一种RGD环肽前体的制备方法技术

本发明专利技术涉及多肽合成技术领域，具体公开了一种RGD环肽前体的制备方法，主要包括以下步骤：(1)合成RGD线性多肽树脂；(2)去除天冬氨酸的α羧基保护基；(3)树脂上环化成内酰胺环；(4)去除赖氨酸ε氨基保护基，得到RGD环肽树脂前体。主要解决现有RGD环肽利用液相标记修饰的局限性，通过预先制备环肽树脂前体，可以大幅度提高标记的修饰的复杂度。幅度提高标记的修饰的复杂度。幅度提高标记的修饰的复杂度。

【技术实现步骤摘要】
一种RGD环肽前体的制备方法


[0001]本专利技术涉及多肽合成
，具体涉及一种RGD环肽前体的制备方法。

技术介绍

[0002]RGD肽是一系列包含精氨酸
‑
甘氨酸
‑
天冬氨酸序列的蛋白质结构片段，广泛存在于纤连蛋白、玻连蛋白和骨涎腺蛋白等多种细胞外基质蛋白中，可调节细胞与血清及细胞外基质的附着，也被称为细胞黏附肽。目前，含RGD序列短肽的设计主要有环状RGD肽[Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
D
‑
Phe
‑
Lys]和线性RGD肽，RGD环肽比相应线性肽有着更强的受体结合力和受体特异性。
[0003]RGD肽通过其特有的生物学特性已广泛应用于肿瘤治疗、靶向溶栓药物、骨组织诱导再生、心肌细胞膜损伤修复、抑制细胞黏附以及靶向介导血管内超声评价斑块新生滋养血管等各个领域，有极为广泛的应用前景和市场价值。同时用何种放射性示踪剂标记RGD最适合亲肿瘤显像、如何修饰RGD与药物更具靶向性等等方面都需进一步探索。RGD的应用研究，将对人类健康具有重大意义。
[0004]常规环状RGD肽是通过液相标记的方式来标记实验所需修饰，但由于液相合成过程中原料难以去除的特性，所以每一步反应都需要通过结晶或层析分离，大大降低了收率且标记物无法做多步反应，为了克服这个技术难点，急需对RGD环肽展开相应研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是：提供一种RGD环肽前体的制备方法，使可以通过固相合成的方式标记修饰。
[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供的技术方案如下：
[0007]一种RGD环肽前体的制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)以Fmoc
‑
Asp(Wang Resin)
‑
ODmab为起始树脂，合成RGD线性多肽树脂；
[0009](2)去除天冬氨酸的α羧基保护基；
[0010](3)树脂上环化成内酰胺环；
[0011](4)去除赖氨酸ε氨基保护基，得到RGD环肽树脂前体。
[0012]具体反应式如下：
[0013][0014]图中黑圈代表的是wang Resin，即王树脂。
[0015]优选的，所述步骤(1)RGD线性多肽树脂为D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)
‑
Odmab。
[0016]优选的，所述步骤(1)以Fmoc
‑
Asp(Wang Resin)
‑
ODmab为起始树脂，按照Fmoc固相合成法，依次连接：Fmoc
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(mmt)
‑
OH，Fmoc
‑
D
‑
Phe
‑
OH，得到RGD线性多肽树脂D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)
‑
Odmab。
[0017]优选的，所述步骤(2)的操作包括：取步骤(1)所得RGD线性多肽树脂D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)
‑
Odmab，加入5％水合肼/DMF溶液，15分钟一次，反应两次，具体为加入反应液反应15分钟，抽滤去除反应液，再次加入反应液反应15分钟，一
9.1g；
[0035]2、取上述树脂，加入100ml 5％水合肼/DMF溶液，15分钟一次反应两次，反应结束后用DMF洗涤6次，得到D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)
‑
OH 8.5g；
[0036]3、取上述树脂，加入1.56g PYBOP，1ml DIEA，100mlDMF，反应12小时，反应结束后用DMF洗涤6次，得到{D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)}8.3g；
[0037]取上述树脂，加入100ml 2％TFA/3％Tis/95％DCM混合溶液，15分钟一次反应两次，反应结束后用DMF洗涤10次，得到RGD环肽树脂前体{D
‑
Phe
‑
Lys
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)}7.7g，计算其取代度为0.26mmol/g。
[0038]实施例2：
[0039]RGD环肽标记巯基丙酸，序列{Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
D
‑
Phe
‑
Lys(Mpa)}cyclic，取上述树脂1.15g，加入5ml DMF，314mg Mpa(trt)
‑
OH，324mg HBTU，204ul NMM，反应2小时，洗涤干燥后得到标记后环肽树脂{D
‑
Phe
‑
Lys(Mpa)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)}Cyclic 1.25g，再经切割得到标记后环肽粗品205mg，经HPLC纯化冻干，得到精品95mg，总收率46.3％。MS(MW：691.85)和HPLC(98.15％)。
[0040]实施例3：
[0041]RGD环肽标记炔丙基甘氨酸，序列{Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
D
‑
Phe
‑
Lys(Pra)}cyclic，取上述树脂1.15g，加入5ml DMF，192mg Boc
‑
Pra
‑
OH，324mg HBTU，204ul NMM，反应2小时，洗涤干燥后得到标记后环肽树脂{D
‑
Phe
‑
Lys(Pra
‑
Boc)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RGD环肽前体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以Fmoc
‑
Asp(Wang Resin)
‑
ODmab为起始树脂，合成RGD线性多肽树脂；(2)去除天冬氨酸的α羧基保护基；(3)树脂上环化成内酰胺环；(4)去除赖氨酸ε氨基保护基，得到RGD环肽树脂前体。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)RGD线性多肽树脂为D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)
‑
Odmab。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)以Fmoc
‑
Asp(Wang Resin)
‑
ODmab为起始树脂，按照Fmoc固相合成法，依次连接：Fmoc
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(mmt)
‑
OH，Fmoc
‑
D
‑
Phe
‑
OH，得到RGD线性多肽树脂D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)
‑
Odmab。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的操作包括：取步骤(1)所得RGD线性多肽树脂D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Asp(Wang Resin)
‑
Odmab，加入5％水合肼/DMF溶液，15分钟一次，反应两次，得到D
‑
Phe
‑
Lys(mmt)
‑
Arg(pbf)
‑
Gl...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，竺剑峰，程庆武，张成桂，韩世永，奚嘉麒，
申请(专利权)人：滨海吉尔多肽有限公司，
类型：发明
国别省市：