柱温：25℃。实施例1：1.1在2000ml的三口瓶中加入800ml二氯甲烷，之后加入100g2-噻吩甲醇，再加入103g吡啶，充分搅拌，降温至0℃以下，滴加入104g氯化亚砜，在0℃下反应5小时，之后加入400ml冰水，用氢氧化钠调节体系pH值为7-8左右，分层后，二氯甲烷相再用4%质量百分浓度的氢氧化钠洗涤2次，水洗一次，饱和盐水洗涤一次，加入无水硫酸钠充分搅拌干燥，之后50℃浓缩至干得油83.6g，即为2-氯甲基噻吩。1.2在1000ml的三口瓶中加入300ml无水乙醇，之后加入43g乙醇钠，充分搅拌至其全溶，全溶后加入191.5g乙酰氨基丙二酸二乙酯，并调节至40℃保温反应40分钟，之后缓慢加入83.6g的油，充分搅拌后加热回流反应4小时，反应好后加入4倍的冰水中，充分搅拌后抽滤，滤饼即为2-噻吩基丙二酸二乙酯。1.3将2-噻吩基丙二酸二乙酯经过氢氧化钠皂化处理，并经过L-酰化酶的处理再加入fmoc-osu和的丙酮，并用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9反应，反应完成后处理好后得固体为fmoc-thi-oh（保存另用），母液低温保存待用。1.4将所得母液约2L加入5L三口瓶中，之后加入500ml的盐酸和甲醇的等比例混合液，并加热回流48h，TLC跟踪检测，并送NMR验证，至基本反应完成后，分批多次加入fmoc-osu的固体，并TLC跟踪监测反应进程，反应完成后抽滤，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗4次，之后用盐酸酸化体系pH值为1左右，并降温搅拌，产生褐色结晶，得固体39.5g。通过MS、旋光、hplc、NMR对固体进行分析，即为N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸，hplc：98.54%，旋光+29º、MS、NMR符合实际，见图1、2。实施例2：2.1在2000ml的三口瓶中加入800ml二氯甲烷，之后加入100g2-噻吩甲醇，再加入103g吡啶，充分搅拌，降温至0℃以下，滴加入155g氯化亚砜，在5℃下反应4小时，之后加入400ml冰水，用氢氧化钠调节体系pH值为7-8左右，分层后，二氯甲烷相再用4%质量百分浓度的氢氧化钠洗涤2次，水洗一次，饱和盐水洗涤一次，加入无水硫酸钠充分搅拌干燥，之后50℃浓缩至干得油99.4g，即为2-氯甲基噻吩。2.2在1000ml的三口瓶中加入300ml无水乙醇，之后加入61g乙醇钠，充分搅拌至其全溶，全溶后加入195.3g乙酰氨基丙二酸二乙酯，并调节至40℃保温反应40分钟，之后缓慢加入99.4g的油，充分搅拌后加热回流反应5小时，反应好后加入4倍的冰水中，充分搅拌后抽滤，滤饼即为2-噻吩基丙二酸二乙酯。2.3将2-噻吩基丙二酸二乙酯经过氢氧化钠皂化处理，并经过L-酰化酶的处理再加入fmoc-osu和的丙酮，并用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9反应，反应完成后处理好后得固体为fmoc-thi-oh（保存另用），母液低温保存。2.4将所得母液约2L加入5L三口瓶中，之后加入1L的盐酸和甲醇的等比例混合液，并加热回流60h，TLC跟踪检测，并送NMR验证，至基本反应完成后，分批多次加入fmoc-osu的固体，并TLC跟踪监测反应进程，反应完成后抽滤，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗4次，之后用盐酸酸化体系pH值为1左右，并降温搅拌，产生褐色结晶48g。通过MS、旋光、hplc对固体进行分析，即为N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸，hplc：99.34%，旋光+30º、MS、NMR符本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非天然氨基酸N‑芴甲氧羰基‑β‑(2‑噻吩基)‑D‑丙氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1），将2‑噻吩甲醇加入二氯甲烷中，再加砒啶搅拌，冰浴并通入氯酰化剂进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过萃取碱洗，水洗，盐水洗，得到2‑氯甲基噻吩；（2），将2‑氯甲基噻吩、乙酰基丙二酸二乙酯和乙醇钠混合在无水乙醇中加热回流反应，冰浴结晶，将结晶物过滤水洗石油醚洗，烘干，得2‑噻吩基丙二酸二乙酯；（3），将2‑噻吩基丙二酸二乙酯经过氢氧化钠皂化处理，并经过L‑酰化酶的处理再加入芴甲氧羰基琥珀酰亚胺和的丙酮，并用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8‑9 反应，反应完成后处理好后得固体为N‑芴甲氧羰基‑3‑L‑(2‑噻吩基)‑丙氨酸，母液低温保存待用；（4），将母液用乙酸乙酯洗涤，然后加入盐酸和甲醇等比例混合液，加热回流反应，TLC跟踪检测进程，并送NMR验证，至基本反应完成后，分批多次加入芴甲氧羰基琥珀酰亚胺的固体，并TLC跟踪检测进程，反应完成后抽滤，将体系用的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂多次洗涤，之后用盐酸酸化体系，并降温搅拌，得到褐色结晶，即为N‑芴甲氧羰基‑β‑(2‑噻吩基)‑D‑丙氨酸。...

【技术特征摘要】
1.一种非天然氨基酸N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1），将2-噻吩甲醇加入二氯甲烷中，再加砒啶搅拌，冰浴并通入氯酰化剂进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过萃取碱洗，水洗，盐水洗，得到2-氯甲基噻吩；（2），将2-氯甲基噻吩、乙酰基丙二酸二乙酯和乙醇钠混合在无水乙醇中加热回流反应，冰浴结晶，将结晶物过滤水洗石油醚洗，烘干，得2-噻吩基丙二酸二乙酯；（3），将2-噻吩基丙二酸二乙酯经过氢氧化钠皂化处理，并经过L-酰化酶的处理再加入芴甲氧羰基琥珀酰亚胺和的丙酮，并用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9反应，反应完成后处理好后得固体为N-芴甲氧羰基-3-L-(2-噻吩基)-丙氨酸，母液低温保存待用；（4），将母液用乙酸乙酯洗涤，然后加入盐酸和甲醇等比例混合液，加热回流反应，TLC跟踪检测进程，并送NMR验证，至基本反应完成后，分批多次加入芴甲氧羰基琥珀酰亚胺的固体，并TLC跟踪检测进程，反应完成后抽滤，将体系用的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂多次洗涤，之后用盐酸酸化体系，并降温搅拌，得到褐色结晶，即为N-芴甲氧羰基-β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸。2.根据权利要求1所述一种非天然氨基酸N-芴甲氧羰基-...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，张家宝，付等良，钱瑞锦，冯庆贺，
申请(专利权)人：滨海吉尔多肽有限公司，上海吉尔多肽有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32